共查询到19条相似文献，搜索用时 203 毫秒
1.
非生物胁迫导致棉花生长发育受到抑制,严重影响棉花的产量和品质。为了深入探究棉花非生物逆境响应的分子作用机制并鉴定GhJAZ1的互作蛋白,本研究以陆地棉标准系TM-1为材料,采用Gateway重组技术构建了非生物胁迫诱导的陆地棉酵母双杂交cDNA文库,获得的初级文库总克隆数为1.2×107 CFU,次级文库总克隆数为1.6×107 CFU,重组阳性率100%,酵母文库滴度为5.0×107 cells·mL-1,酵母克隆平均插入片段>1 000 bp,符合建库标准,可用于后续酵母双杂交筛选。以GhJAZ1为诱饵,构建pGBKT7-GhJAZ1诱饵蛋白表达载体,经毒性检测及自激活活性检测,明确了诱饵质粒在酵母系统中无毒性和自激活活性,可直接用于酵母文库筛选。利用酵母双杂交筛选构建的非生物胁迫诱导的酵母cDNA文库,得到72个初筛阳性克隆,经测序、序列比对和酵母回转验证,获得11个与GhJAZ1相互作用的候选蛋白。选取其中4个候选蛋白,利用酵母双杂交进一步确认了GhJAZ1与候选蛋白的相互作用关系。本... 相似文献
2.
由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)引起的棉花黄萎病是制约我国棉花生产的首要病害,严重影响棉花的产量与品质。为研究棉花与黄萎病菌互作的分子机制,本研究以国审棉百棉1号为材料,提取被大丽轮枝菌侵染的棉花根部总RNA,检测质量并用DNase Ⅰ处理后,用RNA 5'末端的模板转换方法,即SMART技术合成双链cDNA,再经酶切、过柱纯化去除短片段后,连接至pGADT7载体上构建棉花cDNA文库。VdSCP7是定位于寄主细胞核的大丽轮枝菌效应因子,能激发棉花的免疫反应,增强棉花抗病性。以大丽轮枝菌cDNA为模板扩增VdSCP7,产物纯化后重组到载体pGBKT7上构建诱饵载体pGBKT7-SCP7。诱饵载体经酶切及测序鉴定后,转化到酵母AH109中,鉴定诱饵蛋白毒性并检测诱饵载体是否存在自激活活性。结果表明,获得了库容量为2×106 CFU的棉花cDNA文库,文库片段多样性良好,文库重组率约94%,质粒文库滴度约2.0×109 CFU·mL-1,满足酵母双杂交cDNA文库构建要求。酶切及测序结果表明,诱饵载体pGBKT7-SCP7构建成功且经过鉴定后无毒性、无自激活活性。本研究结果为棉花抗黄萎病基因的筛选及VdSCP7和棉花互作机制的解析奠定了基础。 相似文献
3.
为探究转录因子在海岛棉纤维中的生物学功能,以海岛棉8个时期的纤维为研究对象,利用SMART技术合成ds-cDNA,经DSN进行均一化处理,构建以pGADT7为载体的海岛棉纤维均一化酵母cDNA文库,利用酵母双杂交系统筛选与海岛棉GbTCP5互作的蛋白。根据克隆得到的GbTCP5基因的CDS区设计含有NcoⅠ、EcoRI酶切位点的引物,构建诱饵载体pGBKT7- GbTCP5。经自激活和毒性检测后共转化酵母菌株Y2HGold,筛选与GbTCP5互作的蛋白。实时荧光定量PCR显示,GbTCP5基因在纤维发育起始期和伸长期的表达量较高,且在花瓣和花萼中的表达量高于其他组织。文库的质量检测显示,构建的均一化cDNA文库库容为9.15×107 cfu·mL-1,重组率为100%,插入片段大小在500~2 000 bp之间。诱饵载体pGBKT7-GbTCP5通过酵母双杂交系统多次筛选、回转验证,最终确定了4个互作的蛋白,分别是GbTCP20、GbTCP42、GbTCP45和GbAHP1蛋白。海岛棉纤维均一化cDNA文库的构建和筛选,为进一步研究海岛棉TCP转录因子及其互作蛋白在纤维发育时期中的作用机制奠定了基础。 相似文献
4.
