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1.
以新疆野生盘羊（Ovis ammon）和萨能奶山羊转基因（GFP）成纤维细胞为核供体细胞，分别以绵羊卵母细胞和普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植，对不同种类核移植重构卵进行电融合处理，发现盘羊重构卵电融合参数为1．4kV／cm、20μs／次、间隔1s时的重构卵融合率最高；对于转基因（GFP）萨能奶山羊重构卵的处理，电融合前先放入融合液中于38．5℃下平衡5min，融合时电融合参数为1．5kV／cm、20μs／次、间隔1s时的融合率最高。实验中发现将融合后的两种重构胚胎先置入IVM培养液中于38．5℃下平衡4h，可降低重构胚胎的死亡率，提高发育质量和卵裂率。 相似文献
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以波尔山羊耳成纤维细胞为核供体细胞,黄淮白山羊卵母细胞为受体进行核移植,对重构卵进行电融合处理,发现电融合参数为250 V·mm-1、1次电脉冲时,40μs组的卵裂率显著高于10 μs组和20μs组(P＜0.05),但10μs组融合后的存活率最高(P＜0.05).当融合参数为250 V·mm-1、10μs时,2次电脉冲组的卵裂率显著高于1次电脉冲组(P＜0.05),但1次电脉冲组的融合后存活率和胚胎获得率均高于2次脉冲组(P＜0.05).综合试验结果认为,适宜的山羊体细胞核移植的电融合参数是250 V·mm-1、10μs、1次电脉冲. 相似文献
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以家兔16－32细胞期胚胎卵裂为核供体，显微注射到去核卵母细胞周隙中，共制作完成229枚重组胚，2次电融合后率达到76．8％。重组胚与兔胚成胎成纤维细胞共同培养，卵裂率为65．7％（23／35），桑囊率达到22．9％（8／35），均显著高于（P＜0．01）微滴直接培养结果（43．3％、13／30；16．7％，5／30）。将111枚重组胚手术移植到9只同期发情的受体母兔输卵管中，2只妊娠，其中1只完成足月胚胎发育产出克隆仔兔2只。 相似文献
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对山羊2-细胞胚胎的电融合参数进行了研究。结果表明,从融合率、卵裂率、胚胎死亡率三个指标综合衡量,电场强度1.2kV/cm,脉冲时程40μs是适宜的参数。 相似文献
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小鼠桑椹胚玻璃化冷冻前后生物频谱处理对体外发育的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
本试验利用周林频谱仪（WS－302）照射玻璃化冷冻前后小鼠桑椹胚,研究对其体外发育的影响,结果表明：胚胎在10％EG溶液中处理5min后移入EFS30中处理1min的二步法冷冻组,解冻后经照射5～20min后的胚胎发育率（95％～100％）与对照组（94％）比较无显著性差异（P＞0．05）。当在EFS40中处理1min的一步法冷冻组的胚胎,照射后发育率由对照组的54％提高到97％差异极显著（P＜0.01）。改用GFS40一步法冷冻的胚胎照射后的发育率也明显高于对照组（P＜0．05）。另外,对冷冻前胚胎进行照射,其解冻后发育率（87％）也得到了显著提高（P＜0．01）。 相似文献
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[目的]研究不同电激活参数以及电脉冲联合6-DMAP对猪卵母细胞孤雌激活效果的影响。[方法]使用电极盘,测定不同场强（1．1、1．3、1．5、1．7、1．9kV／cm）,不同脉冲时程（30、50、70、90、110ps）,1次脉冲下猪卵母细胞囊胚率的变化。[结果]结果表明,脉冲强度以1．5和1．7kV／cm效果最好,在80胂时其猪卵母细胞囊胚率分别达到（22．35±5．16）％和（20．59±9．41）％;脉冲强度1．5kWcm,1次电脉冲后4h联合6-DMAP激活卵母细胞,当脉冲时程达到70和90μs时,囊胚率分别达到（21．65±9．95）％和（23．10±16．27）％。[结论]在试验条件下,使用电极盘的最适电激活参数为脉冲强度1．5-1．7kV／cm,脉冲时长80μs,1次脉冲电激活。 相似文献
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饵料和日采收率对轮虫生长繁殖的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
