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鸭茅为世界重要禾本科牧草之一,多为四倍体或二倍体。快速鉴定其倍性可为鸭茅遗传背景研究及多倍体材料的创制提供技术支撑,加快育种进度。采用流式细胞术,筛选4种细胞核DNA解离液,对比2种流式细胞仪检测方法,最终建立鸭茅倍性鉴定高效技术体系。结果表明,不同解离液处理后的细胞核DNA含量存在一定差异。利用Otto制备鸭茅细胞核悬浮液效果较理想,峰型完整,碎片峰较少且样本峰信号清晰,其荧光变异系数为5%左右。内外标法检测各有优势,外标法检测更快速更简便,而内标法准确性更高。在以外标检测为主的基础上,共在46份鸭茅材料中鉴定出二倍体鸭茅22份,四倍体鸭茅24份,为鸭茅遗传育种提供材料。 相似文献
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鉴于流式细胞术对植物染色体倍性鉴定的高效性,本次试验利用流式细胞仪对广西壮族自治区蚕业技术推广总站桑树种质资源圃的90份桑树种质资源染色体倍性进行了鉴定,以期获得准确的染色体倍性,为桑树育种提供数据。流式细胞仪检测的制样方法为刀片快速切碎法,利用MgSO_4解离液进行解离,经过2次离心漂洗,获得单细胞核悬浮液,经染色后过滤上机检测,共收集10 000个细胞核,利用Flowjo7.6软件进行分析,可以获得染色体倍性数据和混倍体所含不同染色体倍性细胞的比值。本次试验共鉴定出桑树二倍体32份、三倍体18份、四倍体30份、混倍体10份,并对多倍体和混倍体育种方面进行了简要分析,为桑树的多倍体育种和运用研究提供参考。 相似文献
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以鸭茅（Dactylis glomerata）和多花黑麦草（Lolium multiflorum）不同倍性的种质为材料,对流式细胞仪测定牧草多倍体的技术方法和结果进行评价,旨在利用流式细胞仪技术快速确定供试牧草的染色体倍性。采用根尖染色体计数法确定鸭茅‘北绿’品种和多花黑麦草‘Mammoth B’品种为四倍体,以这两个品种的相对核DNA含量和核内DNA复制的平均周期值作为参照,经流式细胞仪检测表明,鸭茅‘早生绿’品种和PI316209种质材料为四倍体,种质PI237602和PI368880为二倍体,PI316209种质的倍性与种质背景信息所提供的倍性存在差异;多花黑麦草‘Musashi’品种为四倍体,‘Tachimasari’和‘Wasehope Ⅲ’两个品种为二倍体。研究结果为流式细胞仪如何在同一物种范围内检测不同倍性样品提供了依据。 相似文献
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为揭示鸭茅栽培品种与野生材料间遗传多样性的差异,本研究利用25对SSR引物对23份鸭茅材料(包括品种、四倍体、二倍体等)进行扩增,获得了251条清晰条带,平均每对引物扩增10.04个条带,多态性比率为100%,多态性信息含量(PIC)的变化范围为0.24(A01E14)～0.42(A01F24,A03B16),平均值为0.33。23份材料的遗传距离变化范围为0.1065～0.6061,平均遗传距离为0.3870,6个栽培品种的平均遗传距离为0.3088,低于所有材料遗传距离的平均水平。聚类分析将相似地理来源、相同倍性和品种分别聚类,主成分分析与聚类分析结果一致。AMOVA分析结果表明,类群内的遗传变异大于类群间的遗传变异;不同类群的遗传多样性比较表明,野生材料类群与栽培品种类群遗传多样性差异不明显,而四倍体类群较二倍体类群具有更丰富的遗传多样性。 相似文献
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1.本文研究了四川省桑树品种资源163份材料染色体的倍数性,发现其中三倍体13个,四倍体2个,六倍体12个,八倍体1个,其余135个为二倍体。 2.在163份材料中,栽培型119个,野生型44个,栽培型中三倍体6个,其余113个皆为二倍体。野生型中三倍体7个,四倍体2个,六信体12个,八倍体1个。多倍体数占野生型总数的一半。表明野生型中有极为丰富的多倍体。 3.在已进行分类鉴定的104份材料中,分属桑树8个种。在不同种群中多倍体数量和倍性均有很大差异,华桑中发现二倍体,三倍体,四倍体,六倍体,八倍体,倍性丰富。在蒙桑和鬼桑中有六倍体,为首次报道。在园叶桑、鸡桑、白桑中有三倍体。 4.多倍体研究在研究桑树起源,分化,遗传育种上具有重要价值。四川省桑树野生资源中,倍性极为丰富,表明四川省在桑树起源研究上有重要地位。多倍体具有许多特殊优良性状。多倍体育种是现代桑树育种的重要方向。 相似文献
