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以结球甘蓝‘92-1012-3-11’自交系种子转白细胞介素-4(IL-4)基因T0代材料为试材,研究了通过农杆菌介导法将人IL-4基因导入甘蓝后代的遗传转化情况.结果表明:共得到抗草铵磷(PPT)抗性再生植株396株,聚合酶链式反应(PCR)阳性植株137株,其中带柄子叶转化率为8.1％,下胚轴分化率为5.8％.通过对转基因阳性株T0代的PPT抗性筛选、PCR、PCRSouthern杂交检测获得IL-4阳性甘蓝植株,表明IL-4基因已转入甘蓝受体中.经ELISA和Western检测,说明IL-4基因已整合到甘蓝基因组,但表达量很低(0.23～2.81 ng/mL),且各植株间的表达量差异极大. 相似文献
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【目的】遗传转化是进行基因功能验证的重要手段,构建较为完善、高效的厚皮甜瓜遗传转化体系,为基因功能验证和厚皮甜瓜种质改良提供技术支撑。【方法】以厚皮甜瓜B8为材料,用携带植物双元表达载体p QY002005的根癌农杆菌介导转化B8子叶诱导再生,通过探究影响甜瓜遗传转化过程中的重要因子的作用,建立以B8为基础的甜瓜遗传转化体系。【结果】以正常光周期培养3 d的无菌苗子叶节为外植体,对其进行微刷+10 s超声处理可提高农杆菌侵染效率,荧光芽获得率达29.6%;压力85 kPa的2次5 min的抽真空侵染方式(间隔1 min)侵染效果较佳;4 mg·L-1的Basta较适宜筛选抗性植株。利用以上方法,单次转化120个子叶节外植体,可获得31个再生荧光芽,17株生根苗,通过PCR检测确定8株阳性苗,阳性率达58.8%,阳性植株获得率为6.7%。【结论】成功建立了以B8为材料的甜瓜高效遗传转化体系,为甜瓜关键基因功能验证和种质精准改良提供技术支持。 相似文献
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提高农杆菌介导番茄遗传转化效率的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
利用农杆菌介导法对番茄进行遗传转化,比较了不同的农杆菌种类、农杆菌侵染时间、外植体种类及番茄品种对农杆菌侵染效率的影响.转化后得到的再生植株,利用PCR、Southern杂交检测GUS基因是否整和进入基因组.结果表明:农杆菌介导法成功介导了GUS基因导入番茄.农杆菌EHA105侵染番茄的效率明显高于LBA4404,侵染时间3 min较好.子叶外植体的转化明显优于下胚轴,黄色串珠樱桃番茄的遗传转化效率高于中蔬5号;优化的转化条件可以使番茄获得较高的遗传转化效率. 相似文献
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根癌农杆菌介导蓝猪耳转化系统的建立 总被引：7，自引：0，他引：7
通过对影响根癌农杆菌介导蓝猪耳转化效果各种因素的研究, 建立了蓝猪耳高效稳定的遗传转化系统。研究结果表明, 农杆菌侵染叶片外植体效率最高; 外植体预培养不利于农杆菌的侵染; 乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化蓝猪耳的效率。另外, 菌液浓度、侵染和共培养的时间及再生的途径等均对转化效率有一定的影响。叶片外植体与农杆菌共培养后, 经过抗性芽的诱导、根的再生, 70 d左右就可以获得抗性苗。抗性植株经GUS染色、PCR分析和Southern blot检测, 外源基因已经整合到蓝猪耳基因组中, 转化频率为7%～8%。 相似文献
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草莓主栽品种再生和转化的研究 总被引：41，自引：2，他引：41
建立草莓主栽品种高效、稳定的离体再生体系和遗传转化体系, 获得了转基因植株。‘弗吉尼亚’和‘森嘎拉’的叶片离体再生芽频率达到100 %。试管苗叶片与农杆菌菌株EHA105 共培养3 d。共培养后的叶片在附加卡那霉素40 mg/L 的再生培养基上选择培养4周后, 外植体再生出转化芽, 弗吉尼亚的转化芽再生频率可达6. 8 %。采用组织化学染色法对随机选取的10 个GUS 基因转化植株进行基因表达测定, 结果5 个植株强烈表达GUS 活性。转bar 基因植株在附加除草剂草丁膦10 mg/L 的培养基上能够正常分化, 在田间对草丁膦表现出强烈抗性。转基因植株开花、结果正常。 相似文献
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Bt cry1Ia8抗虫基因对结球甘蓝的转化及其表达 总被引：2，自引：0，他引：2
