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1.
检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用 总被引：3，自引：2，他引：1
以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江4省部分地区收集到的1089份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清流行病学进行初步调查。结果JEV抗体阳性率为68.2%,其中,种猪JEV抗体阳性率为82.1%,商品猪JEV抗体阳性率为62.6%。从中随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92%和96.4%,2种方法的符合率为95.6%;与NS1蛋白包被建立的ELISA比较,两者的符合率为97.7%;同时,本法的阳性检出率显著高于临床普遍使用的乳胶凝集试验结果。由此表明,本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模猪乙型脑炎血清流行病学调查。 相似文献
2.
流行性乙型脑炎是由日本脑炎病毒(JEV)引起的蚊媒传播人畜共患传染病,严重危害人类和猪、马等动物的健康。为建立检测多种动物血清中JEV抗体的ELISA,应用重组囊膜蛋白和辣根过氧化物酶标记的JEV单克隆抗体建立了检测JEV抗体的阻断ELISA。结果显示:通过对100份JEV抗体阴性猪血清的检测结果进行统计学分析,确定阻断ELISA的判定标准:阻断率(PI)≥34%时判定为阳性,PI≤25%时判定为阴性,25%PI34%时判定为可疑。该阻断ELISA与其他常见猪病毒病抗体阳性血清无交叉反应;批内和批间重复试验的变异系数均小于5%;与商品化ELISA试剂盒的对比检测表明,敏感性为98.5%、特异性为94.3%,两者的符合率为97.2%。应用该阻断ELISA对临床收集的猪、牛和羊共515份血清样品进行检测,JEV抗体阳性检出率分别为74.5%、13.3%和9.2%,抽样的血清中和试验结果与阻断ELISA检测结果的符合率为100%(9/9)。本研究成功建立了可适用于猪、牛和羊临床血清JEV抗体检测的阻断ELISA方法。 相似文献
3.
猪乙型脑炎（Epidemic Encephalitis B）是由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）引起的一种急性人兽共患传染病,猪主要特征表现为高热、流产、产死胎和公猪睾丸炎,感染率较高,发病率和死亡率较低,对国内养猪业和公共卫生都带来了巨大威胁。间接ELISA抗体检测方法具有价格低廉、操作简单、高通量、敏感性高、特异性强等优点,是猪乙型脑炎血清学抗体水平检测的主要方法。研究利用猪乙型脑炎间接ELISA抗体检测试剂盒对2012-2013年采集于山东、河南、河北等地的526份免疫猪血清样品进行了抗体检测,并进行了间接ELISA抗体检测试剂盒与乳胶凝集试验抗体检测试剂盒的符合率研究。旨在评价猪乙型脑炎间接ELISA抗体检测试剂盒的临床适用性及准确性,进而评价其临床应用效果,同时掌握我国猪乙型脑炎疫苗的群体免疫效果,了解我国部分地区猪乙型脑炎的免疫现状,为猪乙型脑炎的综合防控提供参考依据。 相似文献
4.
本研究利用纯化的原核表达乙型脑炎囊膜E蛋白作为包被抗原,建立了乙型脑炎间接ELISA诊断方法。对检测的各种条件进行了优化,优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2μg/mL,抗原最佳包被条件为37℃包被2 h,血清的最适稀释度为1∶160,酶标抗体最适稀释度为1∶5000,最佳封闭条件为1%BSA,阴阳性临界值判定标准为D492 nm=0.254。该方法不与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒阳性血清反应,其D492 nm0.254,说明该方法具有良好的特异性。采用该方法对150份疑似乙型脑炎血清样品进行检测,结果显示,与某猪乙型脑炎试剂盒相比符合率为90.77%,表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,因此,本研究成功建立了能特异性检测抗乙型脑炎血清抗体的ELISA检测方法。 相似文献
5.
为了研制乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒,将乙型脑炎病毒EⅢ基因克隆至原核表达载体p ET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。以纯化后的重组蛋白EⅢ包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒。SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重组蛋白分子质量约为30ku,经IPTG诱导后高效表达,且具有来良好的免疫原性。优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为4.7μg/m L,血清样本的阳性临界值为0.255。特异性试验结果表明,重组蛋白与猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环病等多种病原体的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果表明,血清稀释至1∶6400时仍检测为阳性。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于10%。用该试剂盒检测224份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为90.7%。研究结果表明,原核表达的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒敏感性、特异性和重复性较好,为猪流行性乙型脑炎的抗体水平检测、流行病学调查、类症鉴别等方面提供了重要方法。 相似文献
6.
