内生解淀粉芽孢杆菌LP-5抗菌蛋白的分离纯化及特性   总被引：6，自引：1，他引：5  

张宝俊  张家榕  韩巨才  刘慧平  王建明 《植物保护学报》2010,37(2):143-147

解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens LP-5是一株对梨黑斑病菌Alternaria alternata具有抑制作用的内生细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白.为明确该抗菌蛋白的理化性质,采用盐酸沉淀、DEAE-52层析和Sephadex G-100层析进行纯化,测定了所得抗菌蛋白对热、蛋白酶、紫外辐射及酸、碱的稳定性.结果表明:纯化的抗菌蛋白分子量为20.3 kD,等电点为6.33.该蛋白对高温敏感,100℃处理30 min,抑菌活性仅为对照的18.4%;对蛋白酶K和胰蛋白酶稳定,酶处理后的抑菌活性分别为对照的92.5%和88.9%;对紫外辐射稳定,照射12 h后抑菌活性仍达对照的92.5%;对酸稳定、对碱敏感,pH 13处理后抑菌活性下降为原有活性的74.1%.抑菌活性测定结果显示,该蛋白对梨黑斑病菌的孢子萌发和菌丝生长有明显抑制作用,可造成孢子萌发端泡囊化、菌体破裂、原生质外渗.  相似文献   

枯草芽孢杆菌G8抗菌蛋白的理化性质和抑菌作用   总被引：4，自引：3，他引：4       下载免费PDF全文

翟茹环  尚玉珂  刘峰  张修国  慕卫 《植物保护学报》2007,34(6):592-596

分离得到一株对黄瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary有拮抗作用的枯草芽孢杆菌G8,其无菌发酵液经硫酸铵沉淀得广谱抗菌粗蛋白。为明确枯草芽孢杆菌G8的理化性质,研究了温度、pH变化、UV照射、有机溶剂、蛋白酶和保存时间对抗菌蛋白稳定性的影响。结果表明:此粗蛋白耐酸,在pH值1~10范围内均有抑菌活性,将其pH值调为1.0作用16h后保持原有活性的69.2%;对温度有较高的稳定性,抗菌蛋白经100℃处理60min保持原有活性的80.8%;对蛋白酶K和有机溶剂不敏感;抗菌粗蛋白抑菌活性持久,在常温下120天保持原有活性的71.54%。初步研究了抗菌粗蛋白对黄瓜菌核病菌的抑制作用。结果显示,病菌菌丝消融、原生质渗漏、菌丝细胞泡囊化,并抑制病菌菌核萌发。  相似文献   

玉米内生菌YY1菌株抗菌蛋白的稳定性和活性组分分析          下载免费PDF全文

钱欣雨  王会敏  候美玲  申珅  郝志敏  董金皋 《植物保护学报》2023,50(3):725-732

为探究枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis菌株YY1抗菌蛋白的基本特性,采用硫酸铵分级沉淀法对蛋白粗提液进行提取,测定温度、酸碱性、蛋白酶和金属离子对抗菌蛋白稳定性的影响,利用阴离子交换柱层析和葡聚糖凝胶柱层析对其组分进行分离,通过MALDI-TOF质谱对其活性组分进行初步鉴定。结果表明,当硫酸铵饱和度为50%时,菌株YY1产生的粗蛋白对玉米大斑病菌Setosphaeria turcica的抑制效果最好,抑菌圈半径达2.20 cm。该粗蛋白具有较高的热稳定性,90℃处理120 min其抑菌活性未受到明显影响,121℃处理120 min其抑菌活性仍可保持原有活性的85.0%。该粗蛋白具有较好的耐碱性,pH 5～11条件下其抑菌活性稳定,pH 3～4条件下其抑菌活性显著下降。该粗蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感,两者处理后的抑菌活性分别为对照的97.5%和98.9%;不同浓度金属离子对其抑菌活性的影响存在差异,Cr³⁺可使该粗蛋白完全失活,Zn²⁺、Li⁺、K⁺、Na⁺、M...  相似文献   

