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1.
旨在探讨STAT6介导的巨噬细胞极化对布鲁氏菌胞内生存的影响。本研究采用布鲁氏菌光滑株S2308（S2308）和粗糙型疫苗株RB51（RB51）侵染巨噬细胞。利用qRT-PCR检测M1型巨噬细胞标志因子p65、NOS2和IL-1β,M2型巨噬细胞标志因子STAT6、ARG1、IL-10的mRNA表达水平;流式细胞术检测M1型标记分子CD86和M2型标记分子CD206的表达;Western blot检测p-STAT6蛋白及抑制剂AS对蛋白的抑制作用;ELISA检测M1型细胞因子TNF-α、IL-12和M2型细胞因子IL-4、IL-10的表达量;最后对胞内菌落进行CFU计数。qRT-PCR结果显示,在感染8、12 h时可显著诱导M1型因子mRNA转录表达,72 h时低表达,而M2型因子在72 h时高表达;流式细胞术结果显示,S2308感染12 h可显著诱导CD86的表达,感染72 h可显著诱导CD206的表达,但RB51对二者无影响;Western blot结果显示,S2308菌株在感染72 h时激活STAT6信号通路,而RB51几乎不激活该通路,抑制剂AS在2 μmol·L-1浓度时抑制效果最佳;ELISA结果显示,AS抑制剂可显著抑制IL-4、IL-10的释放,并促进TNF-α、IL-12的释放;CFU计数结果显示,S2308组的胞内菌呈先降低后显著上升趋势,加入AS抑制剂后可显著抑制布鲁氏菌胞内复制。布鲁氏菌S2308在感染后期能够通过STAT6诱导M1型巨噬细胞向M2型转化,并促进Th2型细胞因子的释放,从而有利于布鲁氏菌的胞内生存。而RB51几乎不激活该通路,不影响胞内生存。 相似文献
2.
《畜牧兽医学报》2017,(4)
本试验旨在探究刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9(CDPK9)对小鼠Ana-1巨噬细胞活性及功能的影响。利用激光共聚焦技术验证CDPK9与Ana-1巨噬细胞的结合情况;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度CDPK9处理24h对Ana-1巨噬细胞增殖活性的影响;利用流式细胞术检测不同浓度CDPK9处理48h对Ana-1巨噬细胞凋亡及吞噬功能的影响;采用总一氧化氮试剂盒检测不同浓度CDPK9处理48h对Ana-1巨噬细胞NO分泌量的影响;利用细胞因子ELISA试剂盒检测不同浓度CDPK9处理48h对Ana-1巨噬细胞TNF-α、TGF-β1、IL-10、IL-1β分泌的影响。结果如下:CDPK9能够与Ana-1巨噬细胞结合。CDPK9对Ana-1巨噬细胞增殖具有抑制作用,较高浓度时抑制作用明显。CDPK9能够显著提高Ana-1巨噬细胞的凋亡比例,同时促进其吞噬能力。CDPK9上调了Ana-1巨噬细胞NO产量。细胞因子IL-1β和TNF-α的表达量上升,而TGF-β1和IL-10的表达量有所下降。CDPK9能够与巨噬细胞结合并通过多种途径影响其活性及免疫功能。 相似文献
3.
