共查询到20条相似文献，搜索用时 734 毫秒
1.
鸡毒支原体（MG）是造成鸡慢性呼吸道疾病的主要病原菌。通常采用血清学方法诊断该病，由于存在非特异性交又反应，这给临床诊断带来困难。为解决MG快速诊断问题，该研究根据已发表的鸡毒支原体种特异性序列FMG-2合成一对引物（MG1，MG2），用PCR方法检测MG。结果表明，该PCR方法对MG能特异性扩增732bp目的片断，而对照菌（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等）却不能扩增出目的片段。PCR产物经测序，其序列与Genbank序列同源性为98．86％。用PCR方法检测60份感染样本，其阳性检出率为80％，而用传统的分离培养方法检出率仅为50％。 相似文献
2.
[目的]利用PCR技术,探究鸡毒支原体(MG)的检测方法。[方法]针对MG脂蛋白的基因序列,建立PCR扩增体系,测定其灵敏度和特异性,并对鸡胚样品进行检测。[结果]PCR扩增得到了400bp的基因片段,最低检出浓度为0.2 pg·μL~(-1);该PCR法仅与MG的DNA反应,与大肠杆菌、猪肺炎支原体、新城疫病毒、沙门氏菌的DNA或cDNA反应结果均为阴性;利用该PCR对鸡胚样品进行检测,核酸阳性率为76%。[结论]该研究初步建立了基于MG脂蛋白基因的特异性PCR检测方法,为MG的临床检测奠定了基础。 相似文献
3.
根据派琴虫的基因保守序列设计了特异性引物,对派琴虫的DNA进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序.结果表明,扩增大小为596bp,与预期扩增序列同源性为99.8%.该PCR方法检测灵敏度高,最低可检测1pg的派琴虫DNA;特异性强,对荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、葡萄球菌、副溶血孤菌、沙门氏菌、诺瓦克样病毒等贝类病原体的扩增均为阴性.用该PCR技术对广西沿海的104份牡蛎、49份贻贝和20份文蛤病料进行检测,阳性率分别为14.6%、10.6%和15.0%.结果显示,派琴虫广泛存在于中国南方沿海的养殖贝类中,建立的PCR方法可用于贝类派琴虫的临床快速检测. 相似文献
4.
《畜禽业》2021,(1)
同一批患病蛋鸡,分别在160日龄及175日龄各取肛门拭子10份、咽喉拭子10份、病变组织5份、血清30份,进行PCR检测,检测项目为鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性贫血(CAV)、鸡新城疫(ND)、鸡毒支原体(MG)、鸡滑液囊支原体(MS)、鸡网状内皮增生症(REV)、鸡J亚型白血病(ALV-J)及禽流感(M);ELISA检测项目为IB、CAV、MG、MS、REV及ALV-J;HI检测项目为ND、H9、RE-12及RE-11。结果显示,160日龄与175日龄的肛门拭子PCR检测REV与MG为阳性,其余PCR结果均为阴性;160日龄与175日龄的血清ELISA检测ALV-J阳性率分别为30%与33%、CAV与MS阳性率均为100%,MG阳性率为80%及89%,REV阳性率为8%及29%,抗体阳性率呈递增趋势;160日龄与175日龄的血清HI检测ND为11.39与11.29,H9为11.61与11.52,RE-11为9.53与9.46,RE-12为9.72与9.38,抗体水平无异常。依据实验室检测结果并结合临床、病理剖解情况,判定该群蛋鸡存在免疫抑制病与支原体混合感染。 相似文献
5.