地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的分离纯化及其理化性质研究   总被引：10，自引：3，他引：10  

纪兆林  唐丽娟  张清霞  徐敬友  陈夕军  童蕴慧 《植物病理学报》2007,37(3):260-264

 地衣芽孢杆菌W10是一株对多种植物病原菌有拮抗作用的生防细菌,其产生的抗菌物质主要是抗菌蛋白。细菌培养滤液用30%硫酸铵盐析,透析后再经SephadexG-75层析柱纯化得到一种具有抑菌活性的蛋白。该抗菌蛋白的分子量为46049.2Da;等电点为6.71;含有糖基,含糖量为6.83%;含有脯氨酸或羟脯氨酸;不含脂基。这种蛋白在pH6~12范围内均具有抑菌作用,pH6时活性最大;对热稳定,100℃以下水浴20min,抑菌活性与对照相比均在对照的80%以上,121℃蒸汽处理20min,活性虽有所下降,但仍达对照的65.7%;对胰蛋白酶和蛋白酶K不敏感,酶处理后蛋白的抑菌活性分别为对照的98.7%和98.3%;对氯仿和紫外线也不敏感,处理后活性仍达对照的91.0%和98.6%。  相似文献   

红树内生细菌RS261抗菌物质的发酵优化和眭质分析     

柳凤  卢仕严  何红  刘博凤  欧雄常 《植物保护》2009,35(5):70-75

RS261是一株来自红海榄（Rhizophora stylosa）叶片内对辣椒疫病具有良好防病效果的生防细菌。通过55%硫酸铵沉淀获得的抗菌蛋白液对辣椒炭疽病菌等多种植物病原菌具有强烈的抑制作用,该蛋白对热稳定、对蛋白酶K不敏感,但对胃蛋白酶和紫外线较敏感,在pH6.0～7.0时抗菌活性最强;优化后的培养基配方为：马铃薯200 g/L、蛋白胨5 g/L、蔗糖20 g/L,适宜培养条件是：初始pH6.5、接种量5%、装液量为150 mL/250 mL、振荡培养72 h时,产生的抗菌蛋白最多。  相似文献   

一株银杏内生真菌代谢产物抗菌活性初步研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

申屠旭萍  俞晓平  夏湛恩  徐红星 《植物保护》2006,32(3):55-57

从浙江长兴采集的银杏茎中分离到一株内生真菌,编号为1028。本文对其产生的代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,生测结果表明:离体条件下发酵液对番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌、菜豆炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌均有较强的抑制作用,对不同病原菌的抑制率分别为:66.7%、48.3%、64.6%、36.5%、57.1%、23.0%。抑菌活性成分在80℃以下趋于稳定,pH为7～8时抑菌效果最强。  相似文献   

一株抗马铃薯坏疽病生防细菌B-401产抑菌物质条件优化及稳定性          下载免费PDF全文

畅涛  冯中红  杨成德  薛莉 《中国生物防治学报》2016,32(3):365-371

以马铃薯坏疽病菌为靶标菌株,采用含药平板法对高寒草地禾草内生细菌B-401产抑菌物质条件及抑菌物质的稳定性进行了研究。结果表明,生防菌株B-401产抑菌物质的最佳培养基配方为牛肉膏8g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖10g、水1000mL,最适温度为23.4℃,最适pH值为7,最佳装液量为35.2mL/150mL三角瓶,最佳培养方式为光照条件下振荡培养24h,最适发酵时间为96h,优化验证试验结果表明,其对马铃薯坏疽病菌的EC₅₀＝0.111μL/mL,是优化前EC₅₀＝3.196μL/mL的3.47%。菌株B-401所产抑菌物质在25~90℃具有较好稳定性,抑菌活性均大于75%,在100℃及以上高温处理后抑菌物质活性降低;对酸碱性和紫外照射稳定,相对活性分别在77.45%和98%以上;对金属离子Na⁺、Mg²⁺和Mn²⁺稳定,相对活性达99%以上,而对Ag⁺、Cu²⁺、Zn²⁺和Fe³⁺较不稳定。  相似文献   