以结球甘蓝(Brassica oleracea L. var. capitata L. ) 的下胚轴和具柄子叶为外植体, 通过根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens) 介导法将苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) 杀虫晶体蛋白基因cry1Ia8导入结球甘蓝中, 共获得38株卡那霉素抗性植株。PCR和Southern blot检测证实cry1Ia8基因已经成功导入并整合到甘蓝的基因组中; RT2PCR和Western blot检测表明, cry1Ia8基因在转录和翻译水平有一定的表达; 转化植株叶片离体饲喂敏感小菜蛾( Plutella xylostella) 和对Cry1Ac蛋白表现抗性的小菜蛾的试验表明, 该基因不仅对敏感小菜蛾有很强的抗性, 对抗性小菜蛾也具有较强的抗性。 相似文献
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【目的】建立番木瓜高效遗传转化体系，为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状改良提供新的技术支撑。【方法】以紫晖番木瓜胚性细胞悬浮系（embryogenic cell suspensions,ECS）为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行探索，最后获得抗性再生植株。【结果】通过设置不同浓度的头孢霉素和潮霉素处理，观察ECS细胞状态，筛选、确定头孢霉素和潮霉素最适处理质量浓度分别为200 mg·L-1和5 mg·L-1。工程菌和ECS共培养侵染2 d后转到含有头孢霉素和潮霉素的液体筛选培养基上进行继代培养，继代周期为14 d。经GUS染色验证，表明继代3次后的ECS几乎全部为转化细胞。将以上ECS转移到液体胚诱导培养基中进行培养，2个月后可获得大量球形体细胞胚，且GUS组织染色为蓝色。将球形体细胞胚转到半固体成熟培养基上培养，2个月后可获得成熟子叶期体细胞胚。子叶期体细胞胚在萌发培养基上光培养30 d后，可获得再生芽。任意选取再生芽进行GUS染色，均可染成蓝色。抗性再生芽... 相似文献
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根癌农杆菌介导北海道黄杨遗传转化体系的建立 总被引：8，自引：0，他引：8
在建立北海道黄杨(Euonymus japonicus 'Cu zhi')再生体系的基础上,建立其遗传转化体系,以获得转雪花莲外源凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因植株。采用根癌农杆菌(Agrrobacterium tumefaciens) ( LBA4404菌株)介导法,研究影响北海道黄杨遗传转化的若干因素。结果表明,预培养与否、菌液浓度、侵染时间、共培养时间等对转化频率都有一定的影响。在遗传转化过程中,不经预培养,根癌农杆菌浓度OD600 = 0.6,侵染下胚轴40 min,再共培养3 d,有利于获得最高遗传转化效率。抗性植株经PCR和DNA-Southern blot检测表明,目的基因已整合到北海道黄杨基因组中。 相似文献
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以‘伏令夏橙’实生苗为材料进行原位转化体系建立及优化。首先,研究侵染部位对原位转化效率的影响：使用带有PBI121载体的农杆菌分别侵染5周龄‘伏令夏橙’实生苗上胚轴切口、顶芽切口（保留/去除真叶）2次,共培养3 d后进行抗性筛选及暗处理,7周后提取叶片DNA用于转基因植株PCR鉴定;之后,以上胚轴切口作为侵染部位进一步研究苗龄对原位转化效率的影响。研究结果表明,5周龄上胚轴切口再生率为93.10%,转化率为20.68%;保留/去除真叶后侵染顶芽时,再生率分别为81.74%和94.55%,转化率分别为19.09%和17.82%;4周龄和6周龄上胚轴切口再生率为94.59%和91.50%,转化率为25.42%和19.36%。可见利用农杆菌介导的遗传转化法原位转化4周龄‘伏令夏橙’的上胚轴切口可获得较高的转化效率。原位转化操作简单、周期短、转化率高,在甜橙遗传育种研究中具有重要的应用价值。 相似文献
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大白菜AB-81高频再生系统的建立及gus A基因瞬时表达的研究 总被引：15，自引：1，他引：14
以大白菜自交系AB-81 的子叶和真叶切块为外植体, 建立了高频不定芽离体再生系统。在MS 附加TDZ 0. 2 mg/L , NAA 2. 0 mg/L , AgNO3 10 mg/L 和ABA 0. 25 mg/L 的再生培养基上, 子叶和真叶的不定芽再生频率分别达到93. 3%和90. 0%, 每块外植体的不定芽数达3～6 个, 最多达21 个。以EHA105/ pMOG410 为载体转化侵染大白菜AB-81 的子叶, 获得较高gus A 基因瞬时表达频率的条件为: 子叶预培养2～3 d ; 侵染的工程菌液的浓度OD 0. 3～0. 5 ; 侵染时间2～10 min ; 共培养时间2～3 d。 相似文献
