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1.
试验旨在阐明前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）和F2α（prostaglandin F2α,PGF2α）对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1（cyclooxygenase-1,COX-1））与环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×106个/孔接种于6孔板,以10-7mol/L PGE2和PGF2α分别预处理细胞24 h,以100 ng/mL细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激细胞4、8和12 h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2 mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE2单独作用4、8和12 h后显著上调（P<0.05）;COX-2 mRNA表达量在PGE2单独作用4和12 h后显著上调（P<0.05）,PGE2单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调（P<0.05）。与对照组相比,LPS刺激8和12 h时COX-1 mRNA表达量显著下调（P<0.05）,LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化（P>0.05）;LPS刺激后4、8和12 h时COX-2 mRNA表达量显著上调（P<0.05）,LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调（P<0.05）。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE2处理组在8和12 h时COX-1和COX-2 mRNA表达量均显著上调（P<0.05）,同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调（P<0.05）。PGF2α在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2 mRNA的表达无显著影响（P>0.05）,仅在PGF2α单独处理8和12 h后COX-1 mRNA表达量上调（P<0.05）。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2 mRNA表达具有一定的协同诱导作用。 相似文献
2.
《中国畜牧兽医》2017,(9)
试验旨在阐明前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)和F_(2α)(prostaglandin F_(2α),PGF_(2α))对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1(cyclooxygenase-1,COX-1))与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×106个/孔接种于6孔板,以10-7 mol/L PGE_2和PGF_(2α)分别预处理细胞24h,以100ng/mL细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞4、8和12h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE_2单独作用4、8和12h后显著上调(P0.05);COX-2mRNA表达量在PGE_2单独作用4和12h后显著上调(P0.05),PGE_2单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调(P0.05)。与对照组相比,LPS刺激8和12h时COX-1mRNA表达量显著下调(P0.05),LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化(P0.05);LPS刺激后4、8和12h时COX-2mRNA表达量显著上调(P0.05),LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调(P0.05)。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE_2处理组在8和12h时COX-1和COX-2mRNA表达量均显著上调(P0.05),同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调(P0.05)。PGF_(2α)在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2mRNA的表达无显著影响(P0.05),仅在PGF_(2α)单独处理8和12h后COX-1mRNA表达量上调(P0.05)。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2mRNA表达具有一定的协同诱导作用。 相似文献
3.
本试验旨在观察前列腺素E2受体激动剂(布他前列腺素(butaprost))与雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中转化生长因子β3(TGFβ3)表达的影响,阐明butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ3有无协同调控作用.采用胰酶消化法及机械法分离培养奶牛输卵管上皮细胞,分别将butaprost和雌激素作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中TGFβ3 mRNA表达的影响.结果显示,与0 h作用组相比,雌激素作用16、24和48 h时对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ3的表达量均极显著升高(P< 0.01),4 h的表达量极显著降低(P< 0.01);且受体激动剂butaprost和雌激素有协同调控TGFβ3的效应;加入吲哚美辛后能有效抑制内源性前列腺素对TGFβ3表达的作用.结果表明,butaprost和雌激素可调控奶牛输卵管上皮细胞TGFβ3 mRNA 的表达. 相似文献
4.
旨在探究双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）是否通过调节孕酮（progesterone,P4）、雌二醇（oestrogen,E2）和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT （10-10~10-7 mol·L-1）和AR拮抗剂氟他胺（Flu,10-8 mol·L-1）处理（n=3）。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P4和E2水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、B细胞淋巴瘤蛋白2（B cell lymphoma protein 2,Bcl-2）、半胱天冬酶3（caspase 3,CASP3）和活化半胱天冬酶3（active-caspase 3,Act-CASP3）的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期（P<0.05）。10-10~10-7 mol·L-1DHT处理后,P4合成酶表达显著上调（P<0.05）,在10-8~10-7 mol·L-1 DHT时P4合成显著增加（P<0.05）,在10-10~10-8 mol·L-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加（P<0.05）,但10-7mol·L-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降（P<0.05）;在10-8~10-7 mol·L-1 DHT时E2相关合成酶显著减少,并且E2水平显著下降（P<0.05）,在10-9和10-7 mol L-1 DHT时E2受体ERα蛋白显著下调（P<0.05）,在10-10~10-7 mol·L-1 DHT时ERβ和GPER显著增加（P<0.05）。经Flu处理后部分解除DHT对P4和E2的调控。此外,10-10~10-7 mol·L-1 DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡（P<0.05）。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P4和E2合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。 相似文献
5.