《黑龙江畜牧兽医》2017,(4)
为了解福建省龙岩市猪乙型脑炎病毒(JEV)的隐性感染情况和使用疫苗后的血清抗体水平,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对龙岩市2011—2014年规模化猪场和农村散养户共858份猪血清样本进行了JEV的抗体水平检测,并对临床疑似猪乙型脑炎的41个病例进行了聚合酶链式反应(PCR)检测。结果表明:已免疫规模猪场和农村散养户JEV的血清抗体阳性率分别为72.17%和57.72%,规模场JEV的免疫合格率要好于散养户(P0.01);免疫猪群JEV的血清抗体阳性率(69.71%)与未免疫猪群JEV的血清抗体阳性率(68.89%)相比差异不显著(P0.05);2011—2014年检测规模猪场和农村散养户JEV血清抗体水平总体上差异不显著(P0.05);PCR检测41个疑似猪乙型脑炎病例,确诊阳性21份,阳性率为51.22%,其中农村散养户猪只的JEV核酸阳性率显著高于规模场(P0.01)。说明龙岩市JEV的免疫效果不理想,JEV感染仍较严重,应引起重视。 相似文献
7.
应用日本脑炎病毒(JEV)间接ELISA检测试剂盒,对所收集的山东省不同地区在2003~2007年间的2459份血清样本进行JEV抗体检测,并对不同地区、不同年龄阶段以及不同年份的血清学结果数据进行统计学分析。结果显示,所有调查猪场全部都表现为JEV抗体阳性,猪场的阳性率为100%;对不同种类、不同年龄阶段的猪血清检测结果表明,种猪的血清阳性率为95.6%,保育猪的血清阳性率为94.5%,育肥猪的血清阳性率为92.0%。 相似文献
8.
用纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白为抗原,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的gB-ELISA方法。最佳反应条件为：抗原包被浓度为3.15μg/mL,待检血清稀释度为1∶40。该方法对猪圆环病毒病、猪瘟、猪细小病毒病、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪乙型脑炎、猪布氏杆菌病5种疾病阳性血清和SPF猪阴性血清检测呈阴性反应。批间、批内试验变异系数均不超过8%。用该方法与HerdChek ELISA试剂盒同时对119份血清进行了平行检测,其相对敏感性、特异性和符合率分别为：75%、80.7%和79%。试验结果表明：猪伪狂犬病血清抗体gB-ELISA检测方法具有较高的敏感性和特异性,且重复性好,可用于猪伪狂犬病毒血清抗体检测。 相似文献
9.
本次试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)检测了曲靖市8个规模化猪场采集的1077份血清6种猪主要繁殖障碍性病毒病抗体。检测结果显示:猪瘟病毒(HCV)、猪伪狂犬病病毒-gE基因(ADV-gE)、猪细小病毒(PPV)、猪日本乙型脑炎(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒II型(PCV-2)血清抗体阳性检出率分别为"0"、22.28%、32.93%、52.99%、29.96%和21.88%。结果表明:检测的8个规模化猪场未感染猪瘟野毒,猪伪狂犬病、猪细小病毒、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征等疫病不同程度地存在野毒感染。 相似文献
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为探明不同紫云英(Astragalus sinicus L.)品种嫩梢矿质元素含量的差异,分析其菜用营养价值,本研究测定了10个不同紫云英品种的分枝期地上部嫩梢的8种矿质元素含量,同时,结合主成分分析法与系统聚类法筛选了适宜菜用的品种。结果表明紫云英嫩梢中矿质元素含量由高到低为钙(Ca)>磷(P)>镁(Mg)>铁(Fe)>锰(Mn)>锌(Zn)>铜(Cu)>硒(Se);矿质元素含量综合得分排名前3的品种分别为‘湘紫1号’、‘闽紫7号’和‘弋江籽’;将10个紫云英品种聚为四类(A,B,C,D),其中A,B,C类分别以高Ca, Fe及Cu含量为特征,D类为‘湘紫1号’,其矿质元素含量均较高,综合评价最高。因此,紫云英种质间嫩梢矿质元素含量均有不同程度的差异,‘湘紫1号’嫩梢矿质元素含量高,作为菜用综合品质高。 相似文献
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J?rgen S Agerholm 《Acta veterinaria Scandinavica》2013,55(1):13
The bacterium Coxiella burnetii has been detected in the fetal membranes, birth fluids and vaginal mucus, as well as in the milk and other excretions of several domestic mammals. The finding of C. burnetii in association with abortion, parturition and in the postpartum period has led to the hypothesis that C. burnetii causes a range of reproductive diseases. This review critically evaluates the scientific basis for this hypothesis in domestic mammals.The review demonstrates a solid evidence for the association between C. burnetii infection and sporadic cases of abortion, premature delivery, stillbirth and weak offspring in cattle, sheep and goats. C. burnetii induced in-herd epidemics of this complete expression of reproductive failure have been reported for sheep and goats, but not for cattle. The single entities occur only as part of the complex and not as single events such as generally increased stillbirth rate. Studies show that C. burnetii initially infects the placenta and that subsequent spread to the fetus may occur either haematogenous or by the amniotic-oral route. The consequences for the equine, porcine, canine and feline conceptus remains to the elucidated but that infection of the conceptus may occur is documented for most species. There is no solid evidence to support a hypothesis of C. burnetii causing disorders such as subfertility, endometritis/metritis, or retained fetal membranes in any kind of domestic animal species.There is a strong need to validate non-pathology based methods such as polymerase chain reaction for their use in diagnostic and research in relation to establishing C. burnetii as the cause of abortion and to adapt an appropriate study design and include adequate control animals when linking epidemiological findings to C. burnetii or when evaluating effects of vaccination in production herds. 相似文献