《水产学报》2021,(5)
为了建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AngHV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列,克隆至pET-32a载体,构建重组质粒pET-32a-ORF49,作为qPCR的标准品;根据ORF49序列设计引物,以梯度稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠqPCR扩增,制作标准曲线,建立AngHV的qPCR检测方法,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。结果显示,qPCR的阈值循环数(cycle threshold value, CT)与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广,获得的标准曲线相关系数(R~2)达到0.999,扩增效率为100.855%;该方法特异性好,可特异性检测AngHV,而对鲤疱疹病毒Ⅲ型(Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus, RGV)和鳗鲡虹彩病毒(Eel iridovirus, EIV)无扩增;该方法重复性强,组内和组间变异系数分别小于1%和2%;该方法灵敏性高于普通PCR法,最低可检测到10个病毒拷贝,而普通PCR法为1 000个病毒拷贝。qPCR检测发现,在感染AngHV的欧洲鳗鲡主要组织内均可检测到AngHV,并且鳃、鳍和皮肤黏液内的病毒量显著高于其他组织;对保存的25份疑似鳗鲡"脱黏败血综合征"病料进行检测,阳性检出率为96%,而普通PCR法的阳性检出率仅为76%。本研究建立的AngHV SYBR GreenⅠqPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于AngHV的快速和定量检测,对鳗鲡"脱黏败血综合征"的防控也具有重要意义。 相似文献
6.
[目的]建立鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR（qPCR)检测方法。[方法]利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列,克隆至pET-32a载体,构建重组质粒pET-32a-ORF49,作为qPCR的标准品;根据ORF49序列设计引物,以梯度稀释的重组质粒为模版,进行SYBR Green Ⅰ qPCR扩增,制作标准曲线,建立AngHV的qPCR检测方法,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。[结果]结果显示,qPCR的Ct值与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广,获得的标准曲线的相关系数（R2）达到0.999,扩增效率为100.855%;该方法特异性好,仅特异性检测AngHV,而对鲤疱疹病毒Ⅲ型（Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3）、蛙虹彩病毒（Rana grylio virus, RGV）和鳗鲡虹彩病毒（Eel iridovirus, EIV）无扩增;该方法重复性好,组内和组间变异系数均小于2%;该方法灵敏性高于普通PCR法,最低可检测到10个病毒拷贝,而普通PCR法为1000个病毒拷贝。应用分析结果表明,感染AngHV的欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla）的主要组织器官内均可检测到AngHV,并且鳃、鳍和皮肤黏液内的病毒量明显高于其他组织器官;对保存的25份疑似鳗鲡“脱黏败血综合征”病料进行检测,阳性检出率为96%,而普通PCR法的阳性检出率仅为76%。[结论]本研究建立的AngHV SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于AngHV的快速和定量检测,对鳗鲡“脱黏败血综合征”的防控也具有重要意义。 相似文献
7.
8.
为了建立一种能在临床上快速、准确检测杂交鳢弹状病毒(HSHRV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,利用PCR技术扩增HSHRV-C1207 G蛋白的全长序列,构建重组质粒,作为荧光定量PCR的标准品,根据HSHRV-C1207 G蛋白的保守序列,设计合成了一对能特异性扩增143 bp片段的引物和TaqMan探针,以标准品为模板建立HSHRV的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价。结果显示:建立的荧光定量PCR检测方法标准曲线有较好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,斜率为-3.290;荧光定量PCR最低可以检测到10个病毒核酸分子拷贝,而传统PCR方法最低可检测到1×103个拷贝;38个平行样品重复性实验组内变异系数为0.84%;对其他6种水产养殖常见病毒均无扩增反应。应用该方法对采集的21份患病鳢样品进行检测,其中18份为阳性,与细胞分离和电镜观察结果相同;以传统PCR方法检测同样的样品,仅13份为阳性。本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于临床HSHRV的检测,对病毒病原定量检测与杂交鳢弹状病毒病的快速诊断具有重要意义。 相似文献
9.
10.
《水产科学》2015,(5)
细菌对水产养殖品种危害大,造成的经济损失高。传统的显微镜镜检方法检测细菌误差大,而利用PCR方法鉴定细菌种类特异性强,准确性高。利用多重PCR探索出一种能准确鉴定水产常见细菌。研究表明,利用PCR分别扩增了嗜水气单胞菌Hly A基因,肺炎克雷伯菌Khe基因,无乳链球菌Sip基因,爱德华氏菌Ser C基因和Eip基因以及迟钝爱德华氏菌Muk F基因和Gad B基因,扩增特异性强。并成功地建立了一种同时用于无乳链球菌和爱德华氏菌等两种细菌以及爱德华氏菌、肺炎克雷伯菌、迟钝爱德华氏菌和嗜水气单胞菌等4种细菌的多重PCR检测方法。为了验证多重PCR方法的准确性,采集患病黄鳝病灶部位,分离培养细菌并提取该细菌基因组DNA,用上述两种多重PCR方法检测出患病黄鳝体内感染的细菌主要是肺炎克雷伯菌和嗜水气单胞菌。建立的多重PCR检测方法对水产常见致病菌的快速诊断和分子流行病学的调查具有重要意义,为鱼类的疾病诊断提供了依据。 相似文献
11.