本试验旨在研究高浓度葡萄糖对牛肺泡巨噬细胞（BAMs）促炎细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α释放的影响及其机制是否与RAGE-TLR4相关信号通路串扰有关。将BAMs随机分为正常糖组（NG）、高糖组（HG）、高糖+RAGE抑制剂组（H+F）、高糖+TLR4抑制剂组（H+T）及DMSO组,处理12 h后收集上清及下层细胞。采用qRT-PCR和Western blot检测细胞RAGE、TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA及蛋白表达情况,ELISA检测上清TNF-α、IL-1β、IL-6浓度。结果表明,高糖极显著上调RAGE、TLR4、MyD88和NF-κB p65基因、蛋白表达水平以及上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度（P<0.01）;RAGE抑制剂与TLR4抑制剂均极显著抑制高糖引起的RAGE、TLR4、MyD88和NF-κB p65基因、蛋白表达水平上调以及IL-1β、IL-6、TNF-α释放（P<0.01）,即RAGE与TLR4均在激活RAGE/TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路中发挥调控作用。综上所述,高糖能够通过RAGE-TLR4串扰引起牛肺泡巨噬细胞释放促炎细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α,进一步阐明了高糖促进牛肺泡巨噬细胞炎症反应的分子机制。 相似文献
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为探究J亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫反应的影响,试验利用密度梯度离心法和贴壁法,从鸡脾脏组织中分离得到单核细胞,并通过显微镜观察培养至24 h、72 h、120 h单核细胞的分化过程;通过PCR扩增ALV-J特异性引物H5/H7,验证脾脏巨噬细胞对ALV-J的易感情况;同时,通过qPCR验证感染ALV-J后鸡原代脾脏巨噬细胞中炎性因子、干扰素及肿瘤抑制因子的表达。结果显示：单核细胞分化至第120 h形成形态正常的巨噬细胞,通过流式细胞技术检测鸡巨噬细胞表面特异性标记蛋白发现,84.9%的细胞为KUL01阳性细胞;鸡原代脾脏巨噬细胞对ALV-J易感,并且ALV-J可整合进鸡原代脾脏巨噬细胞基因组中;对感染ALV-J的鸡脾脏巨噬细胞进行形态观察,发现ALV-J感染导致鸡脾脏巨噬细胞形态逐渐萎缩直至死亡;ALV-J感染6 h、12 h、24 h及48 h可诱导鸡原代脾脏巨噬细胞炎性因子（IL-1β、IL-6）的表达显著上调,在ALV-J感染24 h、48 h诱导肿瘤抑制因子（TNF-α）的表达显著上调（... 相似文献
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《中国兽医杂志》2018,(12)
为明确DNA甲基化是否参与LPS诱导的奶牛乳腺炎,本试验研究了DNA甲基化抑制剂对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症因子表达的影响。首先用浓度为0μg/mL、1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL的LPS分别处理奶牛乳腺上皮细胞6 h、12 h、24 h,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测白介素-6(IL-6)、牛防御素(BNBD-5)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达水平,ELISA法测TNF-α的浓度,随后用浓度为1.0μmol/L、2.5 umol/L和5.0 umol/L的DNA甲基化转移酶抑制剂(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-AZA)分别处理奶牛乳腺上皮细胞24 h、48 h、72 h,qRT-PCR检测TNF-α的mRNA表达水平。结果显示LPS处理后,IL-6、BNBD-5、TNF-α的mRNA表达水平和TNF-α的蛋白水平显著上升;5-AZA处理后的TNF-α的表达量相对于LPS处理组显著上升。表明DNA甲基化参与LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TNF-α的表达上调。 相似文献
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为明确PYY对巨噬细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本试验分离培养健康小鼠腹腔巨噬细胞,不同浓度PYY预处理后,以LPS刺激。ELISA方法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量,半定量PCR方法检测细胞中TNF-α、IL-6mRNA表达变化。结果显示：高浓度的PYY1-36（10-9-10-7 mol/L）和PYY3-36（10-8-10-7 mol/L）对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α分泌具有显著抑制作用（P〈0.05）;PYY1-36对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌无明显作用（P〉0.05）;不同浓度PYY3-36（10-11-10-7 mol/L）对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌均具有显著抑制作用（P〈0.05）。表明PYY对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α及IL-6的分泌具有一定的抑制作用,提示PYY可能通过抑制炎性细胞因子的分泌而抑制炎症性疾病的发生发展。 相似文献
8.
