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1.
转基因大豆是目前我国进口量最大的转基因作物,为避免转基因大豆及制品的违法使用,快速筛查大豆中转基因成分的方法策略亟待开发。为检索已知商业化转基因大豆的外源基因信息,通过构建转基因大豆常用转化元件的数据库,建立了转基因大豆的筛查策略。结果表明:已知的15个转基因大豆转化事件中,利用Ca MV35S启动子、CP4-epsps基因、Bt基因、pat基因4个靶标元件的组合,可筛查12个转基因大豆的转化事件;另有3个转化事件需要使用转化事件特异性引物检测。使用4个靶标元件和转化事件组合的筛查方法检测的灵敏度可达到1 g·kg~(-1),可对大豆中的转化事件进行快速、高灵敏度的筛查。 相似文献
2.
转基因作物筛查用阳性质粒分子的构建及应用研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过分析全球商业化种植的转基因作物分子特征,选取常用的调控元件启动子CaMV35S、FMV35S和nos,终止子NOS、T-35S、g73′和E93′,标记基因bar、NPTII、hptII、pmi作为筛查靶标序列,通过重组PCR技术将这些元件克隆到双元载体pBI121上,构建成包含11个转基因元件的通用阳性质粒分子pBI121-ELEMENTS。质粒序列信息已提交至GenBank并获得序列号HM047294。该质粒分子对目前国内外批准的5类主要转基因作物(大豆、油菜、玉米、棉花和水稻)理论筛查覆盖率达到91.5%,对我国批准进口的27种转基因作物的理论筛查覆盖率达100%。以pBI121-ELEMENTS为阳性对照,筛查7个转基因品系,结果显示该分子能够有效用于转基因作物定性筛查。 相似文献
3.
在棉花种子的监管中，大量的样品需要进行转基因成分检测，建立快速、准确、低成本的转基因成分筛查方法十分必要。通过分析我国棉花种子市场和转基因棉花安全生产证书发放情况，建立了棉花种子中转基因成分快速筛查策略，并对市场上销售的棉花品种种子转基因特征特性纯度进行了检测。结果表明，联合使用CaMV 35S启动子、NOS终止子和Bt基因等3个元件的检测，可完成对棉花种子中转基因成分的快速筛查，检测灵敏度为1 g·kg－1；单用Bt基因可对抗虫棉种子的转基因特征特性纯度进行快速检测。本研究建立的筛查方法，可对棉花种子中转基因成分进行快速、高灵敏度的筛查。 相似文献
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转基因油菜是我国转基因生物安全监管的重要对象,为了解决检测机构常常面临的标准物质(样品)缺乏困境,统计我国批准进口和正在申请安全证书的11个转基因油菜品种,分析分子特征和相应的检测标准方法,确定每个转基因油菜品种的检测靶标序列。将11个转基因油菜品种的检测靶标序列通过基因合成的方法融合构建到pUC18载体上,研制出阳性质粒分子pYCID-1905,为转基因油菜的转化体鉴定检测提供了通用的阳性对照分子。结果发现,该质粒分子可同时用作国家标准(GB/T)、农业农村部公告、进出口检验检疫标准(SN/Y)和欧盟标准中普通PCR方法和实时荧光PCR方法的阳性对照,可以解决转基因油菜检测中缺乏标准样品的难题。 相似文献
5.
进口油菜籽中不同转基因品系的检测与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
对我国27批进口油菜籽进行了转基因成分检测和转基因油菜品系组成情况分析.利用已知转基因油菜RT73、T45、Oxy235、Topas19/2、MS1、RF1、RF2、MS8和RF3的特异性检测体系,对初检为阳性的转基因油菜籽样品进行扩增,扩增基因包括bar、PAT、GOX和NPTII.结果共检出25批转基因油菜籽,检出... 相似文献
6.