腐皮综合征是近年来刺参养殖最重要的疾病,导致刺参大批死亡和惨重的经济损失。以其主要致病原灿烂弧菌（Vibrio splendidus）DNA为模板,PCR扩增出16s-23s间隔区序列,将该片段克隆进pMD19-T Vector,转化大肠杆菌DH5a,获得重组质粒转化菌并进行测序。根据序列、设计引物,合成177bp的地高辛标记DNA探针。该探针对灿烂弧菌的DNA呈现特异性,而对其它细菌Vibrio fluvialis、Vibrio anguillarum、Vibrio alginolyticus、Aeromonas hydrophila、Vibrio harveyi、Vibrio parahaemolyticus、Vibrio vulnificus的核酸均呈阴性;探针对灿烂弧菌DNA的检出极限为6.25pg, 具有较高敏感度。应用该探针对人工感染以及从青岛、烟台、威海获取的腐皮综合征发病海参和养殖水体进行斑点杂交探针检测,其检出率均为100%。研究结果表明,该探针具有良好的特异性和敏感性,可成功用于快速检测养殖刺参“腐皮综合征”重要病原灿烂弧菌。该方法应用于刺参腐皮综合征的检测尚属首次,它将为刺参腐皮综合征的快速诊断、疾病防治和养殖生产提供技术支撑和参考。 相似文献
12.
13.
以剑尾鱼(Xiphophorus helleri)为材料,经MboⅠ限制性内切酶消化基因组DNA后,选取500～2 000 bp的片段连接到经BamHⅠ酶切的pUC18载体上,转化大肠杆菌DH5α构建部分基因组文库.采用设计合成的(AC)7、(GT)7重复序列为引物,PCR筛选部分基因组文库,对其中9个重组阳性克隆进行测序,结果共获得24个微卫星序列,其中Perfect(完美型)13个,占54.2%;Imperfect(非完美型)3个,占12.5%;Compound(混合型)8个,占33.3%.表明(AC/GT)n在剑尾鱼的基因组DNA中含量非常丰富.同时,根据其中3个克隆微卫星的侧翼序列设计引物,PCR扩增剑尾鱼基因组DNA,结果均扩增到目的片段.而且,这3对引物扩增出来的微卫星片段在非选育的剑尾鱼中显示出多态性,而在近交系19代则表现为单态,为剑尾鱼的实验动物化遗传研究提供了理论依据. 相似文献
14.
Development of a Penaeus monodon-type baculovirus (MBV) DNA probe by polymerase chain reaction and sequence analysis 总被引：1，自引：0，他引：1
Abstract. Penaeus monodon -type baculovirus (MBV) was isolated and purified from the hepatopancreases of MBV-infected Penaeus monodon Fabricius. MBV DNA was extracted and used as a template in a polymerase chain reaction (PCR). The primers were chosen from conserved regions of the polyhedrin gene of Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV). One DNA fragment (674 base pairs) was amplified after PCR. There was a 65% homology between the predicted amino acid sequence of this PCR product with that of the polyhedrin polypeptide of AcNPV. Nucleotide sequence analysis indicated that the amplified DNA is the open reading frame of the MBV polyhedrin gene. This 674 bp DNA fragment was subsequently used as a probe in a dot blot analysis. The probe was able to hybridize with the DNA extracted from the purified MBV and from the MBV-infected P. monodon , but not from the MBV uninfected P. monodon. 相似文献
15.