番茄八氢番茄红素合成酶(SlPSY1)作为类胡萝卜素生物合成途径的关键限速酶,直接影响果实中类胡萝卜素的积累。为探究SlPSY1基因的转录调控机制,通过克隆SlPSY1基因启动子序列,构建pSlPSY1pro-AbAi诱饵载体,并将诱饵载体转化至酵母细胞中获得诱饵酵母菌株。利用番茄混合组织酵母杂交cDNA文库进行酵母单杂交筛库试验,筛选得到AP2/ERF家族转录因子SlJERF1和10个未知功能蛋白。后续克隆SlJERF1基因序列,构建pGADT7-SlJERF1重组载体,通过酵母单杂交点对点对SlJERF1进行分子验证,结果显示在金担子素(AbA)浓度为150 ng·mL-1的条件下,对照组酵母不能正常生长,而试验组酵母能正常生长,表明SlJERF1与SlPSY1基因启动子存在互作。这一结果为进一步拓展类胡萝卜素合成调控网络提供了重要的理论依据。 相似文献
5.
FLOWERING LOCUS T(FT)是调控植物开花途径中的关键基因,前期研究中,在比较晚开花wym-97和早开花cx-49两个品种的BcFT启动子时,发现cx-49的BcFT启动子存在一个1 577 bp的插入片段。为探索该插入片段对不结球白菜开花的影响,本研究构建不结球白菜酵母杂交cDNA文库,继而利用酵母单杂交技术筛选与BcFT启动子互作的蛋白。结果显示,本研究所得cDNA文库的库容为1.8×106 CFU,重组率为100%,插入片段长度分布范围约400～2 000 bp,平均长度大于1 000 bp,表明不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建成功。自激活试验表明,800 ng·mL-1的金担子素(AbA)可以抑制诱饵载体的自激活。通过酵母单杂交试验筛选到结合BcFT启动子插入片段的上游蛋白BcSAP18和BcDEAR2。综上,本研究成功构建了不结球白菜酵母杂交cDNA文库并获得了BcFT启动子插入片段的互作蛋白,为进一步研究BcFT在不结球白菜开花中的调控机制奠定了基础。 相似文献
6.
为探究NtMYB4a是否与其他蛋白质发生互作,并共同影响烟草次生代谢产物的合成和响应非生物胁迫,通过构建NtMYB4a基因酵母双杂交诱饵载体,从烟草cDNA文库中筛选出与NtMYB4a互作的候选蛋白,并利用实时荧光定量PCR初步验证低温胁迫下候选蛋白和NtMYB4a的共表达关系。结果表明,从cDNA文库中初步筛选出39个与NtMYB4a互作的蛋白,经回交验证排除假阳性,最终得到6个与NtMYB4a具有互作关系的蛋白,分别是RALF-like 22蛋白、锌指A20/AN1结构域蛋白、液泡分选蛋白、天冬氨酸蛋白酶、B2蛋白和应激增强蛋白。在低温胁迫下,6种互作蛋白的基因表达量变化趋势与NtMYB4a相似,均呈升高—降低—升高的趋势。相关性分析发现,液泡分选蛋白、B2蛋白、RALF-like 22蛋白和应激增强蛋白基因的表达与NtMYB4a的表达呈正相关关系,锌指A20/AN1结构域蛋白和天冬氨酸蛋白酶基因的表达与NtMYB4a的表达呈较弱的负相关关系,推测NtMYB4a可能与这些蛋白互作参与烟草低温胁迫的防御调控。本研究结果为进一步探究NtMYB4a参与响应非生物胁迫的分子调控机制提供了依据。 相似文献
7.
旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因G564启动子顺式元件结合的转录因子。本研究根据植物胚柄特异表达基因G564启动子关键序列(GAAAAGCGAA)合成了5次串联重复序列,并与报告质粒pHIS2.1连接构建诱饵载体pHIS2.1-G564-5A;以纯化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼嫩种子mRNA为模板,合成SMARTTMⅢ和CDSⅢ锚定末端dscDNA;并将dscDNA与线性化融合表达载体pGADT7-Rec2以及诱饵载体pHIS2.1-G564-5A共转化到酵母Y187,构建酵母单杂交文库。文库的共转化效率为5.53×105cfu/μg。对文库中的阳性克隆进行测序,获得117条可读序列。对其进行基因功能注释并进一步分析基因的功能发现,具有DNA结合功能的蛋白14个,具有蛋白质结合功能的蛋白8个。上述22个蛋白包括TATA结合蛋白1(TBP1),支架结构相关区(SAR)DNA-结合蛋白,胚珠发育蛋白,G-box结合因子1(GBF1),组蛋白H3等。本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因。 相似文献
8.
应用酵母双杂交系统筛选与CASTOR相互作用的蛋白 总被引：1，自引：0，他引：1
CASTOR编码百脉根中的离子通道蛋白，它是共生途径上的功能基因，作用于结瘤因子诱导产生的钙离子激增（calcium spiking）信号转导途径的上游，突变后不能形成根瘤。为了进一步揭示CASTOR调控共生信号途径的分子机制，本文通过酵母双杂交系统在百脉根的cDNA文库中筛选可能与CASTOR相互作用的蛋白，以酵母配合的方法初筛获得111个阳性克隆，经β- Gal检测进一步确认有99个蓝色克隆子，测序以及NCBI BLAST比对分析鉴定出JAB1、CLPA、钙调素结合的翻译延伸因子等7种可能与CASTOR相互作用的蛋白，利用RT-PCR方法检测了这些基因在接种以及不接种根瘤菌的百脉根中的表达水平，分析推测CASTOR可能与上述蛋白形成复合物参与共生信号的转导。 相似文献
9.
10.
9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)为脱落酸(ABA)合成途径的关键基因,参与果实生长发育。为明确NCED基因家族对葡萄果实成熟的调控功能,以鄞红葡萄为材料,在开花后50 d进行环割处理,以不环割为对照,分析其果实成熟期、内源脱落酸含量和NCED家族中6个成员表达的变化;通过克隆这6条基因编码区目的片段,构建了pCambia1302过表达植物载体,在花蕾期用农杆菌侵染液浸泡花序,以空载和野生型为对照,分析农杆菌侵染后的果肉中ABA含量和基因表达变化。结果表明,环割后鄞红葡萄果实较对照提前成熟13 d左右;实时荧光定量PCR分析结果显示,环割处理7 d后的果肉中VvNCED1、VvNCED3、VvNCED4和VvNCED7表达量显著上调,与葡萄果肉中内源ABA变化相关;农杆菌侵染花穗后阳性转基因果肉中VvNCED1、VvNCED3、VvNCED4和VvNCED7基因表达量和ABA含量显著高于野生型。综上可知,VvNCED1、VvNCED3、VvNCED4和VvNCED7的表达具有调控葡萄果实成熟的作用。本研究结果为葡萄成熟期的分子调控提供了理论基础。 相似文献
11.
Kobori M Nakayama H Fukushima K Ohnishi-Kameyama M Ono H Fukushima T Akimoto Y Masumoto S Yukizaki C Hoshi Y Deguchi T Yoshida M 《Journal of agricultural and food chemistry》2008,56(11):4004-4011
Bitter gourd ( Momordica charantia L.) is a popular tropical vegetable in Asian countries. Previously it was shown that bitter gourd placenta extract suppressed lipopolysaccharide (LPS)-induced TNFalpha production in RAW 264.7 macrophage-like cells. Here it is shown that the butanol-soluble fraction of bitter gourd placenta extract strongly suppresses LPS-induced TNFalpha production in RAW 264.7 cells. Gene expression analysis using a fibrous DNA microarray showed that the bitter gourd butanol fraction suppressed expression of various LPS-induced inflammatory genes, such as those for TNF, IL1alpha, IL1beta, G1p2, and Ccl5. The butanol fraction significantly suppressed NFkappaB DNA binding activity and phosphorylation of p38, JNK, and ERK MAPKs. Components in the active fraction from bitter gourd were identified as 1-alpha-linolenoyl-lysophosphatidylcholine (LPC), 2-alpha-linolenoyl-LPC, 1-lynoleoyl-LPC, and 2-linoleoyl-LPC. Purified 1-alpha-linolenoyl-LPC and 1-linoleoyl-LPC suppressed the LPS-induced TNFalpha production of RAW 264.7 cells at a concentration of 10 microg/mL. 相似文献
12.
