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1.
用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原 相似文献
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马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的… 总被引：5，自引：0，他引：5
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳 相似文献
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马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体 总被引：3，自引：1，他引：2
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。 相似文献
4.
检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立 总被引：19，自引：0，他引：19
本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》 相似文献
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禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引：48，自引：1，他引：47
用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散 相似文献
6.
对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。 相似文献
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利用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００助溶，由猪生殖－－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）感染的ＭＡＲＣ－１４５细胞可制备出高纯度的ＥＬＩＳＡ抗原。这一技术消除了涉及到ＰＲＲＳＶ抗的及细胞抗在的常见本底反应。将这种高质量抗原应用到检测抗ＰＲＲＳＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ中，辅以一咱有效的血清封闭稀释剂可消除血清样品的非特异性反应。这种ＥＬＩＳＡ技术比间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）更为敏感；特别是对感染后期血清有高度特异性 相似文献
9.
以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾ 相似文献
10.
李国清 《国外兽医学(畜禽疾病)》1994,15(1):40-43
采用四种方法：即①单克隆抗体检抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的在酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＬＩＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出尼亚１８３头骆驼锥早的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（４９％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头 相似文献
11.
采用四种方法：即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＵＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（３４％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出９０头阳性（４９％）。其中ＢＣＥ未能检出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头（７５％）。所有阳性头数中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出９３％，Ａｂ－ＥＬＩＳＡ９５％。根据５５头的结果，阳性与阴性之间Ａｇ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异极显著（Ｐ＜０．０００１），Ａｂ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异不显著。因此，用Ａｇ－ＥＬＩＳＡ或结合ＢＣＥ诊断伊氏锥虫感染比用ＡＢ－ＥＬＩＳＡ更理想。 相似文献
12.
催乳素调节鸡卵泡膜细胞功能的机理 总被引：10，自引：0，他引：10
在明确催乳素（ＰＲＬ）对鸡卵泡膜细胞功能调节作用的基础上,探讨了酪氨酸激酶活性,ｃＡＭＰ系统和钙离子在ＰＲＬ调节膜细胞功能中的作用。结果表明,酪氨酸激酶抑制剂Ｇｅｎｉｅｓｔｉｎ能部分阻断ＰＲＬ对ＦＳＨ促膜细胞雌二醇（Ｅ２）合成的抑制作用,磷酸二酯酶抑制剂ＭＩＸ亦能部分消除ＰＲＬ对ＦＳＨ促Ｅ２合成的抑制作用,而细胞外钙离子浓度和电压依赖式钙通道在ＰＲＬ调节的膜细胞功能中无明显作用。 相似文献
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以Ｘｂａ Ｉ和Ｅｃｏ ＲＶ双酶消化ｐＢＴ１获得肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ基因片段，以Ｘｂａ Ｉ和Ｓｍａ Ｉ酶切点定向克隆入质粒载体ｐＣＭＶ４，构建了人ＴＮＦα重组质粒ｐＣＭＶ－ＴＮＦα。采用ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀法转染ＣＯＳ７和ＮＩＨ３Ｔ３细胞，收集转染后不同时间的细胞培养上清，检测ＴＮＦα的表达水平和生物学活性。ＥＬＩＳＡ检测表明，两种细胞转染后，其培养上清中均有ＴＮＦα抗原存在，而载体等 相似文献
15.
对实验小鼠感染小鼠肺炎病毒（ＰＶＭ）用间接酶联免疫吸附试验（Ｉ－ＥＬＩＳＡ）进行检测,其敏感性、特异性、重复性和稳定性的达到满意效果。结果显示,用ＰＶＭ接种ＢＨＫ２１细胞经初、高、超差速离心浓缩制备的抗原,与仙台病毒,小鼠肝炎 呼肠孤病毒３型的免疫小鼠血清抗体不产生交叉反应,阻断抑制率大于５０％;Ｉ－ＥＬＩＳＡ与ＨＩ对５０份小鼠血清检测其阳性检出率分别为３０％和２０％;将制备的检测抗的在－２０℃保 相似文献
16.
检测鸡慢性呼吸道病抗体ELISA方法的建立 总被引：12，自引：1，他引：11
用败血支原体（ＭＧ）Ａ５９６９株制备ＥＬＩＳＡ抗原,与抗鸡ＩＧ单抗ＩＢ７酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ＥＬＩＳＡ方法,交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了将鸡血清６４倍稀释监测ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的回收方程ｙ＝１．３８３＋０．２２４ｘ,可用于定量测定,血凝抑制试验（ＨＩ）与ＥＬＩＳＡ比较试验表明,ＥＬＩＳＡ法比ＨＩ试验敏感性高４倍以上。 相似文献
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史同瑞 《河南畜牧兽医(综合版)》2000,(6)
最近,Ｓｔａｃｋ等用提取的羊布氏菌１６Ｍ菌株的显性抗原决定簇Ｍ的脂多糖作抗原,并将抗Ｍ抗原决定簇单克隆抗体与辣根过氧化物酶结合,建立了一种竞争ＥＬＩＳＡ（ｃＥＬＩＳＡ）,用于牛布病的诊断,该方法克服了补体结合试验（ＣＦＴ）的缺点。试验检测１４７份布氏菌培养阳性、６４０份培养阴性的样品,结果表明ｃＥＬＩＳＡ优于ＣＦＴ,其敏感性为９７．９%,特异性为１００%。检测保存１、２、３和４周的５０份血样,ｃＥＬＩＳＡ的阳性率分别为１４%、１５%、１５%和１５%,而ＣＦＴ却为１０%、２%、０和０。由此可见,ｃＥＬＩＳＡ检测结果… 相似文献
18.
有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用 总被引：2，自引：1，他引：1
应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有 相似文献
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荒漠猫血液蛋白质和酶多态性的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５只荒漠猫（Ｆｅｌｉｓｂｉｅｔｉ）血液中的血红蛋白（ＨＢ），运铁蛋白（ＴＦ），亲血色蛋白（Ｈｐ）以及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），淀粉酶（ＡＭＹ），酯酶（ＥＳ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的多态性进行了研究。结果发现，被检荒漠猫的ＴＦ，Ｈｐ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｓ－ＥＳ和Ｓ－ＡＬＰ共５个基因座存在多态性，ＨＢ，ＲＢＣ－ＡＭＹ，Ｓ－ＡＭＹ，Ｓ－ＬＤＨ，ＲＢＣ－ＥＳ和ＲＢＣ－ＡＬＰ共６个基因座为单态，表明荒漠猫的血液蛋白质和酶具有颇大的遗传变异性 相似文献