芽孢杆菌B11拮抗蛋白性质及其对西瓜枯萎病菌的作用机理   总被引：4，自引：0，他引：4  

彭好文  黎起秦  蒙姣荣  唐照磊  林纬 《植物保护》2003,29(5):22-25

芽孢杆菌(Bacillus sp.)B11分离自土壤,其拮抗蛋白粗提液在温度60、80℃各处理30 min后仍能保持抗菌活性,对紫外线、蛋白酶K、RNase处理稳定,对胃蛋白酶、胰蛋白酶、氯仿部分敏感,作用活性pH(pH4～10)范围较宽.B11拮抗蛋白对西瓜枯萎病菌具有较强的拮抗作用,其抑菌机制主要使病菌菌丝畸形,细胞质浓缩,孢子不萌发或萌发异常.  相似文献   

芽孢杆菌B₁₁拮抗蛋白性质及其对西瓜枯萎病菌的作用机理   总被引：9，自引：1，他引：9       下载免费PDF全文

彭好文  黎起秦  蒙姣荣  唐照磊  林纬 《植物保护》2003,25(5):22-25

芽孢杆菌(Bacillus sp．)B11分离自土壤，其拮抗蛋白粗提液在温度60、80℃各处理30min后仍能保持抗菌活性，对紫外线、蛋白酶K、RNase处理稳定，对胃蛋白酶、胰蛋白酶、氯仿部分敏感，作用活性pH(pH4～10)范围较宽。B11拮抗蛋白对西瓜枯萎病菌具有较强的拮抗作用，其抑菌机制主要使病菌菌丝畸形，细胞质浓缩，孢子不萌发或萌发异常。  相似文献   

枯草芽胞杆菌GB519抗菌蛋白的理化性质及生防效果          下载免费PDF全文

朱峰  王继春  田成丽  祁山颜  王东元  任金平  王义山 《中国生物防治学报》2020,36(5):778-785

枯草芽胞杆菌GB519是从土壤中分离对稻瘟病菌具有显著抑菌活性的菌株。为了明确菌株GB519抗菌粗蛋白的理化性质,分析了光照、紫外线、温度、pH和酶（蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶）对抑菌活性的影响。结果表明,抗菌蛋白对光照、紫外线和3种酶作用稳定;40℃~100℃处理1 h抑菌活性稳定,121℃处理30 min活性仅降低了7.4%,具有较好的耐高温特性;在pH 2.0~10.0活性稳定,但pH 11.0~12.0活性有所下降,分别降低了14.9%和18.1%。抗菌蛋白对多种植物病原菌具有抑菌作用,其中对茄子菌核病菌的抑菌活性为72.7%。在温室条件下对水稻叶瘟的防效达到80.1%。因此,菌株GB519可作为防控稻瘟病生防潜力菌进行开发。  相似文献   

芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

龙贤梨  王中康  陈玉龙  殷幼平 《植物保护学报》2012,39(5):438-442

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框（GenBank登录号为JQ309841）,编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。  相似文献   