《中国兽医学报》2019,(12)
分析鸭呼肠孤病毒(DRV)人工感染雏鸭后病毒的复制、NF-κB、TNF-α、IL-6与脾脏损伤之间的动态关系,初步探讨DRV感染机制和病毒与宿主之间的作用关系,为DRV致病机制的研究提供一定理论基础。运用HE染色对脾脏损伤程度进行分级,免疫组化定位病毒所在位置,并运用qRT-PCR检测分析DRV、NF-κB、TNF-α及IL-6的相对表达量。HE染色结果显示,DRV感染后1 d脾脏出现肿胀、出血,感染后5 d出现坏死,随后形成"肉芽肿"结构,坏死灶较小的已经完全机化;免疫组化结果显示,DRV主要存在于巨噬细胞;qRT-PCR结果显示,NF-κB和TNF-α相对表达量均是在感染后5 d达到峰值,IL-6从感染后3 d开始上调,且感染后7 d表达上调显著。结果表明,雏鸭感染DRV后病毒主要存在于巨噬细胞,且脾脏损伤与病毒的复制呈正相关;细胞因子NF-κB、TNF-α和IL-6在感染过程中表达上调,进而引发炎症反应,说明DRV感染雏鸡后引起脾脏损伤的过程中NF-κB、TNF-α和IL-6起着重要作用。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2016,(2)
为研究日本血吸虫钙网质蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,Sj CRT)活化小鼠巨噬细胞的功能,利用杆状病毒昆虫细胞表达系统所表达的真核重组的Sj CRT蛋白与巨噬细胞共培养72 h,采用流式细胞术检测巨噬细胞表面趋化因子受体CCR7的表达。收集Sj CRT蛋白刺激72 h后的巨噬细胞,抽提RNA并反转录为c DNA,利用RT-PCR检测环加氧酶(cyclooxygenase,COX-2)、磷脂酶A2(phospholipases A2,PLA2)、TNF-α和IL-1β基因的表达。Sj CRT与巨噬细胞共孵育72 h后收集上清,ELISA检测上清中TNF-α的含量,Griess法测上清中NO的含量。流式结果显示,与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组的巨噬细胞表面CCR7的表达量增高且差异具有显著统计学意义(P0.05)。与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组巨噬细胞的COX-2、c PLA2、TNF-α和IL-1β表达量显著升高。ELISA结果显示,Sj CRT能够刺激巨噬细胞分泌致炎性因子TNF-α。Griess法表明Sj CRT能够促进巨噬细胞分泌NO。本研究结果表明Sj CRT能活化小鼠巨噬细胞,为阐明其在RA血吸虫疫苗中的功能等提供基础资料。 相似文献
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研究隆朋麻醉对犬4种促炎因子(IL-1β、IL-2、IL-8及TNF-α)的影响。12只健康犬分别于麻醉前(0 h)、麻醉后0.5、2、8、24、48、72 h及120 h共8个时间点,空腹采5 mL血离心取血清,动态检测IL-1β、IL-2、IL-8及TNF-α水平。结果为:IL-1β组只有麻醉后2 h的血清中IL-1β浓度显著低于0 h对照值(P0.05),其他各组的IL-1β浓度虽低于与0 h对照值,但比较差异不显著(P0.05)。IL-2在麻醉后出现下降趋势,在麻醉后48 h显著低于0 h对照值(P0.05),之后开始上升并于120 h基本恢复正常。IL-8组各时间点与0 h对照值比较皆差异不显著(P0.05)。TNF-α在麻醉后出现下降趋势,其中24、48 h与0 h对照值比较差异显著(P0.05),48 h后出现上升趋势,72 h与0 h对照值比较已差异不显著(P0.05),120 h基本回复正常。隆朋单一麻醉对犬4种细胞因子存在一定影响,各细胞因子在120 h后基本恢复正常。 相似文献
11.
采用重组RTB蛋白刺激RAW264．7细胞,对iNOS、IL-6和TNFJamRNA表达及IκB-α和NF-κBp65磷酸化蛋白表达进行分析,探讨重组RTB蛋白对巨噬细胞活化及对NF-xB信号通路的影响。结果显示,重组RTB蛋白组RAW264．7细胞iNOS、IL-6和TNF—αmRNA的表达显著高于对照组（P〈0．01）,并呈现时间和计量依赖性;加入NF—κB抑制剂BAY后,iNOS、IL-6和TNF0amRNA表达降低（P〈0．05或P〈0．01）。随RTB刺激RAW264．7时间的延长,IκB-α蛋白的磷酸化程度增强,NF-κBp65磷酸化蛋白表达逐渐增高,表明重组RTB蛋白具有促进巨噬细胞活化及活化NF-κB信号通路的功能。 相似文献
12.