为了满足转基因玉米成分检测中阳性对照不易获得及不易长久保存的缺陷,通过分析公共数据库资源,建立了包含玉米内标准基因zSSIIb及遗传转化中常用的CaMV35S启动子、nos启动子、CaMV35S终止子、nos终止子的的标准分子.灵敏度检测发现,在检测体系中含有1 000个分子时,可以非常清楚扩增到所有5个片段的目的条带.随机挑选我国批准进口的7种转基因玉米,对标准分子进行验证,结果表明,在相应的阳性样品和标准分子中都能扩增到特异的目的条带,构建的标准分子可以满足作为转基因玉米筛选检测中阳性对照的要求. 相似文献
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应用多重荧光PCR快速筛查作物中转基因成分研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对我国批准进口的和获得农业转基因生物安全证书的转基因玉米转化体的序列分析发现,除DAS40278-9和BLVA430101外,CaMV35s启动子、NOS终止子、Cry1Ab/Ac基因和pat基因覆盖了21种玉米转基因转化体。通过引物组合筛选、反应体系优化、灵敏度测试、适用性测试等实验,建立了基于4个通用筛选元件及zSSIIb内源基因的五重荧光PCR和基于转化体特异性序列的二重荧光PCR检测转基因成分方法体系。方法参数测定结果表明,此方法特异性强、稳定性好,检测灵敏度达到0.05%。同时,此方法体系不仅适用于转基因玉米成分筛查,对大豆、水稻等多种作物进行转基因成分筛选鉴定也有良好的适用性。 相似文献
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对引进的美国大豆品种进行转基因成分的检测 总被引：7，自引：1，他引：6
利用田间表型鉴定和PCR检测相结合的方法,对从美国引进的46个大豆品种进行了转基因成分的检测.实验过程中,首先通过喷洒草甘膦对待测材料进行表型鉴定,然后通过PCR分子检测分析CaMV35S启动子和NOS终止子的有无,初步判定引进材料是否为转基因大豆,最后对目的基因CP4-EPSPS进行检测,进一步确定所测材料是否为抗草甘膦转基因大豆.大豆本身的凝集素基因作为PCR检测的内置检测标准,有效排除了由于DNA质量、实验操作等因素对检测结果的影响.结果表明,在所检测的46个引进品种中,5个是抗草甘膦转基因品种,41个是非转基因品种,它们可作为我国大豆新品种选育的亲本材料. 相似文献
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转基因油菜RF1的外源基因插入位点分析与事件特异性检测方法研究 总被引：5，自引：1，他引：4
采用基因组步移和巢式PCR方法研究了转基因油菜雄性不育恢复系RF1外源基因插入位点序列特征,并根据此特征建立了RF1转化事件特异性检测方法。从RF1基因组DNA中分离到外源基因插入位点的左边界旁侧序列798bp,包括335bp的插入载体序列和463bp的旁侧基因组序列。根据已发表的RF1右边界旁侧序列的信息,发现外源T-DNA在向油菜基因组整合的过程中,在整合位点处有75bp的基因组序列丢失。根据分离的RF1左边界旁侧序列,建立了RF1事件特异性定性检测方法,扩增片断大小为284bp。利用建立起来的RF1事件特异性定性检测方法可以准确的将转基因油菜RF1与其它的转基因油菜品种区分开,检测灵敏度达到5个拷贝（0.013%）。该事件特异性检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因油菜品种RF1的身份识别提供了有效的方法。 相似文献
10.
油菜的转基因育种 总被引：9，自引：3，他引：9
官春云 《中国油料作物学报》2005,27(1):97-103
介绍了油菜基因转移的方法,已转移到甘蓝型油菜中的基因,我国已进入中间试验的转基因油菜品系,国外已育成的油菜转基因品种,加拿大种植抗除草剂转基因油菜品种的实践等.并针对油菜转基因育种工作提出几点建议. 相似文献
11.
K. Rajasekaran R. Majumdar C. Sickler Q. Wei J. Cary D. Bhatnagar 《Journal of Crop Improvement》2017,31(4):628-636
Screening of gene manipulation events (transgenic, mutation/genome editing, etc.) is a cost/labor-intensive and time-consuming process in plant science research. While polymerase chain reaction (PCR) is the most commonly used method for screening, the process still requires efficient DNA extraction and subsequent confirmation. However, PCR cannot predict gene expression. To screen a larger number of transgenic plants, it would be ideal to develop a quick and reliable screening procedure. We have applied a Liberty® leaf-painting method (against bar gene under 4x35S promoter) to screen transgenic maize (Zea mays L.) plants and validated the results through PCR and quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Liberty leaf painting at 500 mg L?1a.i. was > 95% accurate in identifying transgenic events that agreed with the PCR results. Further investigation of bar gene expression in sensitive lines that were PCR positive shows very low expression of the bar gene. We have provided a simple, and rapid assay to determine the transgene expression potential of maize plants expressing the bar gene. The herbicide can be applied to a fully expanded leaf and evaluated one week after application. Green or partially green leaf blades indicate high or moderately high expression of the bar gene and a total yellowing indicates absence or extremely low expression of the bar gene in the transgenic plants. A small volume of Liberty solution is adequate to test hundreds of maize plants, and the assay is reproducible with a high frequency (> 95%) and also displays good correlation with gene expression in planta. 相似文献
12.
