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斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究成功建立了检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗原的斑点—免疫金银染色技术（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ），并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化ＩＢＤＶ抗原的最低检出量为０．１９５３ｎｇ／点，其敏感性为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的８倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ具有较高的特异性。Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５４份自然感染法氏囊样品检测的阳性率为９６．３％和９２．５％（χ２＝３．１１７９，Ｐ＞０．０５），统计学分析两者无显著差异。研究表明本法具有敏感、特异性强、经济、安全等优点，可用于ＩＢＤＶ感染的特异诊断。本研究为免疫金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究打下了基础 相似文献
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用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ 相似文献
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猪生殖和呼吸综合征病毒中国分离株B13株ORF5基因在杆状病 … 总被引：4，自引：0，他引：4
本研究将ＰＲＲＳＶＢ１３株ＯＲＦ５基因克隆到杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３中,构建了重组转移载体质粒ｐＶＬ１３９３－ＯＲＦ５。用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ－ＳＶＩ Ｇ）基因组ＤＮＡ（ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ Ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ）共转染草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ,ｓｆ９）细胞,得到重组病毒ＡｃＭＮＰＶ 相似文献
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应用样品一个稀释度间接ＥＬＩＳＡ法对产蛋母鸡及其小鸡进行传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体效价测定，同时用病毒中和试验（ＶＮ）作比较检测。结果表明，该ＥＬＩＳＡ法比ＶＮ法敏感、精确、简便，所有样品只测定一个稀释度的Ｐ／Ｎ值，再根据线性回归方程（ｒ１=０．８８９８，Ｐ≤０．０５）计算抗体效价，达到省时省力、节约材料、减少试验误差和一次可进行大批样品检测的目的。２种方法相关性较高（ｒ３=０．８４９２，Ｐ＜０．０１），小鸡母源抗体衰减与日龄呈线性关系（ｒ２=－０．８７５８，Ｐ＜０．０１），ＩＢＤＶ母源抗体半衰期为６．３ｄ。 相似文献
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为了探讨生长因子（ＥＧＦ，ＰＤＧＦ）对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响，本研究进行了两个实验。实验１：在卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）中，将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为０，２．５，２５，５０μｇ／Ｌ的成熟培养液和对照组中。实验２：在早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）过程中，将受精卵平均随机分配入５个不同培养液的处理组：（１）ＴＣＭ－１９９＋１０％阉公牛血清（ＳＳ）；（２）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ＋ＰＤＧＦ；（３）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ；（４）ＴＣＭ－１９９＋ＰＤＧＦ；（５）ＴＣＭ－１９９＋无生长因子、其中ＥＧＦ：５０μｇ／Ｌ，ＰＤＧＦ：０．１μｇ／Ｌ。２，３，４，５组有０．１％ＰＶＡ和０．３％ＢＳＡ，并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）和早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）的方法与Ｌｕ等（１９８７）报道的相同。结果表明：浓度为５０μｇ／Ｌ的处理组分裂率与对照组无差异（８９．０％，９２．４％，Ｐ＞０．０５），而浓度为０，２．５，２５μｇ／Ｌ的处理组分裂率均显著低于对照组（７８．６％，８２．３％，８４．３％，Ｐ＜０．０５），在囊胚率和第７ｄ一级胚胎率上各组均无差异。ＥＧＦ在体 相似文献
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ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。 相似文献
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乙肝表面抗原和生长抑素融合基因在杆状病毒中表达 总被引：2，自引：0，他引：2
将乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）与生长抑素的融合基因（ＨＢｓＡｇ／ＳＳ）插入杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３，构成重组转移质粒ｐＶＬ１３９１ＨＳ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂质证实ＨＢｓＡｇ／ＳＳ已插入ＰＶＬ１３９３。借助磷酸钙沉淀法，将ＣｓＣｌ超速离心纯化的重组转移质粒和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）共转染Ｓｆ９细胞，用荧光空班和酶联免疫测定法（ＥＬＩＳＡ），筛选到重组病毒ＡｃＮＰＶＨＳ。提取感 相似文献
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用猪瘟兔化弱毒（ＳＦＶ—Ｃ）牛睾丸细胞培养上清液，经ＰＥＧ—２００００沉淀和蔗糖密度梯度离心提纯制备ＳＦＶ—Ｃ抗原，腹腔免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取抗体阳性的免疫小鼠脾细胞，在５０％（Ｗ／Ｖ）ＰＥＧ—４０００作用下，与ＳＰ２／０－Ａｇ１４小鼠骨髓瘤细胞进行融合，产生杂交瘤细胞。用间接ＥＬＩＳＡ法筛选阳性杂交瘤细胞株。通过有限稀释进行３次克隆，获得了２株分泌抗ＳＦＶ—Ｃ的单克隆抗体杂交瘤细胞株，并对其染色体形态和数目进行分析鉴定。 相似文献
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狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从狂犬病病毒感染的ＢＨＫ细胞裂解上清液中快速提取病毒ＲＮＡ,用反转录－聚合式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法得到编码核蛋白完整结构基因的ｃＤＮＡ,进一步将此基因克隆入ｐＵＣ１８中,进行核苷酸序列分析,并与国外ＰＶ、ＣＶＳ、ＳＡＤＢ１９株以及国内５ａＧ株的Ｎ基因序列进行了同源性比较,证明所克隆Ｎ基因正确。 相似文献
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植物材料含碘量的测定 总被引：2，自引：0，他引：2
德国是世界碘缺乏区之一，对土壤和植株中的碘含量的调查显得特别重要。土壤和植株中的低含量碘（μｇ和ｎｇ水平）可根据ＳＡＮＤＥＬＬ－ＫＯＬＴＨＯＦＦ反应用分光光度计测定，其原理是在碘催化下Ａｓ（Ⅲ）将Ｃｅ（Ⅲ）还原。该反应的程度主要取决于时间和温度，也受离子（如Ｃｌ＾－、ＮＯ２＾－、ＳＣＮ＾－、Ｆｅ＾２＋、ＢｒＯ３＾－、ＭｎＯ４＾－、Ａｇ＾＋、ＣＮ＾－、Ｈｇ＾＋）和金属（如Ｏｓ）的影响。加入ＫＯＨ和Ｚ 相似文献
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传染性支气管炎病毒S1纤突糖蛋白基因的克隆及部分序列分析 总被引：4，自引：1，他引：3
大纤突Ｓ糖蛋白是传染性支气管炎病毒重要的免疫相关性蛋白之一，参考已发表的ＩＢＶ－Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因ＤＮＡ序列，合成一对特异性引物，以ＩＢＶ－ＲＮＡ为模板，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，获得传染性支气管炎病毒上海分离株Ｓ２Ｔ２－Ｓ１纤突糖蛋白基因，长度１．６５ｋｂ，利用引物设计中的ＢａｍＨ和ＨｉｎｄⅢ位点将其克隆到载体ｐＳＩ（＋）中。对该基因进行限制性酶发分析，结果与已报道的相一致。 相似文献
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促黄体素释放激素与乙肝表面抗原嵌合基因在家蚕体内的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以在家蚕培养细胞中获得的重组ＢｍＮＰＶ病毒感染５龄的家蚕，在感染后第２４ｈ可以测出ＨＢｓＡｇ的活性。以后随着感染时间的延长，ＨＢｓＡｇ的量也逐渐升高。用ＥＬＩＳＡ抑制法测得每血淋巴中含ＨＢｓＡｇ－ＬＨＲＨ的量为７－１２μｇ．ｍＬ＾－１。以兔抗ＬＨＲＨ抗体对家蚕血淋巴进行免疫沉淀，在电子显微镜下观察到与乙肝病毒表面抗原大小类似的颗粒。 相似文献
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通过对华北平原２４个石灰性土壤（褐土、褐潮土、潮土）的研究表明，ＩＣＰ光谱仪可准确地分析ＮａＨＣＯ３－ＤＴＰＡ（即ＳＢ／Ｄ）联合浸提剂所浸提的Ｐ、Ｋ、Ｃａ，Ｍｇ，Ｓ，Ｆｅ，Ｚｎ，Ｍｎ，Ｃｕ，Ｂ１０种养分元素和Ｐｂ，Ｃｄ，Ａｓ，Ｓｅ４种有毒元素的含量，用ＳＢ／Ｄ联合浸提剂－ＩＰＣ光谱仪联用技术测定上述元素在各供试土壤中的有效含量，与分栽试验中空白处理的植物地上部化学元素吸收量，常规化学分析方法的测定 相似文献
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石墨炉原子吸收分光光度法测定土壤和植物中的微量镉 总被引：8，自引：0，他引：8
石墨炉原子吸收分光光度法测定土壤和植物中的微量镉刘呜（云南省农业环境保护监测站昆明６５００３４）１仪器ＰＥ－１１００Ｂ型原子吸收分光光度计，ＨＧＡ－７００型石墨炉，ＡＳ－７０型自动进样器，ＥＰＳＯＮＦＸ－８５０型扫印机，镉空心阴极灯，氘灯背景校正器，... 相似文献
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花生条纹病毒外壳蛋白基因cDNA的合成、克隆及全序列测定 总被引：3，自引：0，他引：3
自田间采集的花生病叶中提取花生条纺病毒（ＰＳｔＶ）总ＲＮＡ,人工合成引物Ｐ１、Ｐ２,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成ＰＳｔＶ－ｃｐ的ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上。经限制酶谱分析后进行全序列测定,结果表明：该布１０８４个核苷酸组成,包含了ＰＳｔＶ－ｃｐ ｃＤＮＡ完整的８６１ｂｐ编码序列（编码２８７个氮基酸）以及３＇端２２３ｂｐ非编码序列,与文献报道的４个ＰＳｔＶ－ｃｐ基因具有较高的保守性。 相似文献