应用同源PCR技术，从被一种球状病毒感染的患病大菱鲆（Scophthalmus maximus）脾脏和肾脏组织中扩增出了一段长度为620bp的DNA片断。序列测定和Blast分析表明，该DNA片断与鱼类虹彩病毒主要衣壳蛋白（MCP）C末端编码区的DNA序列高度相似，由此证实感染养殖大菱鲆的这种球状病毒为一种鱼类虹彩病毒，暂命名为大菱鲆红体病虹彩病毒（TRBIV）。多序列比对和分析发现，TRBIV MCP C末端的205个氨基酸序列与GenBank中20种虹彩病毒相应序列的相似性分别为99．47％（韩国大菱鲆虹彩病毒）、97％～98％（待指定病毒属的7种病毒），以及50％以下（蛙病毒属、淋巴囊肿病毒属、虹彩病毒属的12种病毒），由此绘制出了包含TRBIV在内的21种虹彩病毒的系统发育树。研究结果表明，感染中国养殖大菱鲆的TRBIV属于虹彩病毒科待指定病毒属，位于该属ISKNV亚群和RSIV亚群之间，是该病毒属的一个新成员。 相似文献
16.
采用对虾白斑综合症病毒和传染性皮下组织坏死病毒的特异引物,在一个PCR反应中同时扩增到大小分别为271 bp和356 bp的病毒特异片段,多重PCR条件优化后可从最少100 fg级病毒DNA模板中定性检测出此两种病毒。 相似文献
17.
以奥利亚罗非鱼Oreochromis aureus为实验材料,通过对800多条随机引物的筛选,获得了1个奥利亚罗非鱼雌性特异性的、长度为1 488 bp的RAPD标记片段RAPD71699-1488,经琼脂糖凝胶电泳后回收、克隆、测序,并根据测序结果设计PCR特异引物,再经PCR条件优化,成功地将该RAPD标记片段转化为实验结果稳定、操作简便的SCAR标记,即SCAROaF1488。采用双重PCR技术,以mtDNA 16S rRNA基因片段为PCR扩增阳性对照,对该标记的有效性在两个群体共200个个体(雌、雄各100个)中进行验证。结果显示,标记检测结果与表型性别的符合度为100%。SCA-ROaF1 488标记的获得为奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定及标记辅助选择提供了有效工具,为深入研究鱼类性别相关基因及性别决定机制提供了重要线索和新的思路。 相似文献
18.
19.
Comparison of PCR and dot blot diagnostic techniques for detection of white spot syndrome virus (WSSV) was made on different tissues of infected Penaeus monodon including eye stalk, eye stalk with eye, gills, cuticle, pleopod, periopods, uropods and telson. Dot blots of crude DNA extracted from infected tissue samples showed positive reactions with all the samples; however, the sensitivity of the dot blot was reduced with the purification of DNA samples extracted from pleopod, telson and uropod. PCR was found to be more sensitive when compared to dot blot. Both crude DNA and purified DNA samples extracted from all the tissues except for eye stalk with eye showed single step nested PCR positive reaction. The amplification of all or either of the three bands of 941 bp, 525 bp and 204 bp size varied with the tissues analysed. The severity of infection assessed by PCR amplification was found to be maximum in cuticle and telson followed by gill. Other tissues such as eye stalk, pleopod, periopods and uropod were observed to have mild infection. The maximum intensity of the PCR product was for the smallest amplified product of 204 bp followed by 525 bp and the weakest intensity was observed for the 941 bp size. The limitation of PCR due to inhibiting factors present in tissues could be overcome with the use of dot blot which gave positive reaction from the DNA extracted from eye stalk including the eye but yielded no amplification by PCR. 相似文献
20.
Vibrio anguillarum , an opportunistic fish pathogen, is the main species responsible for vibriosis, a disease that affects feral and farmed fish and shellfish, and causes considerable economic losses in marine aquaculture. In this study, we used polymerase chain reaction (PCR) to detect V. anguillarum . PCR specificity was evaluated by amplifying the rpoS gene, a general stress regulator, in six strains of V. anguillarum and 36 other bacterial species. PCR amplified a species-specific fragment (689 bp) from V. anguillarum . Furthermore, the PCR assay was sensitive enough to detect rpoS expression from 3 pg of genomic DNA , or from six colony-forming units (CFU) mL−1 of cultured V. anguillarum . However, the assay was less sensitive when genomic DNA from the infected flounder and prawn was used (limit of detection, 50 ng and 10 ng g−1 tissue, respectively). These data demonstrate that PCR amplification of the rpoS gene is a sensitive and species-specific method to detect V. anguillarum in practical situations. 相似文献