13.
F Lingaas 《Acta veterinaria Scandinavica》1991,32(1):97-105
Herd differences in disease incidence in 70 Norwegian pig herds were assessed by health card registrations. Such differences proved to be considerable. The incidence of the MMA-syndrome, mastitis, metritis and neonatal diarrhoea was higher in herds producing only weaners ("weaner herds") than in herds with combined production. The mean disease incidence in herds providing breeding stock for the Norwegian Pig Breeders' Association ("breeding herds") was at the same level as in ordinary combined production herds. There was no consistent relationship between changes in disease incidence and herd size, though the incidence of the MMA-syndrome was lower in the largest herds. 相似文献
14.
根寄生植物是禾草生长过程中的一种生物逆境,禾草内生真菌能增强其对生物或非生物逆境的耐受能力;然而,有关禾草内生真菌对不同密度根寄生逆境下禾草生长、内源激素水平和生物碱含量变化的研究鲜有报道。基于此,通过开展温室盆栽试验,以建立根寄生关系的带菌(E+)和未带菌(E-)紫花针茅及根寄生植物-甘肃马先蒿为研究对象,比较E+和E-紫花针茅在不同甘肃马先蒿寄生强度下生长、内源激素和生物碱含量变化。结果表明,与未寄生紫花针茅相比,随着甘肃马先蒿密度增加,紫花针茅生物量降低80%,株高、分蘖数和根长均降低25%,吲哚乙酸、脱落酸含量分别增加43%和51%,细胞分裂素含量降低50%。内生真菌侵染显著提高紫花针茅生长特性,增加内源激素和生物碱含量;带菌紫花针茅在根寄生逆境下生物碱含量持续增加,同时甘肃马先蒿利用根部木质部通道可获取寄主内生真菌合成的生物碱。由此可见,内生真菌通过调控紫花针茅体内有关生长和逆境预警相关内源激素水平及改变生物碱含量的方式增强紫花针茅对甘肃马先蒿根寄生逆境的耐受能力,为利用禾草内生真菌共生体修复甘肃马先蒿型退化草地提供新视角。 相似文献
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Anna Ohlson Jonas Malmsten Jenny Fr?ssling G?ran B?lske Anna Aspán Anne-Marie Dalin Ann Lindberg 《Acta veterinaria Scandinavica》2014,56(1):39
Background
Q fever is a zoonotic disease caused by the bacterium Coxiella burnetii. Prevalence data in ruminant species are important to support risk assessments regarding public and animal health. The aim was to investigate the presence of or exposure to C. burnetii in cattle, sheep, goats and moose, and to compare two enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). National surveys of antibodies against C. burnetii were performed for dairy cattle (n=1537), dairy goats (n=58) and sheep (n=518). Bovine samples consisted of bulk milk, caprine of pooled milk, and ovine of pooled serum. Antibodies were investigated in moose samples (n=99) from three regions. A one-year regional cattle bulk milk survey was performed on the Isle of Gotland (n=119, four occasions). Cattle, sheep and goat samples were analysed with indirect ELISA and moose samples with complement fixation test. For the sheep, goat, and parts of the cattle survey, samples were run in parallel by ELISAs based on antigens from infected ruminants and ticks. Bulk milk samples from the regional cattle survey and vaginal swabs from a subset of the sheep herds (n=80) were analysed for the agent by polymerase chain reaction. Spatial clustering was investigated in the national cattle survey.Results
The prevalence of antibodies in dairy herds was 8.2% with large regional differences. High risk clusters were identified in the southern regions. The prevalence among dairy herds on the Isle of Gotland varied from 55.9% to 64.6% and 46.4% to 58.9.0% for antibodies and agent, respectively, overall agreement between agent and antibodies was 85.2%. The prevalence of antibodies in sheep was 0.6%, the agent was not detected the vaginal swabs. Antibodies were not detected in goats or moose, although parts of the moose samples were collected in an area with high prevalence in cattle. The overall agreement between the two ELISAs was 90.4%.Conclusions
The prevalence of antibodies against C. burnetii in dairy cattle in Sweden shows large regional differences. The results suggest that C. burnetii is a rare pathogen among Swedish moose, dairy goat and sheep. ELISAs based on ruminant and tick antigen performed in a similar manner under Swedish conditions. 相似文献16.
