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经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、 DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换柱层析、 Sephacryl S-200 凝胶过滤等步骤, 从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶, 该酶纯化倍数达58.3倍, 比活为337.4 U/mg. 经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121.0 kD, 亚基分子量为60.5 kD. 以磷酸苯二钠为底物, 测得该酶的最适pH为9.0, 最适温度为40 ℃. Na 、 K 、 Li 等一价离子对该酶活性基本无影响, Mg2 、 Mn2 对该酶活性有激活作用, Cd2 对该酶活性有抑制作用. 米氏常数Km为1.28 mmol/L. 相似文献
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鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤,从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶,该酶纯化倍数达58．3倍,比活为337．4U／mg．经SDSPAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121．0kD,亚基分子量为60．5kD．以磷酸苯二钠为底物,测得该酶的最适pH为9．0,最适温度为40℃．Na^＋、K^＋、Li^＋等一价离子对该酶活性基本无影响,Mg^2＋、Mn^2＋对该酶活性有激活作用,Cd^2＋对该酶活性有抑制作用．米氏常数Km为1．28mmol／L． 相似文献
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增产菌是从蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus),中分离筛的能促进作物增产的益苗。本项研究通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G—75凝胶过滤和DE—52柱层折,对增产菌83—10菌株的超氧化物歧化酶(SOD)进行了纯化,经电泳检测、原子含量测定和抑制性试验鉴定,获得了达到均一程度的Fe—SOD,其比活为2251.5U/mg。该酶在紫外光区的吸收峰为280nm,测得该酶的亚基分子量和分子量为20500和41000道尔顿,並分析了该酶亚基的氨基酸组成。文中讨论了增产菌SOD对作物的保健作用。 相似文献
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增产菌是从蜡质芽孢杆菌(Bacillus ccreus)中分离筛选的能促进作物增产的益菌。本项研究通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G—75凝胶过滤和DE—52柱层折,对增产菌83—10菌株的超氧化物歧化酶(SOD)进行了纯化,经电泳检测、原子含量测定和抑制性试验鉴定,获得了达到均—程度的Fe—SOD,其比活为2251.5U/mg。该酶在紫外光区的吸收峰为280nm,测得该酶的亚基分子量和分于量为20500和41000道尔顿,並分析了该酶亚基的氨基酸组成。文中讨论了增产菌SOD对作物的保健作用。 相似文献
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[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5．25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。 相似文献
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探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。 相似文献
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新鲜鸭肝经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝过氧化氢酶电泳纯制品,回收率为18．23％,比活达4780．38U／mg,纯化倍数为66．15。最适温度为40℃,最适pH为7．0,该酶在20～40℃,pH5～8内稳定．经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为250KD,亚基分子量为62．5KD。 相似文献
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经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品. 纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%. 经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35 kD. 该酶在pH 6.0～11.0,温度低于25 ℃稳定,当温度上升到55 ℃时活性迅速下降. 该酶在pH 10和60 ℃时达到最高活性. 进一步研究得知: Cu2+离子对该酶有明显促进作用,而Mn2+却使酶几乎失活. 以酪蛋白为底物,在pH 10.0、37 ℃时测得米氏常数Km值为1.33%. 相似文献
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鸭肝蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究 总被引：1，自引：1，他引：1