菜豆普通细菌性疫病菌在土壤和植株残体中的越冬能力   总被引：1，自引：1，他引：0  

徐新新  陈鸿宇  王述民  段灿星  朱振东 《植物保护学报》2012,39(3):231-236

为评估菜豆普通细菌性疫病菌地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种或褐色黄单胞菌褐色亚种在土壤及植物残体中的越冬能力,对采自黑龙江、内蒙古、山西、河北及新疆的18块菜豆生产田的20份土壤及14份植物残体样品进行病原菌分离和鉴定。在MT选择性培养基上有12个土壤样品和13个植株残体样品提取液产生典型的类似黄单胞菌菌落。选取29个分离物进行致病性测定,有27个分离物对菜豆品种"英国红"致病。利用地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种和褐色黄单胞菌褐色亚种的特异性引物X4c/X4e及褐色黄单胞菌褐色亚种特异性引物Xf1/Xf2对29个分离物进行多重PCR检测,其中17个分离物为地毯草黄单胞杆菌菜豆致病变种,10个分离物为褐色黄单胞菌褐色亚种。结果表明,菜豆普通细菌性疫病菌可以在黑龙江、内蒙古、山西、河北的一些菜豆种植区的土壤及植株残体中越冬存活。  相似文献   

进境油菜籽中黑胫病菌和茎基溃疡病菌的检测   总被引：1，自引：0，他引：1  

周国梁  尚琳琳  于翠  印丽萍  徐殿胜  易建平 《植物保护学报》2010,37(4):289-294

为准确鉴定从进境澳大利亚油菜籽样品中分离的真菌分离物,利用形态学特征、PCR检测、序列分析以及致病性测试等方法对分离物6382-43和6382-51进行了鉴定试验。结果表明,分离物6382-43的形态特征和油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans相似,菌丝生长较慢,菌落边缘不规则,不产生色素。油菜茎基溃疡病菌特异性引物LmacF/LmacR检测为PCR阳性;ITS区序列和油菜茎基溃疡病菌的序列相似性为99.8%;接种幼嫩油菜子叶产生油菜茎基溃疡病的典型症状。分离物6382-51的形态特征和油菜黑胫病菌L.biglobosa相似,菌丝生长较快,菌落边缘规则,产生色素;油菜黑胫病菌特异性引物LbigF/LmacR检测为PCR阳性;ITS区序列和油菜黑胫病菌的序列相似性为100%;接种幼嫩油菜子叶产生油菜黑胫病的典型症状。根据分离物的形态特征、PCR检测结果、序列分析以及致病性测试结果,将进境澳大利亚油菜籽样品中的真菌分离物6382-43和6382-51分别鉴定为油菜茎基溃疡病菌Leptosphaeria maculans和油菜黑胫病菌L.biglobosa。  相似文献   

Effects of a lectin-like protein isolated from Acacia farnesiana seeds on phytopathogenic bacterial strains and root-knot nematode     

T. Santi-Gadelha  B.A.M. RochaC.A.A. Gadelha  H.C. SilvaR.E.R. Castellon  F.J.T. GonçalvesD.O. Toyama  M.H. ToyamaA.J.F. de Souza  L.O.S. BeriamJ.L. Martins  P.P. JoazeiroB.S. Cavada 《Pesticide biochemistry and physiology》2012,103(1):15-22

Acacia farnesiana lectin-like protein (AFAL) showed bacterioestatic effects against Xanthomonas axonopodis pv. passiflorae (Gram-negative) and Clavibacter michiganensis michiganensis (Gram-positive), with the latter being more sensitive. This effect is probably due to the ability of AFAL to interact with the bacterial cell wall where we observed that AFAL induced macroscopic change. The maximum bacterial growth inhibition was approximately 78% when incubated with Gram-negative strains, and as high as 92% percent for the Gram-positive one. The antibacterial effect of flavonoids (rutin, quercetin and morin) was also observed using low concentrations against both bacterial strains. Prior incubation of both with AFAL at high concentrations increases the inhibitory effect of flavonoids on bacterial growth. The potential use of AFAL as a control agent against the root-knot nematode Meloidogyne incognita was investigated as well, showing anti-nematode properties involving both egg hatching and motility. In the juvenile second-stage, AFAL showed reduction in larval mobility when measured against a control group. The results suggest that AFAL is effective against M. incognita and could be used as a component of integrated pest management programs. These data also suggest that lectins probably play a role in plant defense not only against invertebrate phytopathogens, herbivores and fungi but also against bacteria.  相似文献   

