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1.
以映山红(R.simsii)、马银花(R.ovatum)、满山红(R.mariesii)和云锦杜鹃(R.fortunei)4种杜鹃为实验材料,采用TCA-丙酮法、酚法和TCA-丙酮-酚法3种蛋白质提取方法提取杜鹃叶片蛋白质,并应用双向电泳技术(2-DE)比较分析不同方法的蛋白质提取率、溶解性、完整性等的差异,确立适用于2-DE分析的杜鹃叶片蛋白质提取方法。结果表明,TCA-丙酮法提取的蛋白溶解性差且粘稠,得到的蛋白质点少,不适合杜鹃叶片蛋白的提取;酚法提得的蛋白质溶解性好,蛋白质点多,但是杂质较多,且此法不适用于映山红叶片蛋白的提取;TCA-丙酮-酚法提取的杜鹃叶片蛋白质位点较多且清晰,重复性也好,且4种杜鹃叶片蛋白的提取效果都比较好。因此,TCA-丙酮-酚法被认为最适于杜鹃属植物叶片蛋白质的提取及分析。 相似文献
2.
[目的]通过对4种蛋白质提取方法对比分析,筛选出适于早春植物叶片蛋白质的提取方法。对3种蔷薇科植物不同时期叶片中蛋白质含量及组分进行测定分析,揭示叶片中蛋白质含量和组分的变化规律,为后期开展相应的蛋白组学研究提供理论基础。[方法]4种蛋白质提取方法:酚提取法,改良酚提取法,改良Tris-HCl法和TCA-丙酮法。通过考马斯亮蓝(G-250)染色法和SDS-PAGE法对3种早春植物叶片的蛋白质含量和组分进行测定。[结果]与其他3种蛋白质提取方法相比,利用TCA-丙酮法提取叶片中蛋白质,后期所得蛋白图谱效果最好,蛋白质条带多且清晰。4月初至6月初5个时期叶片中蛋白质含量整体呈"先增长后下降"的变化趋势,不同生长时期华北珍珠梅叶片蛋白质含量均明显低于日本晚樱和西府海棠。SDS-PAGE电泳表明:3种早春植物叶片蛋白质组分丰富,变化多样。花期为4-5月的日本晚樱和西府海棠叶片蛋白质表达的种类相对较多,条带也较清晰;花期为6-7月的华北珍珠梅叶片蛋白质条带和发生明显变化的蛋白质种类都比较少。[结论]TCA-丙酮法是针对3种蔷薇科植物最优蛋白质提取方法。早春蔷薇科植物花期与叶片蛋白质含量相关,开花前蛋白质含量持续增长,在花期达到最高;且花期较早的日本晚樱和西府海棠比花期晚的华北珍珠梅叶片蛋白质含量和蛋白组分高。 相似文献
3.
为开展水稻纹枯病菌蛋白质组学的研究,采用TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法对水稻纹枯病菌蛋白质提取质量进行比较,并建立了双向电泳体系。对电泳后的图谱用Quantity One软件进行分析,结果发现:TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法所获得的蛋白质双向电泳图谱中,分别记录得到557、309和877个蛋白质点。SDS法提取的蛋白质样品杂质较多,存在盐离子和小分子物质干扰,得到的蛋白点较少;TCA-丙酮法提取的蛋白质样品呈黄色,有色素残留;而在TCA-丙酮法的基础上,增加酚/SDS抽提步骤,能够有效地去除样品中的盐离子和色素等杂质,获得背景清晰、分辨率高的蛋白图谱。结果表明,本研究建立了一种优化的TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法,该法适用于水稻纹枯病菌蛋白质双向电泳的提取。 相似文献
4.
《西南农业学报》2015,(6)
为建立一套适用于鉴别"四季芒"成花蛋白表达差异的双向电泳方法,摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以"四季芒"芒果叶片为材料,采用TCA-丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等3种芒果叶片蛋白提取方法,进行SDSPAGE和双向电泳,比较这些方法的提取效果。结果表明,改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高TCA-丙酮法蛋白提取质量。提取液p H能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、2-DE凝胶蛋白点数量和分布。p H 8.5提取液所提蛋白获得最多的2-DE蛋白点,但在小分子区域蛋白分辨率比p H9.0提取液所提蛋白低。TCA-丙酮法所提蛋白在大分子区域2-DE蛋白点分辨率不如改良酚抽提乙酸铵沉淀法,但小分子和高等电点区蛋白点分辨率却明显好于后者。实验表明改良酚抽提乙酸铵沉淀法和TCA-丙酮法有很强的互补性,可以在双向电泳体系中组成双提取法提高蛋白分辨率。 相似文献
5.
