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《果树学报》2021,(8)
【目的】探究CclSAUR49基因对柑橘类柠檬苦素生物合成的影响。【方法】通过高效液相色谱(HPLC)检测叶片中的诺米林和柠檬苦素含量;利用实时荧光定量PCR分析基因的表达量。分别从柚和湖北早实枳中克隆CclSAUR49基因编码序列(coding sequence,CDS)及启动子,利用瞬时转化烟草对CclSAUR49蛋白进行表达定位;通过遗传转化湖北早实枳分析该基因的组织表达特性及其对类柠檬苦素生物合成的影响。【结果】类柠檬苦素含量和CclSAUR49表达水平在2个沙田柚品种间以及叶片的生长发育中均呈显著负相关。CclSUAR49蛋白定位于质膜和细胞核。从湖北早实枳中克隆得到的CclSAUR49基因的启动子序列中不含吲哚乙酸(IAA)响应元件。启动子活性分析发现,CclSAUR49基因主要在茎、根和老叶中表达,在嫩叶中没有表达。超量表达CclSAUR49导致类柠檬苦素含量显著降低,植株的叶片和节间显著伸长,茎增粗。【结论】柑橘CclSAUR49基因的表达有明显的组织特异性,对类柠檬苦素的合成或积累有抑制作用。 相似文献
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《果树学报》2016,(2)
【目的】获得诱导型基因Cp PGIP2启动子,并分析该启动子的功能。【方法】以番木瓜Cp PGIP2基因c DNA序列(HQ660394)搜索番木瓜基因组DNA序列,获得一段约2 000 bp的5’端上游DNA序列(ABIM01005077),参照该序列设计PCR特异引物,以番木瓜叶片DNA为模板克隆该启动子,并进行生物信息学分析。将3个启动子片段替换p CAMBIA1301载体中的Ca MV 35S启动子,构建缺失启动子表达载体,以GUS瞬时表达检测缺失启动子表达活性。【结果】获得了Cp PGIP2起始密码子上游长为1 981 bp的调控序列,经分析该序列含有真菌、脱落酸、赤霉素、光照等多种响应元件,为诱导型启动子。构建了1个启动子全长表达载体和2个5’端缺失启动子表达载体,分别命名为p D0-1981、p D1-1204和p D2-261。启动子在番木瓜果肉中的瞬时表达显示,长度为1 204 bp的启动子表达活性最强。并且,该启动子在根、茎、叶、果肉和愈伤组织中均有不同程度的表达,在近外果皮的果肉处和根部表达最明显。【结论】本研究获得了Cp PGIP2启动子序列,确定了表达活性最强的启动子长度,初步分析了启动子的表达模式和顺式作用元件,为进一步深入研究Cp PGIP2基因功能以及将该启动子应用于植物基因工程育种奠定了基础。 相似文献
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《果树学报》2017,(9)
【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。 相似文献
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采用两种策略增强了马铃薯卷叶病毒(PLRV)CP基因的水溶性原核表达。首先,用5种可表达出分子伴侣的质粒分别转化重组菌TOP10(p BAD-LRCP),获得了既含p BAD-LRCP又含分子伴侣质粒的转化子;诱导转化子中PLRVCP基因与分子伴侣基因同时表达,SDS-PAGE结果表明,从转化子提取的水溶性蛋白中有明显的PLRV重组CP条带,即分子伴侣增进了重组CP的水溶性表达。其次,将PLRV-CP基因定向插入p ColdⅠ中构建了该基因的冷激诱导原核表达载体p Cold-LRCP,15℃、IPTG诱导24h,SDS-PAGE分析表明,从重组菌BL21(p Cold-LRCP)提取的上清蛋白中有明显的PLRV重组CP条带。试验结果表明,分子伴侣与冷激蛋白基因csp A的启动子均可提高PLRV-CP基因的水溶性表达,且后者的表达水平高于前者。 相似文献
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韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建 总被引：1，自引：1，他引：1
根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。 相似文献
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《果树学报》2016,(2)
【目的】应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因3’端c DNA全长序列,选取SFB基因变异区上游距起始密码子61 bp处、大小为29 bp的片段作为干扰序列,棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR(Fusion PCR)构建SFB基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihp RNA),再酶切连接到植物表达载体p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,构建SFB基因RNAi表达载体;用冻融转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【结果】测序结果表明臂长29 bp、茎环242 bp的SFB基因ihp RNA结构融合成功,双酶切检验和PCR验证结果表明,该结构正确地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,说明SFB基因的RNAi表达载体p CAMBIA-RNAi-SFB构建成功;PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中。【结论】研究结果表明,应用融合PCR结合酶切连接的方法构建SFB基因的RNAi表达载体是可行的,为RNAi技术在果树自交不亲和性状改良上的应用创造了条件。 相似文献