《中国兽医学报》2016,(4):640-645
通过观察神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞促炎酶类表达的影响,以期探讨NPY在神经系统炎症的发生发展中的作用。首先利用MTT法检测NPY对BV-2细胞活性的影响,从而确定作用浓度。然后,利用荧光定量PCR和蛋白质印迹法,分别检测NPY对LPS诱导的BV-2细胞中一氧化氮合酶(i NOS)和环氧合酶-2(COX-2)表达的影响。其次,添加NPY受体阻断剂后,观测对NPY效应的影响。结果显示1~1 000 nmol/L的NPY对BV-2无细胞毒作用;NPY预处理1 h后LPS刺激6 h,NPY+LPS组BV-2细胞中i NOS和COX-2 mRNA的表达水平和蛋白的含量显著低于LPS组;BV-2细胞系上检测到Y1受体、Y2受体、Y4受体和Y5受体的存在;加入Y1受体阻断剂后,对样品中i NOS和COX-2 mRNA的表达水平和蛋白的含量进行检测,发现NPY的抑炎作用消失。结果表明,NPY通过作用于Y1受体抑制LPS诱导的促炎酶类表达。 相似文献
6.
[目的]研究睾酮对新生期大鼠支持细胞和精原细胞中血小板反应蛋白解整合素金属肽酶16(a disintegrin and metalloprotease with thrombospondin motifs 16,Adamts16)基因表达的影响,以及Adamts16基因与大鼠隐睾的关系。[方法]利用RT-qPCR技术检测不同浓度睾酮(10-6、10-7、10-8、10-9mol/L)培养大鼠支持细胞和精原细胞6、12、24 h后Adamts16基因的mRNA相对表达量,确定睾酮诱导支持细胞和精原细胞Adamts16基因mRNA表达的最佳剂量和最佳时间。应用HE染色法观察出生2、4、8 d野生型和Adamts16基因敲除型大鼠的睾丸位置。[结果]用10-6mol/L睾酮诱导大鼠支持细胞6 h时Adamts16基因的mRNA相对表达量最高。用10-7mol/L睾酮诱导大鼠精原细胞24 h时Adamts16基因mRNA相对表达量最高。与野生型大鼠相比,Adamt... 相似文献
7.
为研究大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织而蓄积的PGE2与感染组织表达趋化因子的相关性,本试验采用浓度为1×10^-6和1×10^-5 mol/L的COX-2和mPGES-1抑制剂处置体外培养的大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织12 h,用RT-qPCR法检测组织中CXCL1、CXCL2、CXCL3和CXCL5 mRNA表达变化。结果显示:与对照组相比,大肠杆菌感染后12 h奶牛子宫内膜组织中趋化因子mRNA的表达量显著升高,而COX-2和mPGES-1抑制剂处置显著降低趋化因子mRNA的表达。结果表明:病理性蓄积的PGE2也许是大肠杆菌所致奶牛子宫内膜组织炎症反应过程中趋化因子等炎症介质表达的必要条件。 相似文献
8.