以转CP4-epsps基因玉米为研究对象,用玉米内标准基因z SSIIb及3种常见转基因成分(Ca MV35S启动子、NOS终止子、CP4-epsps基因)为检测靶标,建立基于直接PCR技术的玉米转基因成分筛查方法。此方法不用提取纯化DNA,只需取直径约为0.5 mm的叶片加到PCR反应体系中进行扩增,与常规PCR方法相比,在保证结果准确性的同时,大大缩短检测时间,提高工作效率。此方法具有操作简便、结果可靠等优点,适用于玉米叶片中转基因成分的快速筛查。 相似文献
13.
本文参考出入境检验检疫行业标准中转基因油菜外源基因的PCR检测体系,分析了18种不同DNA聚合酶对定性PCR检测转基因油菜OXY235中的CaMV35S启动子的影响。结果表明,不同DNA聚合酶对CaMV35S启动子定性PCR检测中非特异扩增的产生以及检测灵敏度影响较大。其中热启动Taq酶效果较好,目标条带清晰,检测灵敏度高,而且完全没有非特异性扩增条带,非常适合用于定性PCR检测。对于同样条件下无法有效扩增0.1%DNA样品的Taq酶,则不推荐用于检测途径。 相似文献
14.
转WYMV-Nib8基因抗黄花叶病小麦的鉴定及优良株系的选育 总被引：3，自引：0，他引：3
小麦黄花叶病是我国冬麦区亟待解决的重要病害之一。为了给应用病毒复制酶基因介导的转基因抗病小麦新品种（系）选育提供依据，对利用基因枪法将WYMV-Nib8基因和bar基因共转化扬麦158获得的15个T2代株系进行了黄花叶病抗性鉴定，筛选出4个高抗病株系和1个剔除bar基因的高抗病株系；连续多年抗病性鉴定结果表明，通过转基因技术获得的5个株系不但抗病性优良而且可以稳定遗传。以转基因材料为亲本之一，通过常规杂交、回交获得1个兼抗小麦黄花叶病和白粉病且农艺性状优良的新品系BR1014。 相似文献
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为调查分析我国的常规大豆育种材料中是否混入转基因大豆品系,选取706份大豆品系,对可能含有的
外源转基因调控元件（CaMV35S启动子、FMV35S启动子和NOS终止子）以及针对我国批准进口的主要耐除草剂转
基因大豆转化体（GTS40-3-2和MON89788）成分进行PCR扩增,同时根据MON89788转化体侧翼序列和目的基因
设计引物做特异性检测,为其定性检测提供技术支撑。结果表明,在选取的所有样品中,最终测得含有CaMV35S启
动子的转基因成分所占比例为1％,含有FMV35S启动子的转基因成分所占比例为0.85％,含有NOS终止子的转基
因成分所占比例为0.71％,耐除草剂转基因品系MON89788所占比例为0.85％,以此评估转基因大豆所占比例,为
农业转基因监管部门开展转基因大豆监管工作提供数据支持。 相似文献
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油菜多心皮性状可显著增加油菜的每角果粒数，在油菜高产育种中有潜在的应用价值。前期研究发现，芥菜型多心皮油菜J163-4可形成稳定的四心皮性状，且小G蛋白基因BjROP10可能参与调控其多心皮的形成，但其分子机制尚不明确。本研究利用CRISPR/Cas9技术，构建了BjROP10的双靶点载体，并遗传转化芥菜型多心皮油菜J163-4。在T0代，通过筛选鉴定获得了20株阳性苗，其中13株心皮数目发生改变。通过测序分析了7株心皮数发生变化的转基因阳性植株的BjROP10序列突变情况，结果显示其目标基因序列发生变异，导致无法编码形成正常的BjROP10蛋白。本研究对进一步解析BjROP10基因响应CLV信号调控油菜心皮数发育的功能提供了材料基础，也为研究油菜多心皮性状发育的分子机制奠定理论基础。 相似文献