枯草芽胞杆菌对离体荔枝果实霜疫霉病、炭疽病的防治效果   总被引：3，自引：2，他引：1  

黄庶识  黄曦  张荣灿  许兰兰  雷富  黄荣韶 《植物保护学报》2011,38(3):247-252

为了进一步明确从土壤中筛选得到的拮抗细菌OR-1、OR-2、OR-3、ON-6的分类地位和生防效果,采用形态学观察、理化特性结合分子生物学方法,鉴定这4株细菌皆为枯草芽胞杆菌Bacillussubitilis.拮抗菌对荔枝霜疫霉菌、炭疽菌菌丝生长均具有明显抑制作用,ON-6菌株的发酵液对菌丝生长的抑制率最高,分别为92.34％和70.36％,其次是OR-1菌株.拮抗菌处理组褐变指数均小于对照组以及杀菌剂处理组,且差异达显著水平(P＜0.05),OR-1菌株防褐变效果最好.常温下,拮抗菌发酵液对离体鲜果病害防治效果优于对照组和杀菌剂处理组,其中ON-6菌株的防治效果最佳;4℃低温储藏处理40天后,拮抗菌发酵液处理组的防治效果高于对照和杀菌剂处理组,且差异显著(P＜0.05),以ON-6和ON-3菌株的防治效果最佳.表明拮抗菌发酵液对荔枝鲜果上的霜疫霉菌和炭疽病菌有一定的抑制作用.  相似文献   

河北和山东鸭梨果实上链格孢菌鉴定   总被引：5，自引：2，他引：3  

严进  施宗伟  宋福  黄文胜  陈岩  赵文胜 《植物保护学报》2009,36(1):37-43

为了查清造成鸭梨果实储藏期黑斑病的链格孢Alternaria的种类,从其产孢表型、分生孢子特征和分子生物学等方面对分离的链格孢菌进行了研究.经对分离到的188支Alternaria菌株的形态学鉴定,共确定了3个种,即链格孢Alternaria alternata、细极链格孢A.tenuissima和侵染链格孢A.infectoria,比例分别为41.0%、54.8%和1.6%.分子生物学研究结果表明,Altemaria大孢子种彼此间及大孢子种与小孢子种之间可以根据ITS和gpd序列差异明确区分;而供试的多数小孢子种在ITS和gpd序列上差异很小,无法区分.  相似文献   

2004—2008年东北春麦区小麦白粉病菌种群毒性动态分析     

曹远银  迟文娟  张晓蕾  朱庆顺 《植物保护学报》2009,36(3):213-218

采用全国统一的9个鉴别寄主离体叶片法鉴定侵染型和Gilmour八进制法命名小种,对2004--2008年采自东北春麦区的辽宁、黑龙江等省不同县市的298个小麦白粉病菌标样进行生理小种及毒力频率分析,并利用已知抗白粉病基因的22个小麦品种(系)对参试菌株进行毒力频率测定.结果表明:2004--2006年优势小种为生理小种15号,出现频率分别为13.7%、15.6%和20.3%;2007年优势小种为17号小种,出现频率为10.2%;2008年411号小种上升为优势小种,频率达20.6%;2004--2008年毒性基因V4b、V2+6、V4+8、V12、V16、V18、V20、V21、V22和V23毒力频率较低,在0～28.0%之间,其对应抗性基因Pm4b、Pm2+6、Pm4+8、Pm12、Pm16、Pm18、Pm20、Pm21、Pm22和Pm23抗性较强,可作为有效的抗病基因加以利用.  相似文献   

Agrobacterium-mediated transformation efficiency is altered in a novel rice bacterial blight resistance cultivar and is influenced by environmental temperature     