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《果树学报》2016,(4)
【目的】在京秀(Vitis vinifera‘Jingxiu’)葡萄中克隆类钙调磷酸酶B亚基蛋白基因Vv CBL4及其启动子,分析Vv CBL4的表达特性与逆境胁迫的关系。【方法】用RACE技术克隆Vv CBL4的全长,实时荧光定量PCR检测Vv CBL4在不同逆境下的表达;用同源克隆技术获得Vv CBL4的启动子,在烟草叶片中瞬时表达分析Vv CBL4启动子的活性。【结果】Vv CBL4全长为959 bp,ORF为642 bp,编码213个氨基酸,具有3个EF手钙结合结构域。Vv CBL4在根部表达量最高,其次是果实。Vv CBL4的转录本能对干旱、低温和盐胁迫处理快速做出响应。Vv CBL4启动子富含与逆境响应相关的顺式作用元件。干旱、低温和盐胁迫处理能够增强启动子活性。【结论】获得Vv CBL4及其启动子序列,Vv CBL4的表达能对逆境胁迫做出响应,Vv CBL4启动子的活性受逆境胁迫诱导,说明Vv CBL4在葡萄逆境胁迫反应中具有重要的作用。 相似文献
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以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为试材,克隆LSV16 k D基因,连接到原核表达载体p ET-28a(+)上。将获得的重组质粒p ET-28a(+)+16 k D转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到了高效表达的16 k D蛋白,融合蛋白分子量约为20 k D。融合蛋白经过镍柱纯化后作为抗原免疫注射小鼠,制备得到16 k D蛋白抗血清。Western blot分析显示所制备的抗血清与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应;通过ELISA检测和RT-PCR检测百合样品,证实制备的抗血清与LSV侵染的百合叶片发生了相同的特异性反应。结果表明,目的蛋白表达成功,所制备的抗血清具有特异性,可用于LSV的快速检测、免疫组织化学以及16 k D蛋白功能研究。 相似文献
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【目的】研究猕猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)的发生及其多样性,为我国猕猴桃产业中AcVA病毒的快速检测、科学防控以及猕猴桃品种选育提供科学依据。【方法】通过巢式PCR从四川省猕猴桃感病叶片中扩增AcVA CP基因序列,进行序列分析和同源性比对;构建AcVA CP基因的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后制备抗血清,用Western blot检测效价。【结果】克隆到3个AcVA四川分离株的完整CP基因序列,成功构建了pET28a-AcVA-DJY4-CP重组质粒,原核表达目的蛋白并制备出特异性抗血清,效价达到1∶5 000。【结论】首次获得了3个AcVA四川分离株,丰富了AcVA的序列多样性,并探索了原核表达的最佳条件,制备了高效价抗血清,为今后AcVA病毒的快速检测和防控提供了技术支撑。 相似文献
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PTEN is a candidate tumor suppressor which has sequence homology withdual-specifici-ty phosphatase. PTEN is a multifunctional protein endowed with a phosphatase activity capable of dephosphory-lating both tyrosine phosphate, serine/threonine phosphate residues on proteins and phospholipids of the phosphati dylinositol pathway. PTEN appears to be mutated at considerable frequency in several types of humantumors, including those frombrain, breast, endometrium, and prostate. PTEN play an important role in pathogenesis of tumor, tumor cell invasion and metastasis. In this review, we will discuss the chemical structure of PTEN, its phosphatase activity, the ability of affecting signal transduction, and its mutational status in cancer. 相似文献
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阐述了现代园林的基础知识,并通过对园林绿化生态效益的分析,概括了现代园林绿化的新概念及在城镇规划中的作用,并浅析如何在城镇中进行现代生态园林绿化的应用。 相似文献
