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3种致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
根据毒力因子、致病机理及遗传特性，国际上将致泻性大肠埃希氏菌（E．coli）分为肠致病性E．coli（EPEC）、肠出血性E．coli（EHEC）、肠侵袭性E．coli（EIEC）、肠产毒性E．coli（ETEC）、肠集聚性E．coli（EAggEC）。其中ETEC菌株通过LT和ST致病基因的作用引起腹泻。EPEC的致病性与LEE毒力岛上的eaeA毒力基因有关。EIEC的侵袭性是因为在侵袭性质粒上含有ipaH毒素基因。 相似文献
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大肠杆菌O157 Z4182基因的克隆与表达 总被引：1，自引：0，他引：1
根据大肠杆菌0157z4182基因设计1对引物，并在其5'端分别加入NcoI、XhoI酶切位点，用聚合酶链反应（PCR）从本试验用的大肠杆菌O157及1株产志贺毒素大肠杆菌（STEC）08、1株肠道聚集粘附大肠杆菌（EAggEC)和1株产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）菌株中也扩增出了803BP的DNA片段。以大肠杆菌0157菌株94H的DNA为模板，用上述引物做PCR，将其产物连接到载体质粒pET28a( )，然后转化到宿主菌大肠杆菌LE392，从该菌中提取重组质粒，再将其转化到表达宿主大肠杆菌BL21（DE3），用PCR，限制性内切酶位点分析及核苷酸序列测定法对克隆的重组质粒进行鉴定，表明Z4182基因定向克隆到了载体质粒Pet28a( )。将转化子培养并经IPTG诱导后，做SDS-PAGE电泳，表明该菌株可以表达Z4182基因。本试验为阐明大肠杆菌O157Z4182基因的分布及探讨该基因产物的功能和致病作用奠定了基础。 相似文献
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大肠杆菌O157：H7属于肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E．coli，EHEC），是EHEC的主要血清型。感染大肠杆菌0157：H7可使人息腹泻、出血性结肠炎，也可引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发征。笔者运用胶体金免疫（Colloidal gold immunoassay，GIA）检测卡和荧光PCR技术，对东莞市108份冻肉中的大肠杆菌O157：H7进行了检测，并对2种方法的检测效果进行了分析比较。 相似文献
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大肠杆菌是引起幼畜腹泻的主要病因之一,尤以初生幼畜特别易感,并可导致生长发育迟缓,生产能力低下,甚至造成死亡,给畜牧业的发展造成重大损失.按目前国际上的分类,大肠杆菌大致有6种致病型,包括肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC)、肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic E.coil,EPEC)、肠出血性大肠杆菌(enterohaemrrhagic E.coli,EHEC)、肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasive E.coli,EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(enteroaggregadve E.coli,EAggEC)和弥散性黏附大肠杆菌(difuse adherence E.coil,DAEC). 相似文献
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产肠毒素性大肠杆菌重组菌PSLM004质凿经JaqI酶切，其840bp的片段用^82P-dATP标记后作为STI基因探针。菌落原位杂交 表明，该探针可以和人源、猪源产STI的ELEC有阳性杂交反应，而不与不产STI的载体菌株pBR322、非致病性E.coli和勘察肠道 力有杂交反应。用该探针对35株已知血清型的E.coli、65株从人腹泻分离的E.coli.和7株猪腹泻.coli进行STI基因检测，分别有6株、7株和2株STI探针菌落杂交阳性，阳性率分别为17％（6／35）、11％（7／65）和28％（2／7）。乳鼠生物学试验比较研究表明，70％（11／16）的STI探针检测阳性菌株其乳鼠生物学试验也为阳性，用该探针可以对产STI的ETEC者临床检测和流行病不调查。 相似文献
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A/E大肠杆菌疫苗动物模型的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
致病性和出血性大肠杆菌 (代表株 EPEC E2 34 8和 EHEC O15 7)是婴幼儿腹泻、出血性结肠炎和尿路感染综合征 (尿毒症 )的主要病原菌 ,它们同属于粘附脱落 (Attaching/ Effacing,A/ E)大肠杆菌群 ,具有许多共同的毒力基因 ,定位于致病岛 L EE(the locus of enterocyte effacement)上。本试验主要就 A/ E大肠杆菌致病岛 L EE的 2个主要调节基因 lux和 ler基因对细菌致病性和免疫原性的影响进行了研究。所使用的始发菌株为兔致病性大肠杆菌 RDEC- 1,根据同源重组的原理 ,利用自杀性载体 p CVD44 2技术 ,敲除了位于染色体上的 lux和 ler基因 ,构建了 lux和 ler基因缺失突变株 ,研究了这 2个基因对细菌生长、毒力因子表达的调控作用以及基因缺失突变株的致病性和免疫保护作用。家兔实验研究表明 ,lux基因缺失突变株仍然残存着部分致病作用 ,不足以成为理想的致弱疫苗 ;而 ler基因缺失突变株安全性好 ,具有良好的免疫保护作用 ,是理想的家兔致弱疫苗候选株。这些研究资料为人 A/ E大肠杆菌疫苗 ,尤其是 EHEC O15 7疫苗的研制指明了方向 ,并提供了技术路线。 相似文献
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广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析 总被引：2，自引：0，他引：2
为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。 相似文献