Rui-xian Dong  Juan Chen  Xu-ming WangJin-shan Li  Jie ZhouYong Yang  Chu-lang YuYe Cheng  Cheng-qi YanJian-ping Chen 《Physiological and Molecular Plant Pathology》2012,77(1):33-40

Y73 is a progeny of asymmetric somatic hybridization from an elite japonica rice cultivar (Dalixiang) and a wild rice (Oryza meyeriana), which shows high resistance to bacterial blight. It has a similar genetic background to its recurrent parent, Dalixiang, but Y73 has a high resistance to both bacterial blight and Agrobacterium. The transformation efficiency of Y73 was 35.7%, while Dalixiang had higher transformation efficiency (71.2%) under the same co-cultivation temperature (25 °C). These results indicate that the resistance to Agrobacterium tumefaciens in Y73 was linked with its characteristic of bacterial blight resistance, and was obtained from its donor parent, O. meyeriana. Further studies also showed that the resistance to A. tumefaciens was weakened at a lower temperature (20 °C). To study its molecular mechanism, the expression levels of genes associated with Agrobacterium-mediated transformation (OsMPKs, OsVIP1s and OsPR1s) in rice were investigated by Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) analysis. The expression levels of OsMPK genes remained unchanged at different temperatures, while all OsVIP1s and almost all OsPR1s were up-regulated and transformation efficiency of Y73 was increased notably when infected by Agrobacterium at 20 °C compared with 25 °C. This study suggests that the bacterial blight resistance genes in Y73 also have an effect on Agrobacterium-mediated transformation and that the response to temperature is associated with the regulation of MAPK/VIP1 defense signaling pathway.  相似文献   

草莓枯萎病菌的生物学特性及7种杀菌剂对其抑制作用   总被引：19，自引：1，他引：18  

杨焕青  王开运  范昆  林才华  段海明  原晓玲 《植物保护学报》2008,35(2):169-174

采用十字交叉法和血球计数板法测定草莓枯萎病菌的生物学特性。结果表明,PSA培养基最适合草莓枯萎病菌的生长和产孢,菌落生长的适温为5~40℃(最适温度为28℃),适宜pH值为5,菌落产孢的适宜pH值为6,且光暗交替可促进菌落的生长和产孢,同时明确了不同碳氮源对草莓菌落生长及产孢的影响。采用菌落生长速率法,测定草莓枯萎病菌对7种杀菌剂的敏感性,烯唑醇和戊唑醇对菌落生长的抑制毒力最强,EC₅₀分别为0.2072μg·mL^-1和0.2130μg·mL^-1,分别是多菌灵的238.85倍和232.35倍;腈菌唑和苯醚甲环唑的毒力次之,EC₅₀分别为0.7929μg·mL^-1和0.8513μg·mL^-1,分别是多菌灵的62.42倍和58.13倍;三唑酮和霜霉威的毒力最小。  相似文献   

钙盐协同枯草芽孢杆菌对苹果采后炭疽病的控制   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴芳芳  郑有飞  吴荣军 《植物保护学报》2009,36(3):225-228

为控制果实采后病害,采用液体共培养、平板菌落计数和活体侵染等方法,研究钙盐和枯草芽孢杆菌对苹果炭疽菌的作用机制和对苹果炭疽病的控制效果.结果显示,钙盐延缓了枯草芽孢杆菌的增殖速率和衰亡期细胞死亡速率,即延长了枯草芽孢杆菌世代周期;钙盐协同枯草芽孢杆菌可抑制苹果炭疽菌菌丝体干重、孢子萌发率和芽管长度,其抑制率分别为54.75%、88.99%和45.88%,抑制效果显著高于钙盐和枯草芽孢杆菌的单独作用,同时推迟了苹果炭疽病的发病时间,抑制了病斑的扩展和分生孢子盘的发育;钙盐协同枯草芽孢杆菌对苹果炭疽病的防治效果为55.53%,明显好于各自的单独作用.  相似文献