以分蘖洋葱叶片为试验材料,比较3种不同蛋白质提取方法对2-DE蛋白质双向电泳结果的影响,并对其中的蛋白上样量、SDS-PAGE凝胶浓度及双向电泳重复性进行筛选与优化。结果表明,与酚提取法和改良的酚提取法相比,TCA-丙酮提取法提取分蘖洋葱叶片总蛋白的操作简便,所得双向电泳图谱背景清晰,蛋白质点圆滑,数量及质量均较好,是一种切实可行的提取分蘖洋葱叶片总蛋白方法。应用Image Master 2D Platinum 7.0软件对图谱进行分析,凝胶上检测到超过650多个蛋白质点,不同凝胶之间蛋白质的匹配率达92.5%,具有较高的分辨率和重复性,建立一套适用于分蘖洋葱叶片总蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法。 相似文献
6.
金心黄杨(Euonymus japonica L. cv. aureo-pictus)叶片总蛋白质提取及双向电泳技术 总被引：1，自引：0，他引：1
通过比较2种不同的植物叶片总蛋白质提取方法(三氯乙酸/丙酮法和酚法)和优化双向电泳各试验环节,建立金心黄杨叶片总蛋白质的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行质谱分析的双向电泳条件。结果采用优化后的酚法进行金心黄杨叶片总蛋白质的提取,IEF蛋白上样量150μg,SDS-PAGE采用12.5%T凝胶,电泳结束后用考马斯亮蓝G-250染色,Melanie 7.0软件分析后得到约274个可分辨蛋白点。 相似文献
7.
对茶树叶片采用3种蛋白质提取方法,并对SDS-PAGE电泳结果进行了比较分析。结果表明,发现利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少。电泳结果显示,蛋白条带清晰,数量多。利用这一方法对冷驯化下不同品种茶树叶片抗寒相关蛋白进行了研究,在云抗43和舒茶早中分别发现了与抗寒相关的23 ku下调蛋白和51 ku上调蛋白,获得了满意的蛋白SDS-PAGE分析结果。 相似文献
8.
《新疆农业科学》2017,(7)
【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。 相似文献
9.
《新疆农业科学》2017,(7)
【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。 相似文献
10.
通过比较2种不同的植物叶片总蛋白质提取方法（三氯乙酸／丙酮法和酚法）和优化双向电泳各试验环节,建立金心黄杨叶片总蛋白质的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行质谱分析的双向电泳条件。结果采用优化后的酚法进行金心黄杨叶片总蛋白质的提取,IEF蛋白上样量150μg,SDS-PAGE采用12．5％T凝胶,电泳结束后用考马斯亮蓝G-250染色,Melanie 7．0软件分析后得到约274个可分辨蛋白点。 相似文献
11.
红海榄根部总蛋白质提取方法的改进和双向电泳体系的建立 总被引：6，自引：1，他引：5
分别采用TCA-丙酮沉淀法、酚法、尿素法、周涵韬法和笔者建立的酚改良法,提取红海榄根部总蛋白质,并进行了SDS-PAGE分析和双向电泳体系的优化.结果表明,酚改良法提取红海榄根部总蛋白质的纯度最高,质量最好,为建立双向电泳分析体系提供了较为理想的蛋白样品,获得了良好的双向电泳图谱.该结果为盐生植物,尤其是盐生木本植物,建立了一套可靠的蛋白提取和双向电泳方法. 相似文献
12.
【目的】研究太子参的最佳蛋白提取工艺和不同参形太子参蛋白条带差异。【方法】选取3种蛋白提取方法(Tris-HCl法、TCA-丙酮法、饱和酚法)对贵州施秉县牛大场太子参种植基地的3种参形太子参进行蛋白提取及SDSPAGE分析,利用响应面分析法对筛选出的最佳蛋白提取方法的提取工艺进行优化。【结果】3种蛋白提取方法中Tris-HCl法提取的蛋白含量较高,经SDS-PAGE分析,太子参蛋白条带大致分布在10 k Da~90 k Da之间,15 k Da处一等参的蛋白表达量明显高于二等参和统货。利用响应面优化法获得提取太子参蛋白的最佳工艺。【结论】获得太子参蛋白的最佳提取工艺:料液比1∶1.32、提取温度25℃、pH值7.47、提取时间1.5 h,还发现不同参形太子参蛋白在15 k Da处的表达量存在明显差异,这可为今后利用蛋白质组学技术进一步揭示不同参形太子参形成的分子机制提供理论依据。 相似文献
13.
使用酚/SDS法、Tris-HCl法及TCA/丙酮沉淀法提取烟草(Nicotiana tabacum)叶片蛋白,从终产物形式、颜色、提取时间、蛋白产量、SDS-PAGE电泳图谱等方面对3种方法进行比较,对提取的烟草叶片蛋白进行Western Blotting检测来评价3种方法提取蛋白的效果。结果表明,与2种常用方法相比,酚/SDS法具有快速、操作方便等特点,提取的蛋白纯度高、种类丰富,可用于Western Blotting检测,是一种合适的提取植物组织中蛋白的方法。 相似文献
14.