13.
为明确铜胺氧化酶(CuAO)在桃果实成熟过程中的作用,分别采用1.0、5.0和10.0 mmol·L-1的CuAO抑制剂氨基胍(AG)对黄水蜜桃果实进行喷施处理,并于桃果实成熟后测定果实硬度。结果表明,5 mmol·L-1 AG处理组桃果实的硬度保持效果最好。进一步采用5.0 mmol·L-1 AG处理黄水蜜桃果实,并测定果实成熟相关生理指标。结果表明,AG处理下桃果实在采后7 d内果实硬度均显著高于对照水平,乙烯释放量和呼吸强度均显著低于对照水平,表明抑制CuAO介导的多胺分解可显著延缓桃果实成熟。AG处理显著抑制乙烯合成、生长素转运和细胞壁降解相关基因PpACO1、PpACS、PpPIN1、PpGH3.3、PpPG和PpPME1的表达水平。为进一步明确CuAO在桃成熟中的功能,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术沉默腐胺(Put)分解关键基因PpCuAO4。结果显示,转基因桃果实PpCuAO4表达水平仅为对照的18%,Put含量和果实硬度显著高于对照水平,而乙烯释放量和呼吸强度均显著低于对照水平。上述结果表明,PpCuAO4介导的Put分解可以促进桃果实成熟。本研究为进一步深入解析多胺(polyamine)调控桃果实成熟的机制提供了重要的理论依据。 相似文献
14.
为综合评价露地小型西瓜产量品质的砧木效应,以接穗京颖-6自根苗为对照,研究南瓜砧和葫芦砧分别嫁接同一接穗品种后,不同嫁接组合的幼苗质量、植株长势、产量、果实性状和品质变异特征。结果表明,所有砧木的嫁接成活率均高于90%,供试南瓜砧中幼苗质量以兴盛和铁砧尔帝较好,葫芦砧以强根和京欣砧1号表现较好。嫁接成株长势和产量也因选择砧木不同而表现不同,其中南瓜砧嫁接植株长势较强,产量较高,最低增产率也达17.0%;葫芦砧嫁接植株长势和产量变异较大,强根增产率达49.4%,但京欣砧王单位产量较对照低12.3%,且嫁接对小型西瓜果实特性及果实营养品质的影响显著。构成小型西瓜果实品质相关指标的综合评价结果表明,仅2个南瓜砧和4个葫芦砧嫁接果实品质优于自根苗。综上,供试南瓜砧均显著提高了小型西瓜的产量,但多降低了果实品质;葫芦砧中仅强砧和京欣砧1号嫁接西瓜的产量有所提高,且果实品质有所改善。本研究为嫁接小型西瓜优质高产栽培提供了理论依据。 相似文献
15.
Kobori M Ohnishi-Kameyama M Akimoto Y Yukizaki C Yoshida M 《Journal of agricultural and food chemistry》2008,56(22):10515-10520
Bitter gourd ( Momordica charantia L.) pericarp, placenta, and seed extracts were previously shown to induce apoptosis in HL60 human leukemia cells. To determine the active component that induces apoptosis in cancer cells, bitter gourd ethanol extract was fractionated by liquid-liquid partition and silica gel column chromatography. Several fractions obtained by silica gel column chromatography inhibited growth and induced apoptosis in HL60 cells. Among them, fraction 7 had the strongest activity in inhibiting growth and inducing apoptosis in HL60 cells. A component that induced apoptosis in HL60 cells was then isolated from fraction 7 by another silica gel column chromatography and high-performance liquid chromatography (HPLC) using a C18 column and was identified as (9Z,11E,13E)-15,16-dihydroxy-9,11,13-octadecatrienoic acid (15,16-dihydroxy alpha-eleostearic acid). 15,16-Dihydroxy alpha-eleostearic acid induced apoptosis in HL60 cells within 5 h at a concentration of 160 microM (50 microg/mL). (9Z,11E,13E)-9,11,13-Octadecatrienoic acid (alpha-eleostearic acid) is known to be the major conjugated linolenic acid in bitter gourd seeds. Therefore, the effect of alpha-eleostearic acid on the growth of some cancer and normal cell lines was examined. alpha-Eleostearic acid strongly inhibited the growth of some cancer and fibroblast cell lines, including those of HL60 leukemia and HT29 colon carcinoma. alpha-Eleostearic acid induced apoptosis in HL60 cells after a 24 h incubation at a concentration of 5 microM. Thus, alpha-eleostearic acid and the dihydroxy derivative from bitter gourd were suggested to be the major inducers of apoptosis in HL60 cells. 相似文献
16.