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1、贮藏期病害及发生规律 1.1真菌病害已有的研究表明,贮藏期危害葡萄的病菌全部为真菌.细菌的生长因葡萄浆果的pH值在2.9-4.0的范围内而被限制.低温贮运过程中危害葡萄的病原菌包括：灰霉（Bolty cinera Pers）、青霉（Penicillia spp.）、交链孢霉（Allernaria spp.）、芽枝霉（Clad ospriumSp.）和匐梗霉（Stemphy lium Sp.）等.葡萄常温贮运过程中致病菌主要有根霉（Rhizopusstolorifer（Ehrenb.：Fr.）Vuill）. 相似文献
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时下,在蔬菜生产上,人们为了追求高产,大量施用氮、磷、钾化肥,而忽视了微量元素的应用,特别是保护地土壤中大量元素与中微量元素不平衡的矛盾日益突出.2005年9月,笔者对招远市二十个蔬菜生产重点村的三十二个日光温室（每个660m2）及十个露地菜田进行了土壤检测,结果表明：菜田土壤均属强酸性,pH平均为4.8.土壤水溶性硼含量平均为0.23mg/kg,比中等肥力菜田土壤硼的最低界限值0.5mg/kg,尚差0.27mg/kg,呈极缺状态;土壤有效锌含量平均为1.5mg/kg,与高产田有效锌要求3mg/kg,尚差一半;土壤中钼的含量仅有0.10mg/kg,比要求的最低临界值0.15mg/kg,尚差0.05mg/kg.由于微量元素的缺乏,导致蔬菜生理病害日益严重,如：缺锌引起的小叶病;缺硼引起的果实木栓化;缺钙引起的番茄、辣椒脐腐病等大量发生.据2004年招远市郭家埠菜田调查,青椒脐腐病病株率达到30%以上,高的地块达到50%,给生产造成了很大损失.因此,蔬菜缺素症应当引起专业技术人员及广大菜农的重视.笔者根据多年来的试验研究,总结出了一套蔬菜缺素症的综合防治技术,现介绍如下. 相似文献
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早实核桃的生长发育特点与整形修剪 总被引：3，自引：0，他引：3
目前我国栽培的核桃可分为两大类,一类为结果晚的品种如礼品1号、礼品2号、晋龙1号、秦优1号等;另一类为早实核桃品种(栽后2年结果)如辽宁1号、辽宁3号、辽宁5号、中林1号、鲁光、陕核1号、绿波等。这两类核桃在生长发育上既有相同之处,也有着不同的生理生态特征,因此,在栽培管理上就有所不同。据我们的多年观察研究,就早实核桃的整形修剪谈几点意见。1生长特点早实核桃为乔木,树高可达10m以上,干径粗度可达60cm以上,寿命多为50～80年。早实核桃侧芽萌发力强,易抽生二次枝。树体在幼树阶段管理不当,极易造成树形紊乱,结果部位快速外移,产量… 相似文献
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以鲜菌草(巨菌草、象草、五节芒)及其相对应的干菌草为试材,采用单因素试验方法,研究鲜菌草与干菌草灭菌前与灭菌后的碳氮含量及碳氮比的变化。结果表明:灭菌前,鲜菌草的碳含量低于相应干菌草的碳含量,鲜菌草的氮含量高于相应干菌草的氮含量,鲜菌草的碳氮比均低于相应干菌草的碳氮比;灭菌后,鲜菌草与干菌草的碳含量和氮含量均有所降低,除了干巨菌草以外,鲜菌草与干菌草的碳氮比均降低,鲜菌草的碳氮比也低于相应干菌草的碳氮比。因此,灭菌对鲜菌草和干菌草的碳含量、氮含量和碳氮比均有影响,鲜菌草更适合用于栽培较低碳氮比的食药用菌。 相似文献
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国家蔬菜工程技术研究中心共收集苋菜及部分野生蔬菜资源1070份。按食用器官分类，共分为七大类数十个种类，显示出我国蔬菜遗传资源的多样性。分析测定了703份野生蔬菜的营养成分。针对目前我国在野生蔬菜资源的基础研究和开发利用中存在的问题，提出了相应的对策。 相似文献
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在乙醇：龙眼果皮＝ １００∶４（ｖ／ｗ ）、７０ ℃、１００ ｍ ｉｎ 的最佳条件下,ｐＨ ４．５２,λＲｍａｘ＝ ３７０ ｎｍ ,呈鲜黄色。龙眼黄色素（Ｒ）乙醇提取液的ｐＨ、光、热、离子、共存物对Ｒ的稳定性有不同的影响。综合考虑各种影响因素,用Ａ、Ｂ、Ｃ保鲜剂、浸果３ ｍ ｉｎ 后,分别于室温、１５、－ １０ ℃下贮藏１０、３０、６０ｄ,龙眼的好果率为８７ ％ 、９５ ％ 、１００ ％ ,损耗率为１４ ％ ～０,基本保持果壳原色和果肉的色泽、风味、品质,取得了护色保鲜的效果 相似文献
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不同来源桃种质果实糖酸组分含量特点的研究 总被引：22，自引：0，他引：22
对桃24个中国地方品种、19个中国育成品种、2个新疆桃栽培品种及5个中国野生种、33个欧美品种和16个日本品种共99份种质的果实糖酸组分含量特点进行了研究。结果表明, 桃果实中的可溶性糖和酸主要是蔗糖和苹果酸, 分别约占总可溶性糖的73%和总酸的60%; 大多数种质中果实内的葡萄糖和果糖含量相近, 但1个中国野生种和部分地方品种果实内的果糖含量较低, 果糖/葡萄糖低于0120; 中国育成品种果实的蔗糖平均含量最高, 而中国野生种果实蔗糖含量则显著低于其他种质; 中国育成品种、日本品种和欧美品种果糖平均含量显著高于中国地方品种和野生种; 中国野生种的总酸含量最高, 其次为欧美品种, 中国地方品种、中国育成品种和日本品种相对较低; 欧美品种果实平均苹果酸和柠檬酸含量高于中国地方品种和育成品种及日本品种。另外, 果实内蔗糖与山梨醇含量呈显著正相关; 苹果酸与柠檬酸之间以及奎宁酸与莽草酸含量之间呈极显著正相关。 相似文献