采用10种饵料，不同日采收率进行试验，通过观察轮虫的密度和怀卵率变化，比较饵料，日采收率对轮虫生长繁殖的影响。结果表明：（1）采用酵母，光合细菌和小球藻混合饵料，轮虫的密度和怀卵率比单独使用酵母高，轮虫的密度差异极显著（P＜0．01），怀卵率差异显著（P＜0．05）。投喂第6种饵料时轮虫达到的密度最高，最高密度达2123个/mL，怀卵率也最高，最高达59．9％，轮虫怀卵率高低提前反映轮虫密度的变化。（2）采用酵母，光合细菌和小球藻混合饵料，酵母的不同用量对轮虫密度有极显著影响（P＜0．01），酵母最适投喂率为2．0。（3）日采收率20％对提高轮虫培养的密度和怀卵率有显著作用，明显高于10％（P＜0．01）。 相似文献
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水稻原生质体电融合适宜条件的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
水稻原生体电融合适宜条件为：交流电场强度２５０Ｖ／ｃｍ；交频率５００ｋＨｚ；脉冲强度１．６ＫＶ／ｃｍ；脉冲宽度５０ｕｓ；脉冲个数为２。此时的１对１融合率为１４．９％，总融合率达２４．９％。在此条件下，电场处理对原生质 体活力无明显的影响。 相似文献
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以油菜花粉为原料,利用脉冲电场破壁法,探讨了油菜花粉中黄酮类化合物的提取工艺。在脉冲电场强度、脉冲数、回流温度3个单因素试验的基础上,以总黄 酮类物质提取率为响应值,采用Box-Behnken响应面法设计优化了总黄酮类化合物提取的最佳工艺条件。结果表明电场强度严重影响着花粉细胞的破壁效果,且 在最优的提取工艺条件下,即电场强度28 kV/cm,脉冲数508,回流温度82℃,油菜花粉黄酮类物质提取率高达4.508%。 相似文献
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从猪卵巢上获取的卵母细胞经体外培养成熟42～44 h后去除颗粒细胞,选取成熟的卵母细胞进行孤雌激活培养.试验采用不同的场强、脉冲时程和脉冲次数进行对照试验,并比较了细胞松弛素B(CB)辅助激活对孤雌胚胎发育的影响.结果显示:1)当场强为0.8 kV.cm-1,选取4个脉冲时程(80、100、120、140μs)参数分别进行1次、2次脉冲激活时,100μs、1次脉冲囊胚率最高,为(42.22±5.38)%,但同其他组无显著差异(P>0.05).2)脉冲时程为100μs,选取4个场强(0.8、1.0、1.2、1.4 kV.cm-1)参数分别进行1次、2次脉冲激活时,1.4 kV.cm-1、1次脉冲囊胚率最高,为(44.04±0.68)%,但同其他组无显著差异(P>0.05).3)场强为0.8 kV.cm-1和1.4 kV.cm-1,选取4个脉冲时程(80、100、120、140μs)进行1次脉冲激活时,1.4 kV.cm-1+80μs组囊胚率(54.60±2.86)%均高于其他组,且极显著高于1.4 kV.cm-1+140μs、0.8 kV.cm-1+80μs和0.8 kV.cm-1+140μs组(P<0.01).4)用1.4 kV.cm-1、80μs、1次脉冲激活卵母细胞后,使用CB辅助激活4 h的囊胚率为(54.07±3.12)%,极显著(P<0.01)高于不使用CB组.以上结果说明,电激活中脉冲次数对猪孤雌胚胎发育无显著影响,且在本试验条件下,采用1.4 kV.cm-1的场强、80μs的脉冲时程,并使用CB辅助激活4 h,能够得到较高囊胚率的猪孤雌激活效率. 相似文献
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家兔胚胎细胞核移植的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
兔超排后收集卵母细胞和１６细胞胚，以Ｍｃ－Ｇｒａｔｈ－Ｓｏｌｔｅｒ和Ｗｉｌｌａｄｓｅｎ两种去（注）核方法，将１６细胞胚细胞核经电融合植入去核成熟卵母细胞内，经体外培养或中间受体培养，使移核胚发育．结果表明：（１）兔胚核移植中上述两种去（注）法的成功率无差异；（２）ｈｃＧ注射后１３～１５ｈ，６７．８％的卵母细胞保留有第一极体；（３）强度为０．６３ｋＶ／ｃｍ，持续１６０μｓ的一次电脉冲可使７０．８％的注核胚融合，同样的电脉冲刺激卵母细胞的活化率为６１．１％；（４）兔移核胚在中间受体内或体外均可发育，在中间受体内有２３．０％可以发育到桑椹胚或囊胚． 相似文献
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马铃薯原生质体融合技术的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用聚乙二醇（ＰＥＧ）、电融合和ＰＥＧ－电融合三种诱导融合的方法，对马铃薯双单倍体品系８２－３６和二倍体野生种Ｓｏｌａｎｕｍｍｉｃｒｏｄｏｎｔｕｍ无菌苗叶肉原生质体的融合技术进行了研究，建立了三种融合方法的适宜条件。结果表明，使用镀金平行多电极的电融合法融合效果最好，在交流场强１５０Ｖ／ｃｍ、正弦波频率１．０ＭＨＺ和直流脉冲场强１．２ＫＶ／ｃｍ、宽幅６３７．５μｓ下，施加１次脉冲，原生质体的融合频率可达３０％。在对融合细胞的培养中发现：经过异质融合处理后的原生质体形成的愈伤组织具有较强的分化能力，其中有少数愈伤组织再生出了绿色植株。 相似文献
15.