本研究旨在探讨不同浓度的神经肽P物质(SP)刺激对内蒙古白绒山羊皮肤干细胞BMP2、BMP4基因表达的影响。本研究分别采用0(对照组)、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9 mol/L 5个浓度梯度的SP对内蒙古白绒山羊皮肤干细胞进行刺激处理,并分别于第0、7、14及21天采用实时荧光定量PCR方法鉴定BMP2和BMP4基因的表达量。结果显示,1×10-6和1×10-8 mol/L的SP促进BMP2、BMP4的表达;在7和14 d时,SP 1×10-8 mol/L组BMP2的表达量显著高于SP 1×10-6 mol/L组(P<0.05),SP 1×10-6 mol/L组BMP4的表达量与SP 1×10-8 mol/L组差异不显著(P>0.05);在21 d时,SP 1×10-8 mol/L、SP 1×10-6 mol/L组BMP2、BMP4的表达量都明显降低,其中SP 1×10-8 mol/L组BMP2的表达量显著高于1×10-6 mol/L组(P<0.05),SP 1×10-6 mol/L组BMP4的表达量与SP 1×10-8 mol/L组差异不显著(P>0.05)。结果表明,SP 1×10-6和1×10-8 mol/L不仅对内蒙古白绒山羊皮肤干细胞BMP2、BMP4基因的表达量有影响,而且为皮肤干细胞的定向分化提供理论基础。 相似文献
9.
【目的】探讨双氢睾酮(DHT)对小鼠颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。【方法】给3周龄的昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG,10 IU/只)以获取颗粒细胞,颗粒细胞传代后48 h HE染色鉴定形态,绘制颗粒细胞的生长曲线,免疫荧光法鉴定促卵泡素受体(FSHR)的表达。当第2代颗粒细胞汇合度达到50%时,先用无血清的DMEM/F12培养基饥饿处理12 h,然后在培养基中添加不同浓度的DHT (0、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L),培养48 h后检测颗粒细胞增殖情况,实时荧光定量PCR法及ELISA法分别测定AMH基因及蛋白的表达。在颗粒细胞培养液中分别添加10-6 mol/L Flutamide (雄激素受体(AR)特异性抑制剂)、10-7 mol/L DHT、10-7 mol/L DHT+10-6 mol/L Flutamide、10-5 mol/L DHT、10-5mol/L DHT+10-8 mol/L 11-ketodihydrotestosterone (AR特异性激动剂),分别记为F、D7、DF、D5、DK组,以不添加药物为对照组。培养48 h后,检测各组颗粒细胞增殖及AMH蛋白含量。【结果】体外培养的小鼠颗粒细胞呈梭形或铺路石状,生长曲线呈S形,细胞普遍表达FSHR;与0 mol/L DHT组相比,10-8、10-7 mol/L DHT组细胞增殖分别显著和极显著增加(P＜0.05;P＜0.01),10-5 mol/L DHT组细胞增殖显著降低(P＜0.05);10-7 mol/L DHT组AMH基因的相对表达量和AMH蛋白含量均极显著增加(P＜0.01)。与D7组相比,DF组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著降低(P＜0.01);与D5组相比,DK组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著升高(P＜0.01)。【结论】10-7 mol/L DHT能够显著促进颗粒细胞增殖和AMH表达,而10-5 mol/L显著降低了颗粒细胞增殖以及AMH表达,且AR介导了DHT调控颗粒细胞增殖和AMH表达。 相似文献
10.