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萝卜遗传转化体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
系统研究了影响根癌农杆菌介导的萝卜(Raphanus sativus L.)遗传转化的若干因素,建立了萝卜遗传转化体系:即切取萝卜带柄子叶外植体,先进行2 d预培养,用OD600为0.3~0.5的EHA105农杆菌菌液侵染5~7 min后,再进行5 d共培养,然后将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1的培养基上进行7 d延迟筛选,再将外植体转接到MS+6-BA 6 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1+Cef 500 mg.L-1+Hyg 5 mg.L-1的培养基上进行10 d的抗性筛选。结果共获得126个抗性芽,其中8个抗性芽经PCR检测扩增出目的基因的启动子BcA9,约850bp,阳性率为6.3%,初步验证目的基因已经转入萝卜再生芽中。 相似文献
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水稻巯基蛋白酶抑制剂基因导入马铃薯和茄子 总被引：9，自引：0，他引：9
在优化长茄下胚轴外植体器官发生体系、芽分化频率达８０％～９５％的基础上,以农杆菌为介导,从不同苗龄外植体、不同菌液浓度和侵染时间、不同共培养时间等方面对长茄的遗传转化体系进行了优化。优化后ＫａｎＲ芽的分化频率可达７．３％。将水稻巯基蛋白酶抑制剂基因（Ｏｒｙｚａｃｙｓｔａｔｉｎ,ＯＣ－Ⅰ）导入长茄和马铃薯品种Ｄｅｓｉｒｅ,分别获得ＫａｎＲ植株１７株和３１株。对部分ＫａｎＲ植株进行ＰＣＲ扩增、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,结果证明了外源基因的整合。总的转化频率达１．９％。 相似文献
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薄皮甜瓜高效再生体系的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
对"G24"和"甘甜一号"薄皮甜瓜材料5～7d苗龄的子叶、下胚轴、根尖、真叶以及不同6-BA浓度下不定芽诱导情况进行了研究,建立了高效稳定的再生体系并对生根以及移栽等条件进行了初步研究。结果表明:2份薄皮甜瓜材料在不定芽的诱导方面差异不大,"G24"不定芽的发生频率达到97.2%,"甘甜一号"为91.6%;最适宜作为甜瓜组织培养的外植体材料为子叶近胚轴端,其不定芽诱导率可达95%以上;不定芽诱导中最适6-BA浓度为1.0mg/L。 相似文献
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以青花菜“绿秀”为试材,以带柄子叶为外植体,采用根癌农杆菌LBA4404菌株进行农杆菌遗传转化,研究了影响青花菜遗传转化的主要因素.结果表明:乙酰丁香酮浓度、OD600值、侵染时间等对瞬间表达均有一定的影响.其中,OD600值影响最大,AS浓度影响次之,再次是侵染时间.最适宜的试验条件为:乙酰丁香酮浓度为100μmol/L、OD600值为0.3、侵染时间为5min.抗性植株经PCR检测、Southern杂交和GUS组织化学染色法,表明目的基因已整合到青花菜基因组中并得到了很好的表达. 相似文献
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【目的】为了快速有效地利用基因工程的方法获得柑橘无核新种质,【方法】以我国特色多核柑橘优良品种锦橙实生苗上胚轴切段为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行能导致种子败育基因CG1-400-RNase的转化;为快速有效地筛选出转化子,在实生苗上胚轴切段转化再生过程中,根据不同发育阶段的组织或器官对抗生素的敏感程度不同采用不同的选择压。【结果】结果表明,在抗性芽再生过程中卡那霉素质量浓度设定为50 mg.L-1,获得的362个抗性芽转入卡那霉素质量浓度为100 mg.L-1的伸长培养基中进行伸长培养后,进行早期PCR检测,获得28个阳性芽;经过不定芽诱导生根或试管嫁接,获得22株完整植株。【结论】再生植株经PCR和Southern杂交检测,获得2株目的基因以单拷贝的形式插入锦橙基因组的转基因植株,为最终获得具有无核性状且可稳定遗传的柑橘新种质奠定了基础。 相似文献