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近年来，噬菌体研究再度成为细菌病原研究的最新热点之一，许多溶源菌的遗传性状、细菌毒力与原噬菌体密切相关，噬菌体控制着一些重要细菌毒素的产生。出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）0157原噬菌体有一个重要的生物学特性就是毒素结构基因是由溶源性噬菌体编码的。这些噬菌体已经从人、牛和猪各种各样临床病例菌株中分离到，但关于这些噬菌体的流行特性、传播规律还有很多尚未阐明，噬菌体的分离是这些工作的基础，本研究使用EHEC O157：H7标准菌株EDL933，对快速分离噬菌体的方法进行摸索和研究，为今后噬菌体的分离提供有价值的技术路线。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2016,(1)
大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规模化猪场共采集断奶仔猪腹泻粪便样品290份,经染色镜检和生化试验鉴定出362株大肠杆菌,应用PCR检测方法对STa、STb、LTa、LTb、paa、AIDA-I、afa E、irp2和EAST1等毒力基因进行检测。结果表明:有286株大肠杆菌携带毒力基因,其中89株(占31.12%)携带EAST1毒力基因,只含有EAST1毒力基因的有49株(占17.13%),同时携带其他毒力基因的有40株(占13.99%)。EAST1毒力基因可以协同F1菌毛、paa基因频繁交叉出现在同一致病菌中,但这些毒力基因编码的毒素之间是否存在协同致病关系尚需进一步研究。 相似文献
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165 (93.7%) of 175 E. coli strains isolated from various materials of different animal species were correctly identified as E. coli with help of commercially available Bactident E. coli (E. Merck, D-6100 Darmstadt). Further 52 strains of the family of Enterobacteriaceae (2x Providencia sp., 2x Salmonella sp., 7 Citrobacter sp., 9 Proteus sp., 15 Klebsiella sp., 17 Enterobacter sp.) were correctly not identified as E. coli by this test. Bactident E. coli is a suitable test for rapid identification of E. coli in veterinary bacteriology. 相似文献
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将携带绿色荧光蛋白基因的质粒转化E.coli K12中,体外分离培养肠肌纤维母细胞,将E.coli K12与肠肌纤维母细胞体外共培养,观察大肠杆菌是否侵入肌纤维母细胞并在细胞内存活.结果表明:在感染后2 h,大肠杆菌可粘附并侵入肌纤维母细胞,有大量成簇状和散状的大肠杆菌侵入细胞,感染后24 h细胞内仍有少量细菌存活.2h感染率和24 h感染率分别为20.3%和3.25%.本试验首次证实大肠杆菌透过细胞膜进入肌纤雏母细胞细胞质,为研究肠道肌纤维母细胞在免疫防御中的作用奠定了一定的基础. 相似文献
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Haemolysin is one type of virulence factor that assists in the pathogenesis of Escherichia coli. Currently, hemolytic activity in E. coli has been attributed to haemolysin genes found in either uropathogenic or enterohemorrhagic E. coli. Both haemolysins are classified as RTX toxins because they both have repeats in toxin domains and share similar operon organization, sequence homology, and mechanisms of action. Haemolytic avian E. coli isolates, however, lack either E. coli haemolysin gene. To investigate the avian E. coli haemolysin, a genomic library was made from an avian pathogenic E. coli. A haemolytic clone that was isolated was shown to contain homology with sheA, an E. coli K- 12 gene which causes haemolysis when present in high copy number. The cloned haemolysin gene, hlyE, lacked the conserved amino acid sequence and accessory genes common to all RTX toxins. DNA hybridizations and polymerase chain reaction amplifications showed that the nucleotide sequences homologous to hlyE were not present in a collection of three O157: H7 E. coli, five haemolytic canine uropathogenic E. coli, one haemolytic O26 E. coli, and three haemolytic avian pathogenic E. coli. Thus we have identified a new E. coli haemolysin distinct from the RTX haemolysins and have shown that some avian pathogenic E. coli possess a haemolysin with no apparent homology to hlyE or RTX haemolysins. 相似文献
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