旨在研究前列腺素（prostaglandins,PGs）D2与F2α对绵羊黄体（corpus luteum,CL）组织形态、生殖激素及其关键基因与受体表达的影响,并解析其在黄体退化中的相互关系及机理,为保证母畜连续性繁育提供新的理论依据。将16只哈萨克绵羊随机分成4组,在发情周期的黄体期分别子宫肌内注射PGD2、PGF2α、PGD2+PGF2α及等量生理盐水（对照组）,采用HE染色结合物理拍照对比处理前后黄体组织形态变化,ELISA法检测外周血清中P4、E2、PGD2和PGF2α浓度变化;并利用qRT-PCR和Western blot检测关键合成酶基因HPGDS、PGFS及其受体DP1、CRTH2、FP的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,发现PGD2+PGF2α组中黄体退化效果最明显,随后依次是PGF2α组明显大于PGD2组。ELISA结果显示,随着处理后时间的推移,不同试验处理组中,P4浓度均呈显著下降趋势（P<0.05）,其中在PGD2+PGF2α组中该变化趋势最显著（P<0.05）;但E2、PGD2和PGF2α浓度均呈现不同差异性变化,其中,PGD2+PGF2α组中PGD2和PGF2α浓度呈显著下降（P<0.05）,PGF2α组中E2浓度呈显著升高（P<0.05）、PGD2浓度呈显著下降（P<0.05）,PGD2组中E2浓度呈显著下降趋势（P<0.05）、PGD2浓度呈显著升高趋势（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,PGD2+PGF2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量显著下调（P<0.05）,PGFS、CRTH2及FP mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;PGF2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量呈显著下调（P<0.05）,其它基因mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）;PGD2组中HPGDS、DP1、PGFS及FP mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）。同时,在不同受体基因表达量检测时,发现PGD2组中DP1受体表达量显著高于CRTH2受体（P<0.05）,而PGF2α组中CRTH2表达量则显著高于DP1（P<0.05）。综上,PGD2无论单独使用还是结合PGF2α使用,均能够促进CL的退化,尤其是二者结合时有明显的协同促溶效应,其作用机制可能与其体内激素水平、关键合成酶及受体类型的表达有关,这为全面认识哺乳动物CL退化的调控机制奠定了基础,也为进一步优化高效繁殖技术（尤其是PGs方案）提供了新的思路。 相似文献
11.
The aim of this study was to clarify the effects of estrogen (E2) on cyclooxygenase-1 (COX-1) and cyclooxygenase-2 (COX-2) gene expression in the cow oviduct tissue in vitro.Quantitative Real-time PCR and Western blotting were used to analyze the mRNA and protein expression of COX-1 and COX-2 at different time points after different concentrations of E2 treatment.The results indicated that the relative expression of COX-1 and COX-2 mRNA reached the highest levels with 10-11 mol/L E2 treatment,the relative expression of COX-1 mRNA reached the highest level at 8 h after treatment;The relative expression of COX-2 mRNA reached the highest level at 2 h after treatment.The relative expression of COX-1 protein increased significantly at the range from 8 to 48 h after E2 treatment.However,we did not detect COX-2 protein expression. 相似文献
12.
试验旨在研究山豆根多糖（SSP）对猪肺泡巨噬细胞3D4/2感染猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine circovirus virus Ⅱ type,PCV2）后炎性因子水平的影响。本试验设空白对照组、PCV2感染组、脂多糖（LPS）对照组和3种浓度（100、200和400 μg/mL）的山豆根多糖组,采用PCV2体外感染猪肺泡巨噬细胞,在培养液中分别加入100、200和400 μg/mL山豆根多糖培养24 h后收集样品,用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞分泌单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-8（IL-8）水平和胞内环氧合酶-1（COX-1）、环氧合酶-2（COX-2）的酶活性,实时荧光定量PCR和Western blotting法分别检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、COX-2基因及其蛋白表达。结果显示,PCV2感染猪肺泡巨噬细胞后极显著提高了MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性（P<0.01）,iNOS、COX-2 mRNA和蛋白表达水平均极显著提升（P<0.01）;100、200、400 μg/mL山豆根多糖处理后,3D4/2细胞MCP-1、IL-8分泌水平和细胞内COX-1、COX-2酶活性均显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,其中400 μg/mL山豆根多糖处理后效果最显著,细胞内iNOS、COX-2基因mRNA表达水平同样显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）;100、200、400 μg/mL山豆根多糖处理后,显著或极显著抑制了由PCV2诱导的iNOS蛋白表达量的增加（P<0.05;P<0.01）,经200、400 μg/mL山豆根多糖处理后显著抑制COX-2蛋白表达量的增加,400 μg/mL山豆根多糖处理效果最佳。综上所述,山豆根多糖可在一定程度上抑制PCV2感染所引起的促炎症因子mRNA表达的升高及其蛋白的表达,起到一定的缓解炎症的作用。 相似文献
14.