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利用流式细胞术可以快速、准确地鉴定植物染色体倍性,但需要针对不同植物样本的制备及具体操作对应用方法进行选择和优化。为了建立适合桑树染色体倍性快速鉴定的流式细胞术应用方法,以桑树幼叶为材料,比较以不同解离液及机械解离方法和不同离心漂洗次数制作样本用流式细胞术检测的效果,并用不同染色体倍性桑品种的幼叶为材料,以效果最佳的方法进行验证试验。优化的样本制备方案为:采集0.2 g桑树幼叶,置于预冷的平面玻璃上,加入Mg SO4解离液后,用双面刀片快速切碎,转移至培养皿中静置3~5 min,用300目细胞筛网过滤至1.5 m L离心管中,得到500μL单细胞核悬浮液,再加入PI溶液(最终质量浓度为50μg/m L)和RNase A溶液(最终质量浓度为30μg/m L),4℃避光环境下染色30 min,经300目细胞筛网过滤后用流式细胞仪检测。如果采集叶片后不能立即进行检测,可在-80℃下保存待测。试验结果还表明,用在-80℃保存10 d和40 d的冷冻幼叶与用新鲜幼叶制备的样本所得到的检测效果相似。初步建立的适合桑树染色体倍性鉴定的流式细胞术应用方法效果最佳,具有细胞碎片少、主峰清晰、杂峰少等优点。 相似文献
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新疆各地区无芒雀麦种质资源丰富,为选择理想倍性育种材料,本研究以18份无芒雀麦为供试材料,用醋酸洋红染色法统计奇台野生无芒雀麦BL-01根尖染色体数目为28条,依据染色体组基数是7,确定其为四倍体(2n=4x=28)。运用流式细胞仪以奇台BL-01材料叶片的相对核DNA含量峰值为参照,测定18份供试材料的G1期、S期和G2期及变异系数,计算出各材料的细胞周期值,旨在快速鉴定无芒雀麦不同群体的染色体倍性。研究结果表明,18份无芒雀麦种质材料中有四倍体和八倍体两种倍性,其中四倍体共12份、八倍体共6份,对品种乌苏1号流式细胞仪鉴定结果为八倍体。 相似文献
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为了了解鸢尾属植物的基因组特点,本试验以25份鸢尾属植物的嫩叶为材料,其中13份以番茄嫩叶为内标、9份以玉米嫩叶为内标,3份采用玉米、番茄嫩叶两种内标,以LB01为解离液,以碘化丙啶（PI）为荧光染料,运用流式细胞仪,检测、收集内标与鸢尾属植物DNA峰形,通过计算获得鸢尾属植物的的DNA C值（指生物体不复制的单倍体细胞核所含DNA含量）：从2.62~6.77 pg不等。结果表明：25份鸢尾属的基因组DNA的C值可分为15组,组间具有显著差异;3份双内标的方差分析表明,同一份材料采用两种内标进行计算得到的C值没有显著差异。本研究可为鸢尾属植物资源的收集、鉴定、保护和育种等提供理论依据。 相似文献
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气相色谱内标法测定双甲脒溶液含量的不确定度评定 总被引：1，自引：0，他引：1
建立了气相色谱内标法测定双甲脒溶液的含量不确定度的评定方法。利用数学模型分析不确定度的来源,并对各分量进行计算,最后得到测定
结果的不确定度报告。本实验的测定结果不确定度为（105.9±2.4）%,影响不确定度的主要因素为内标的加入及重复测量。 相似文献
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Roels SL Van Daele AJ Van Marck EA Ducatelle RV 《American journal of veterinary research》2000,61(9):1074-1079
OBJECTIVE: To determine the prognostic importance of the DNA content and nuclear morphometric variables in melanocytic tumors of cats and dogs. SAMPLE POPULATION: 27 melanocytic tumors of dogs and cats. PROCEDURES: Biopsy specimens were investigated by quantitative image analysis after the Feulgen staining method. The DNA content (index), nuclear diameter, ploidy balance, proliferation index, hyperploidy, and growth fraction (Ki67) were measured. Using 1-way ANOVA and a Pearson correlation test, the relationships between the different variables were tested. Their role in the prognosis in affected dogs and cats was estimated using the Cox regression test with respect to 6 months postoperative survival rate. RESULTS: Significant correlations were found between DNA index and ploidy balance and proliferation index. A significant correlation