经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品．纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%．经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35kD．该酶在pH6.0～11.0,温度低于25℃稳定,当温度上升到55℃时活性迅速下降．该酶在pH10和60℃时达到最高活性．进一步研究得知：Cu^2＋离子对该酶有明显促进作用,而Mn^2＋却使酶几乎失活．以酪蛋白为底物,在pH10.0、37℃时测得米氏常数Km值为1.33%． 相似文献
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脱毛碱性蛋白酶的纯化及其生化特性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CM-阳离子交换层析和凝胶过滤层析分离碱性蛋白酶,得到了碱性蛋白酶的单一组分。对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)碱性蛋白酶SDS-聚丙烯酰胺电泳进行了分析。结果表明：其亚基分子量约为28kD,等电点约为8．4。并对其生化特性质进行研究,结果表明：酶活最适温度为45℃,最适pH值为10．5,在0．5mol／L的Na^ 对酶活有较大的促进作用。 相似文献
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从人工接种感染黄矮病毒(Rice Yellow Stunt Virus,RYSV)的水稻茎杆中提取得到了部分纯化的RYSV制品,病毒制品经Tricine-SDS-PAGE得到分子量分别为84 kD,60 kD,31 kD和29.5 kD的4条主要蛋白带和分子量为170kD和43kD的两条次要蛋白带。根据弹状病毒结构蛋白命名法,按分子量大小依次命名为L,G,N,NS,M_1和M_2蛋白。从电泳凝胶上切下G和N蛋白带,制成抗原免疫BALB/C小鼠;制得G和N蛋白小鼠腹水抗体。经Dot-blot试验测得N蛋白抗体效价为1:1000,G蛋白抗体效价为1:400。 相似文献
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人参水溶性蛋白的纯化工艺研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为研究人参中几种水溶性蛋白的提取纯化工艺,采用中性缓冲液抽提和硫酸铵分级沉淀法提取人参总蛋白,应用超滤、亲和层析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法进行分离、纯化,得到5种水溶性人参蛋白。经SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱分析,其分子量分别为65.8,65.5,24.7,15.1,7.6 kD。研究结果表明,本试验所确定的人参水溶性蛋白纯化工艺路线简便、可行。 相似文献
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黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的纯化及部分性质研究 总被引：1，自引：0，他引：1
黑曲霉(Aspergillus niger)WM20-11固态发酵成熟曲,经磷酸缓冲液浸提、硫酸铵分步盐析、DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析等分离纯化手段,最终获得了Native-PAGE、SDS-PAGE纯的酸性β-甘露聚糖酶组分,其纯化倍数为25.08,收率为5.1%。Sephadex G-100凝胶过滤层析和SDS-PAGE测得纯酶的相对分子质量分别为39 kD和40 kD,表明该酶以单体形式存在;IEF-PAGE测得该酶的等电点为4.0;含糖量测定为19.6%;酶蛋白氨基酸组成中(Asp+Glu)/(Lys+Arg)为3.74。 相似文献
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[目的]用新的方法从猪脑中提取纯化硫氧还蛋白还原酶(TrxR)并对其进行表征。[方法]通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶色谱柱层析、Blue-Sepharose亲和色谱柱层析、Resource Q强阴离子交换色谱柱层析和Superdex 200 prep grade凝胶过滤色谱柱层析等方法,从猪脑中分离并纯化TrxR。采用聚丙烯酰胺电泳法、等电聚焦法、DTNB还原法和胰岛素还原法对TrxR的性质进行表征。[结果]从猪脑中分离并纯化出TrxR,其纯度大于99%,是酶粗提液的6 000倍,最终产率为13.9%。猪脑TrxR的分子量为56.0 kD,等电点为5.0。以DTNB为底物测得其K m和k cat值分别为62.9μmol/L和467 min-1,以硫氧还蛋白为底物测得其K m和k cat值分别为3.9μmol/L和2 813 min-1。[结论]用新的方法从猪脑中纯化得到较高纯度的TrxR,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。 相似文献
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钝顶螺旋藻藻胆蛋白性质的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
采用羟基磷灰石柱层析法对钝顶螺旋藻藻胆蛋白粗提液进行纯化,得到藻蓝蛋白（PC）和别藻蓝蛋白（APC）纯化液。用紫外-可见分光光度计测得PC和APC的最大可见吸收峰分别在620 nm和650 nm处;用荧光分光光度计测得它们的室温荧光发射峰分别在645 nm和656 nm处。经12%
SDS-PAGE法分析,PC由α和β两个亚基组成,其分子量分别为16.3 kD和18.9 kD;APC也由α和β两个亚基组成,其分子量分别为15.0 kD和16.9 kD。用高效液相色谱仪(HPLC)对PC和APC的氨基酸组成作了测定,发现二者的氨基酸组成比较相似。 相似文献
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