异针茅作为青藏高原地区重要的乡土草种之一,是高寒草甸草原主要的建群禾草种类。迄今为止,有关异针茅所感染内生真菌的种类和分类地位的研究尚未见报道。基于此,以青海高原地区两个地理种群的异针茅为研究对象,采用常规分离培养形态观测和管家基因扩增目的片段基因并与已公布的内生真菌序列构建系统发育树的方法,确定异针茅感染内生真菌的种类和分类地位。结果表明:异针茅分离出的内生真菌菌落形态、生长速度和分生孢子形态等均与Epichloё属内生真菌的形态特征相似。编码蛋白tub和肌动蛋白actin序列构建的系统发育树表明,异针茅感染的内生真菌种类分别为Epichloёgansuensis和Epichloёsylvatica,而转录延长因子tef序列构建的系统发育树发现异针茅感染的内生真菌种类分别为Epichloёinebrians和E.sylvatica。由此可见,异针茅感染的内生真菌分别为甘肃内生真菌E.gansuensis、醉马草内生真菌E.inebrians和欧洲短柄草内生真菌E.sylvatica;进一步揭示异针茅感染的内生真菌表现出多样性,异针茅与其感染的内生真菌间未形成严格的宿主特异性。 相似文献
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试验旨在评价细胞因子IL-6和IL-17 mRNA转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。通过皮内变态反应试验和IFN-γ释放试验临床筛选结核病阳性牛和结核病阴性牛,采集试验动物抗凝全血,分离、收集外周血淋巴细胞,分别用牛结核菌素（PPD-B）、禽结核菌素（PPD-A）、重组蛋白CFP-10-ESAT-6（CE）、pET-32a载体标签蛋白（PET）或PBS 37℃培养6 h,用实时荧光定量PCR检测细胞因子IL-6、IL-17和IFN-γ的mRNA相对转录水平。结果显示,PET和空白对照PBS类似,不能刺激细胞因子mRNA转录水平的提高,表明CE中包含的PET对试验的影响可忽略不计;牛外周血淋巴细胞经PPD-B、PPD-A或CE刺激后,结核病阳性牛样品中IL-17和IFN-γ的mRNA转录水平均显著高于结核病阴性牛（P<0.05）,其中PPD-B刺激效果强于CE和PPD-A,而CE刺激的特异性更好;选取CE作为最佳刺激源,结果显示,IL-17和IFN-γ的mRNA转录水平之间相关性良好（spearman r=0.79）,并初步建立了基于IL-17和IFN-γ转录水平的实时荧光定量PCR检测方法;以此方法对14头结核病阳性牛进行临床检验,IL-17实时荧光定量PCR法的阳性样本检出率为85.7%,高于IFN-γ（71.4%）。本研究结果初步表明,牛分枝杆菌特异性抗原（PPD-B、CE）诱导的IL-17 mRNA转录水平与牛结核病相关,以CE为刺激源建立的IL-17实时荧光定量PCR检测方法具有用于牛结核病诊断的潜力。 相似文献
18.