先分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经差速贴壁法纯化后,随机分为6组：空白对照组、0.5mg/L脂多糖（LPS）组、10-6 mol/L孕酮（P4）组、LPS＋10-5 mol/L P4组、LPS＋10-6 mol/L P4组、LPS＋10-7 mol/L P4组。各组在处理12、24h分别提取上清液,ELISA法测TNF-α和IL-1β的含量;各组在处理24h分别提取细胞总RNA,用RT-PCR法测TLR4、CD14、MD2mRNA的表达。结果显示,处理12、24h,0.5mg/L LPS组TNF-α和IL-1β的含量均极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4组与对照组差异不显著（P〉0.05）;LPS＋10-5 mol/L P4组极显著低于对照组（P〈0.01）;LPS＋10-6 mol/L P4组显著低于对照组（P〈0.05）;而LPS＋10-7 mol/L P4组TNF-α的表达差异不显著（P〉0.05）,IL-1β的表达差异显著（P〈0.05）。说明P4可降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,且呈剂量依赖关系。LPS单独处理,TLR4和CD14mRNA的表达极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4单独处理与对照组无显著差异（P〉0.05）;分别添加1-5、10-6、10-7 mol/L P4组均极显著降低LPS诱导TLR4和CD14mRNA的表达（P〈0.01）,而MD2mRNA的表达差异不显著（P〉0.05）。说明P4可极显著降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和CD14mRNA表达,但对MD2mRNA表达影响不显著。结果显示,P4能抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,此过程与细胞TLR4和CD14表达下降相关,而与MD2的表达无关。 相似文献
13.
试验旨在探究紫草素凝胶对驴伤口愈合的效果，为皮肤无瘢痕愈合提供参考。用不同浓度的紫草素对体外培养的驴巨噬细胞进行处理，分别检测细胞中TGF-β1、IL-10、TNF-α和IL-6的mRNA与细胞上清液中蛋白的表达水平，以确定紫草素的最佳添加浓度；建立驴皮伤口模型，在伤口表面涂抹紫草素凝胶，拍照、HE染色观察伤口愈合情况，并检测驴皮肤中伤口愈合相关基因和血清的表达水平。结果表明，与对照组相比，添加不同浓度的紫草素均能降低相关炎症因子的表达，其中10 μmol/L紫草素效果最佳。在驴皮伤口上涂抹紫草素凝胶第11天时，紫草素组的伤口收缩率极显著高于对照组（P<0.01）；HE染色发现，第11天时紫草素中的组织逐渐排列整齐；第60天时，紫草素组中表皮层的厚度相对减少；实时荧光定量PCR结果表明，第11天时，紫草素组中TGF-β1、IL-10 mRNA表达极显著升高（P<0.01），TNF-α、IL-6 mRNA的表达极显著降低（P<0.01）；第3天时，紫草素组血清中TGF-β1、IL-10的浓度升高，TNF-α、IL-6浓度极显著降低（P<0.01）；第7天时，紫草素组TGF-β1浓度显著降低（P<0.05），TNF-α浓度极显著降低（P<0.01），且IL-10的浓度显著升高（P<0.05）。综上，与对照组相比，添加不同浓度的紫草素均能降低相关炎症因子的表达，其中10 μmol/L紫草素效果最佳，能促进驴皮伤口的愈合。 相似文献
14.