通过采用三氯乙酸(TCA)/丙酮法、酚提取法、DTT/丙酮法3种提取方法提取番茄叶片可溶性总蛋白,用150μg和250 μg2种加样量、浓度为12.5％和15％的聚丙烯酰胺凝胶二向电泳进行电泳,发现TCA/丙酮沉淀法提取番茄叶片可溶性总蛋白、加样量为250μg、12.5％聚丙烯酰胺凝胶二向电泳效果较好,从而建立了番茄叶片总蛋白双向电泳技术优化体系.用该体系对转导碱蓬总DNA的耐盐转化番茄叶片全蛋白的差异分析,鉴定出6个蛋白差异点,其中5个特异蛋白在耐盐转化番茄中表达,1个特异蛋白在未转化番茄中表达. 相似文献
15.
[目的]优选人参蛋白质提取的最佳方法,并比较不同生长年份对人参蛋白质含量的影响。[方法]比较丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizol提取法5种人参蛋白质的提取方法,及不同生长年份的人参蛋白质,采用Bradford方法测定蛋白质含量,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白。[结果]丙酮提取法得到的蛋白质纯度最高,电泳条带最清晰完整,且人参蛋白质的含量随生长年份增加而升高。[结论]丙酮沉淀法是一种较好的适用于人参蛋白质提取的方法,5年生人参蛋白质含量最高。 相似文献
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几种提取马铃薯块茎蛋白质方法的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了寻找一种适合于提取马铃薯块茎蛋白质的方法,以常用的5种方法从马铃薯块茎中提取蛋白质,用Brad-ford法测定其中蛋白质的含量,再以SDS-PAGE电泳进行分析,在此基础上对提取过程中所用Tris-HCl提取液浓度进行了优化。结果表明,利用直接提取法所获得的马铃薯块茎蛋白质,不仅含量最高（蛋白质干重为5.54mg）,而且电泳后得到的蛋白条带数量最多（达到15条）,蛋白条带清晰可见;磷酸缓冲液法次之（4.06mg）;酚提取法最差（0.14mg）。此外,以使用浓度为1.5mol/L Tris-HCl的提取液得到的电泳结果最好,条带最多且最清晰。直接提取法提取效率高、操作简便,是适合于提取马铃薯块茎蛋白质的实用方法。 相似文献
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[目的]探讨不同光周期对营养生长期茅苍术生长的影响,为人工规范化栽培茅苍术确定适宜的光周期提供参考依据.[方法]以一年生茅苍术种苗为试验材料,在人工气候室内进行试验,按照光照时间由短到长设4个光周期处理,分别为光照10h、光照12 h(CK)、光照14h和光照16h.每隔7d测定茅苍术的株高、茎粗和叶片数等生长指标及叶绿素含量、可溶性蛋白含量和过氧化物酶(POD)活性等生理生化指标;试验第30 d,以水蒸气蒸馏法提取茅苍术根茎中的挥发油,并计算不同处理挥发油的提取率.[结果]随着处理时间的延长,各处理组茅苍术的株高整体呈上升趋势,处理后期(第21~28 d)株高随光周期的延长呈不断增加趋势,光照16h处理出现最高值(38.40 cm).各处理茅苍术幼苗的生理指标在处理初期均无显著差异(P>0.05),随着处理时间的延长,不同处理间差异增大,至第28 d时,茎粗、叶片数、可溶性蛋白含量、叶绿素含量及POD活性均随光周期的延长呈先增后减的变化趋势,在光照14h时达最高值,分别为2.37 mm、25.17片、182.67 mg/g、5.90 mg/g和4898.96 U/gFW;茅苍术根茎中的挥发油提取率同样随光周期的延长呈先升后降的变化趋势,光照14h处理的挥发油提取率最高,为11.06 mL/g.[结论]在光照14 h处理下,一年生茅苍术种苗的株高相对较高,茎粗最粗,叶片数最多,且叶绿素和可溶性蛋白含量及挥发油提取率最高,是茅苍术营养生长期较适宜的光周期. 相似文献
18.
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[目的]对枣树叶片蛋白质提取方法及其SDS-PAGE单向电泳条件进行优化。[方法]对枣树5种蛋白质提取方法和影响SDS-PAGE单向电泳的因素进行比较研究。[结果]改良丙酮沉降法提取出的蛋白质杂质较少,条带数量多且清晰,同时通过研究确定了一套适用于枣树蛋白检测的SDS-PAGE凝胶制备及电泳方法。[结论]该研究为进一步从分子生物学的角度研究枣树与枣疯病植原体的互作机制提供了技术的基础。 相似文献