Two plant species, tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) and bitter gourd (Momordica charantia), were used for in‐depth studies on the dynamics of silicon (Si) uptake and translocation to the shoots and compartmentation of Si in the roots. The experiments were conducted under controlled environmental conditions in nutrient solutions, which were partly amended with 1 mM Si in the form of silicic acid. At harvest, xylem exudates were collected, and Si concentrations and biomass of roots and shoots were determined. Mass flow of Si was calculated based on the Si concentration of the nutrient solution and transpiration determined in a parallel experiment. Plant roots were subjected to a fractionated Si analysis, allowing attributing Si to different root compartments. Silicon concentrations in the roots compared to the shoots were higher in tomato but lower in bitter gourd. A more ready translocation from the roots to the shoots in bitter gourd was in agreement with Si concentrations in the xylem exudates which were higher than in the external solution. In tomato, the xylem‐sap Si concentration was lower than in the nutrient solution. Calculated Si mass flow to the root exceeded Si uptake in tomato, which was consistent with the measured accumulation of Si in the root water‐free space (WFS). In contrast, Si concentration in the root WFS was lower than in the nutrient solution in bitter gourd, reflecting the calculated Si depletion at the root surface based on the comparison of Si mass flow and Si uptake. Within the roots, more than 80% of the total Si was located in the cell wall and less than 10% in the cytoplasmic fractions in tomato. In bitter gourd, between 60% and 70% of the total root Si was attributed to the cell‐wall fraction whereas the proportion of the cytoplasmic fraction reached more than 30%. Our results clearly confirm that tomato belongs to the Si excluders and bitter gourd to the Si‐accumulator plant species for which high Si concentrations in the cytoplasmic root fraction appear to be characteristic. 相似文献
17.
苦瓜主要经济性状配合力和遗传相关的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
6个绿苦瓜自交系分成两组，按不完整双列杂交设计配制9个组合，对苦瓜第一雌花平均节位、雌花数、单果质量、果长、果径和果肉厚等6个经济性状的配合力和遗传相关进行了研究。结果表明：第1组亲本A1、A2和A3仅在果长、果径和果肉厚3个性状上一般配合力效应差异极显著，而第2组亲本B1、B2和B3在6个性状上一般配合力效应差异均极显著。9个组合间仅第一雌花平均节位与果长的特殊配合力效应差异极显著。第一雌花平均节位与雌花数，雌花数与果长，果径与果肉厚，单果质量与果长，第一雌花平均节位与果长。果长与果径，雌花数与单果质量，第一雌花平均节位与单果质量，上述诸项的遗传相关系数r分别为：-1．0．-0．97，0．90，0．82，0．80，-0．78，-0．75和0．73。果长和果径对单果质量的遗传直接通径系数分别为1．37和0．71。 相似文献
18.
为解决果后熟过程中存在的黄熟程度不均匀、易感炭疽病和蒂腐病等问题,进行几种化学药物的混合物所产生气体催熟果的试验。结果表明:最佳的处理(处理Ⅱ),果黄熟仅需4 d,防炭疽病效果可达93%,防蒂腐病效果可达100%,可溶性固形物含量提高1%以上,轻耗仅为自然后熟的17.38%,果皮色泽鲜艳,果肉硬,风味佳,外观整洁,商品率高。该处理方法简单易行。 相似文献
19.
本文概述了果实成熟过程中脱落酸含量的变化和生理效应．分析了脱落酸促进果实成熟的细胞分子生物学基础及其可能的分子机制。 相似文献