was also found between hyperploidy and DNA index, and between ploidy balance and proliferation index. Significant differences were found between histologically malignant and benign melanocytic tumors but not between primary malignant tumors and metastatic malignant tumors for DNA index and ploidy balance. No correlation was found between DNA variables and survival time. CONCLUSION AND CLINICAL RELEVANCE: In melanocytic tumors of cats and dogs, DNA index and ploidy balance can be used to differentiate histologically benign from malignant tumors. However, DNA content and nuclear morphometric variables have little value in predicting survival time. The DNA index and ploidy balance provide an additional tool to evaluate melanocytic tumors of cats and dogs. Survival in dogs and cats with melanocytic tumors, however, is not determined by modifications of DNA content or changes in nuclear morphometry of tumor cells. 相似文献
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Merk S Meyer H Greiser-Wilke I Sprague LD Neubauer H 《Journal of veterinary medicine. B, Infectious diseases and veterinary public health》2006,53(6):281-285
Bacterial DNA (Burkholderia cepacia) was prepared from artificially infected equine ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)-blood and lung tissue by using four standard methods (lysis buffer containing proteinase K, phenol/chloroform/isoamylalcohol-extraction, microwave-treatment, heat treatment) and six commercially available kits (Puregene, High Pure PCR Template Preparation Kit, InstaGene, QiaAmp Tissue Kit, DNAzol and Elu-Quik). After a subsequent polymerase chain reaction (PCR), their efficacy and sensitivity were compared. Concerning the detection limits, the simple lysis with a proteinase K-containing buffer led to the best results for EDTA-blood as well as for artificially infected lung tissue. 相似文献
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顶空固相微萃取—气相色谱法测定木糖发酵液中乙醇 总被引：1，自引：0，他引：1
建立了顶空固相微萃取(HS-SPME)和气相色谱(GC)联用测定木糖发酵液中乙醇的方法。针对目标组分详细研究了萃取头的种类、萃取时间、萃取温度、pH值、离子强度及解吸条件对HS-SPME的影响。GC载气(高纯氮气)流速为4.0mL/min,色谱柱为DB-ALC2毛细管柱(30m×0.53mm,2μm),柱温:40℃;在优化的条件下,以叔丁醇为内标物,内标法-校准曲线法定量,测定乙醇的线性范围为50～300μg/L;检出限(3倍噪声)为4.19μg/L,相对标准偏差小于6%;回收率为91.01%～97.90%。该方法用于木糖发酵液中乙醇的测定,结果令人满意。 相似文献