利用方波脉冲电场增强乳酸菌细胞通透性,通过将乳酸菌细胞离心,制成浓度为108cfu.mL-1菌悬液,采用不同方波电脉冲条件对其进行处理。结果表明,在0.5 mol.L-1蔗糖的等渗脉冲介质中,电场强度2.25kV.cm-1,脉冲宽度15μs,脉冲数5,间隔时间2 s,此时,乳酸菌细胞的存活率平均为78.24%,细胞内平均荧光强度为5 480。表明脉冲电场可有效增强乳酸菌细胞通透性。 相似文献
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延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
以体外成熟培养22-24h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件．结果表明,2．5h处理组的融合率（70．9％）显著高于4．0h处理组（58．2％,P〈0．05）,2．5h处理组重组胚的卵裂率（77．9％）显著高于其它4组（P〈O．05）,其它各组间差异不显著（P〉0．05）;融合电场强度1100V／cm处理组的融合率（86．4％）显著高于900V／cm处理组（67．1％）和1200V／cm处理组（75．2％,P〈O．05）,重组胚的卵裂率（84．6％）显著高于900V／cm处理组（69．6％,P〈O．05）,囊胚发育率（26．1％）显著高于900V／cm处理组（10．0％）,1200V／cm处理组（8．0％,P〈O．05）;不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0．28mol／L组囊胚发育率（25．3％）显著高于0．25mol／L组（15．3％,P〈0．05）．因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2．5h,0．28mol／L甘露醇作为融合液,电场强度1100V／cm． 相似文献
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对兔胚胎细胞核移植（NT）的有关影响因素进行了系统研究。结果发现电场强度100 V·mm-1，脉冲时间15μs，电脉冲3～4次的融合率显著高于其它组（P<0.05）；融合前激活卵母细胞，分裂率和囊胚率显著高于融合后激活（P <0.05）；当用8～16-细胞胚胎的卵裂球作供核时，卵裂率和囊胚率显著高于致密桑椹胚卵裂球为供核组；当重组胚在含3%发情牛血清（OCS）的TCM199中培养48 h后，转入含10% FCS的TCM199中继续培养，卵裂率和囊胚率显著高于一直在3% OCS或10% 胎犊血清（FCS）中培养的重组胚（P < 0.05）。将22枚2～4-细胞期重组胚移入同期发情的受体母兔输卵管内，34 d后产下NT仔兔1只。结果表明，电融合参数和供体胚胎的发育阶段以及受体卵母细胞的状态对NT效果有显著影响，在NT胚胎的不同发育阶段采用不同的血清种类和浓度可提高其胚胎发育能力。 相似文献
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为探究静电场对水曲柳花粉生命力的作用,研究设计了2个距离梯度(10cm和20cm)和3个电压梯度(1.0、1.5、2.0kV)对花粉进行处理,每个处理进行30min。分别记作:处理1:对照;处理2:1.0kV,10cm;处理3:1.0kV,20cm;处理4:1.5kV,10cm;处理5:1.5kV,20cm;处理6:2.0kV,10cm;处理7:2.0kV,20cm,统计经不同处理后花粉的萌发率,并对其产生变化的机理进行了分析。结果表明,不同情况的静电场影响效果有所差异。试验处理2、3、4、5、6、7中有5个处理提高了花粉萌发率,最高值达到94.7%,比对照高出19.7%。在电压相同的条件下,两电极金属板间较小距离处理的花粉具有较高的萌发率;在两电极金属板之间距离一定的条件下,较大电压处理的花粉具有较高的萌发率。 相似文献