蒲公英提取物对LPS诱导小鼠乳腺炎的减轻效应及其机制分析 总被引：1，自引：1，他引：0
旨在研究蒲公英提取物对内毒素（LPS）诱导小鼠乳腺炎的减轻效应及其机制分析。将小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组和蒲公英提取物高、中、低剂量组。蒲公英提取物高、中、低剂量组分别按10.0、5.0、2.5 g·kg-1灌胃给药,连续灌胃6 d,2次·d-1,空白组灌胃等体积生理盐水。末次给药1 h后,于小鼠乳房基部分别灌注50 μL 0.2 mg·mL-1 LPS,建立LPS诱导的小鼠乳腺炎模型,阳性组在建模后6和12 h腹腔注射5 mg·kg-1地塞米松。24 h后取血,分离血清,剥离乳腺组织。ELISA法测定小鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-6（IL-6）的含量,髓过氧化物酶（MPO）试剂盒测定小鼠血清MPO的含量,HE染色观察病理变化,Western blot法测定小鼠乳腺中TLR4蛋白以及NF-κB信号通路和MAPKs信号通路相关蛋白的表达。结果显示,蒲公英提取物高、中剂量组对LPS诱导的乳腺炎小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌有极显著抑制作用（P<0.01）,极显著降低小鼠血清中MPO的含量（P<0.01）;蒲公英提取物高、中剂量组能改善LPS诱导的小鼠乳腺组织的病理变化,极显著下调LPS诱导的小鼠乳腺中TLR4、p-IκB、p-p65、p-p38、p-JNK、p-ERK蛋白的表达（P<0.01）。结果表明,蒲公英提取物通过调控NF-κB和MAPKs信号通路对LPS诱导的小鼠乳腺炎有明显减轻作用,为蒲公英的临床开发及应用奠定了基础。 相似文献
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为了提高氟苯尼考在水中的溶解度,探讨氟苯尼考包合物批量生产工艺,采用胶体磨和喷雾干燥技术制备氟苯尼考-羟丙基-β-环糊精包合物,并用正交试验法优化工艺参数,以包合率和得率为判断指标,得到包合物的最佳条件为氟苯尼考与羟丙基-β-环糊精摩尔投料比是1∶1,包合时间为1 h,氟苯尼考在整个溶液体系中的药物浓度为6 mg/mL。所得包合物经红外光谱法、差示扫描量热分析法进行分析鉴定,表明氟苯尼考与羟丙基-β-环糊精形成了包合物,其包合率可达到83.74%,得率达98.48%,氟苯尼考溶解度由原来的1.25 mg/mL提高到了40.76 mg/mL。表明该工艺能够用于氟苯尼考-羟丙基-β-环糊精包合物的批量制备。 相似文献
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为探究硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致免疫抑制的颉颃作用,将336只11日龄非免疫健康罗曼雏鸡随机均分为7组：空白对照组（BC）、免疫对照组（VC）、环磷酰胺对照组（Cy）、sGPS3、sGPS5、sGPS6和药物对照组（APS）,每组6个重复,每个重复8只鸡。BC组和VC组注射0.5 mL生理盐水,其余组均肌肉注射8 mg/mL环磷酰胺0.5 mL,每天1次,连续3 d;14日龄时,除BC组外,其余组均用新城疫疫苗免疫,同时3个硒大蒜化多糖组分别注射0.5 mL浓度为1 mg/mL的sGPS3、sGPS5、sGPS6,APS组肌肉注射黄芪多糖注射液0.5 mL,Cy组、VC组和BC组注射生理盐水0.5 mL,每天1次,连续3 d,28日龄二免。分别于首免后的第7、14、21、28天,每组随机抽取6只罗曼鸡翼静脉采血,分离血清,β-微量法检测血清ND-HI抗体效价、ELISA法检测血清γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素2（IL-2）含量。称量体重后采集胸腺、脾脏和法氏囊组织并称重,计算免疫器官指数。结果显示,各给药组的血清ND-HI抗体效价、血清IFN-γ和IL-2含量、法氏囊指数均显著高于Cy组（P<0.05）;sGPS6组血清抗体效价、IFN-γ含量在28 d,血清IL-2含量在21、28 d均显著高于其余各组（P<0.05）;在免疫后21、28 d,4个给药组中sGPS6组体重、法氏囊指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）;在免疫后28 d,4个给药组中sGPS6组胸腺指数、脾脏指数最高,显著高于其余3个给药组（P<0.05）。结果表明,硒化大蒜多糖对环磷酰胺所致的免疫抑制具有颉颃作用,其中sGPS6组的活性最高,可作为新型免疫抑制颉颃剂的候选药。 相似文献