15.
为探讨催乳激素对体外培养的山羊乳腺上皮细胞脂肪酸合酶（fatty acid synthase，FASN）基因转录活性的调控作用，试验分别用不同浓度的胰岛素（insulin，INS）、雌激素（estradiol，E2）、催乳素（prolactin，PRL）及不同激素组合（INS+PRL、E2+INS+PRL）处理山羊乳腺上皮细胞24 h，提取细胞总RNA，采用实时荧光定量PCR检测催乳激素对FASN基因mRNA表达水平的影响。细胞转染山羊FASN基因启动子报告基因载体，同样用不同浓度的胰岛素、雌激素、催乳素及激素组合处理24 h，利用双荧光素酶报告基因系统检测催乳激素对FASN基因启动子活性的影响。结果发现，用雌激素、催乳素处理山羊乳腺上皮细胞后，FASN基因启动子活性及mRNA水平极显著或显著上调（P<0.01；P<0.05），雌激素浓度为10、100 μmol/L和催乳素浓度为0.1和1 μg/mL时效果最为明显，而胰岛素对FASN基因的启动子活性及mRNA水平没有显著影响（P>0.05）。用不同激素组合（INS+PRL、E2+INS+PRL）处理细胞均能显著上调FASN基因启动子活性及mRNA表达水平（P<0.05）。结果表明，雌激素和催乳素能够调控FASN基因的转录活性，为进一步研究泌乳过程中FASN基因的分子调控机制提供理论依据。 相似文献
16.
为研究胸腺上皮细胞（thymic epithelial cells,TECs）中雌激素（estradiol,E2）对长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）表达的调节作用,本研究首先培养小鼠胸腺髓质上皮细胞系1（medullary thymic epithelial cell line 1,MTEC1）,经50 nmol/L E2作用24 h后,观察对细胞表型变化的影响,并用CCK-8试剂盒检测细胞活力;提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术验证E2对lncRNA-2410006H16Rik表达的调节作用;最后运用RT-PCR技术扩增其目的基因,构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik重组过表达载体。结果显示,50 nmol/L E2能够明显抑制MTEC1的增殖,且相较于对照组细胞,50 nmol/L E2处理组细胞的D450 nm值极显著降低（P<0.01）,表明其细胞活力极显著下降。实时荧光定量PCR结果显示,在E2作用下,lncRNA-2410006H16Rik在MTEC1细胞中的表达极显著上调（P<0.01）,约是对照组的2倍,与高通量测序结果一致。经RT-PCR、双酶切及测序结果分析显示,试验成功构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik表达载体。结果表明,TECs中lncRNA-2410006H16Rik的表达与E2作用密切相关,为后续在细胞水平上进一步验证lncRNA-2410006H16Rik的调节功能奠定了基础。 相似文献
17.
旨在探索牦牛卵母细胞成熟过程中细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450arom, CYP19A1)对内源性雌激素(17β-estradiol, E2)分泌、卵母细胞自噬和后续胚胎发育能力的影响。本研究在牦牛卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)体外成熟过程中,分别用等体积生理盐水、最佳浓度E2(10-7 mol·L-1)、CYP19A1诱导剂黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1, AFB1)、CYP19A1抑制剂双酚A(bisphenol A, BPA)处理,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)、Western blot和免疫荧光技术检测各组成熟COCs中CYP19A1表达水平,酶联免疫吸附方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测诱导和抑制CYP19A1处理组牦牛成熟COCs培养液中E2水平;分析不同处理组C... 相似文献