Sepsis is a major cause of death in veterinary medicine, although a better prognosis can result from an early diagnosis. To speed the diagnosis, the biomarkers TNF-α and IL-6 can provide valuable information regarding systemic inflammatory response. The purpose of this study was to investigate the changes in cytokine levels in an experimental model of sepsis using ELISA and real-time PCR. Ten adult Beagles were studied; seven received an IV bolus of high dose lipopolysaccharide solution (1mg/kg) to induce sepsis. The remaining three beagles were the control group. Blood samples were collected before and 1, 3, 6, 12, 24 and 48 h after administering LPS. Serum IL-6 level peaked at 3h (1.89 ± 0.10 ng/ml) and serum TNF-α peaked at 1h (1.11 ± 0.01 ng/ml). The expression of IL-6 mRNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) increased 62-fold compared to the control group at 1h; TNF-α mRNA increased by 4.5-fold at 1h. The expressions of IL-6 and TNF-α mRNA in PBMCs changed more rapidly than serum IL-6 and TNF-α concentrations. In addition, TNF-α mRNA levels in PBMCs remained elevated longer than serum TNF-α. Our study establishes the basis for future work aimed at a better understanding of the systemic inflammatory response to infection and sepsis in canine patients. 相似文献
15.
旨在探讨硒对树突状细胞（dendritic cells,DCs）和巨噬细胞功能的影响,试验将硒分别与髓源性树突状细胞（bone marrow derived dendritic cells,BMDCs）和腹腔巨噬细胞共同培养后,用流式细胞术检测未成熟BMDCs和巨噬细胞的吞噬活性以及BMDCs上的MHCⅡ、CD86、CD80和CD40的表达量,测定经硒处理后的成熟BMDCs对刺激同种异体淋巴细胞增殖和抗原递呈能力,并用ELISA检测BMDCs和巨噬细胞上清液中细胞因子（IL-12、IL-1β、IFN-γ、IL-6、IL-10、TNF-α、NO）水平的变化。结果显示,当硒的质量浓度在0.18~0.09 mg·L-1时,BMDCs和巨噬细胞的吞噬活性显著增强（P<0.05）,并且BMDCs上的MHCⅡ、CD86和CD80的表达量显著升高（P<0.05）,对刺激同种异体淋巴细胞的增殖和抗原递呈能力也显著增强（P<0.05）。此外,在BMDCs的上清中,IFN-γ、IL-12和IL-10的含量显著升高（P<0.05）;在巨噬细胞的上清中,IFN-γ、TNF-α和NO的含量显著升高（P<0.05）。结果表明,一定质量浓度的硒可以增强树突状细胞和腹腔巨噬细胞的功能,值得进一步探究硒对免疫功能的影响。 相似文献
16.
为探究Toll样受体(TLRs)介导的信号通路在马链球菌马亚种(S.equi)感染小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用,收集S.equi感染后不同时间点的RAW264.7细胞,提取总RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞Toll样受体1、2、6(TLR1、TLR2、TLR6)、接头蛋白骨髓分化蛋白88(MyD88)及细胞因子IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染RAW264.7细胞后6h时,TLR1、TLR2、TLR6与MyD88mRNA水平均较对照组没有显著差异(P>0.05);感染后12h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达量未出现明显上升(P>0.05),而MyD88mRNA水平极显著升高(P<0.01);感染后24h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达水平出现极显著升高(P<0.01),MyD88mRNA表达没有显著变化(P>0.05),且IL-10和IL-12mRNA水平与对照组相比极显著升高(P<0.01),IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平均极显著下降(P<0.01)。结果表明,TLRs介导的信号通路参与S.equi感染RAW264.7细胞的免疫应答反应。 相似文献
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To investigate the correlation between avian tuberculosis and duck amyloidosis, the liver, lung, spleen, kidney, duodenum and pectoralis muscle of ducks naturally infected with Mycobacterium avium subsp. avium were used to detect amyloidosis by Congo red staining and potassium permanganate-Congo red staining. The expression level of IL-1β, IL-6, IL-10, TNF-α and SAA2 were detected by quantitative real-time RT-PCR (qRT-PCR). The results showed that the liver, lung, spleen, kidney, duodenum and pectoralis muscle of the infected ducks exhibited amyloid proteins under ordinary light microscopy and the polarization light under polarized light microscopy. However, no amyloid deposition in potassium permanganate-Congo red staining sections indicated that the amyloidosis was AA amyloidosis. In addition, the expression level of IL-1β, IL-6, IL-10, TNF-α and SAA2 increased from 4 to 43. This study showed that avian tuberculosis could induce secondary amyloidosis in naturally infected ducks. 相似文献