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山羊胚胎简易冷冻试验 总被引：3，自引：0，他引：3
用RPE冷冻器冷冻20枚山羊桑椹胚和囊胚。冷冻液为1M甘油杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)。胚胎装于0.25ml塑料细管内,0℃时置入冷冻器。以1℃/分降温,-6.5～-7℃诱发结晶,再以0.5℃/分(0.3～0.8℃/分)降温至-30℃,然后投入液氮保存5～12天。35℃水浴解冻。20枚胚胎冻后形态正常率为65％(13/20)。将13枝形态基本正常的胚胎移植给5只受体羊,结果4只受体羊妊娠,产羔7只,冻胚存活率为35％(7/20)。除1只冻胚羔产下后90分钟死亡外,另6只冻胚羔生长发育正常。 相似文献
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牛胚胎两步冷冻 总被引：1，自引：0，他引：1
8枚61/2～71/2日龄黑白花奶牛胚胎,采用两步冷冻和细管包装法进行了冷冻。同时配合使用甘油抗冻剂,即以1℃/分钟的速度由室温降至-5℃;在-5℃下诱发结晶并在投入液氮前以0.3℃/分钟的速度降温至-36℃。胚胎在液氮中贮存4天～7个月后,直接在17℃温水中解冻。除去甘油后,用评定胚胎形态的方法进行胚胎存活的鉴定,6枚形态评为优和良的胚胎,用凯苏式输卵器非手术分别移入6头同期受体母牛。其中2头妊娠,1头妊娠母牛在孕后第四个月流产,另1头于1983年元月26日产1公犊,犊牛初生重为45公斤。试验结果证明,采用两步冷冻法冷冻的牛胚胎移植后可以成活。 相似文献
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体外受精后不同时间收集的牛胚胎的冷冻效果 总被引：2，自引：0，他引：2
比较了体外受精后不同时间收集的牛囊胚期胚胎冷冻后的存活率。试验一收集受精后第６，７，８和９天出现的胚胎，分３步加入０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油和０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇，将胚胎装入０．２５ｍＬ细管后，放入已降温至５℃的冷冻机内，立即以２℃／ｍｉｎ的速率降温至－７℃，停留５ｍｉｎ后植冰。植冰后５ｍｉｎ，以０．３℃／ｍｉｎ的速率降温至－２５℃，取出胚胎，并立即投入液氮中保存。解冻时，先让细管在空气中暴露１０ｓ 相似文献
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牛体外受精胚胎冷冻与解冻孵化试验报告 总被引：3，自引：0，他引：3
用添加 5 %犊牛血清 (FCS)的HEPES缓冲TCM 199,用共培养法获得牛体外受精胚胎。冷冻保护液组成为 :18%FCS、72 %PBS、10 %( 1.4mol)甘油、0 .1g/ml蔗糖。冷冻程序为 :①从 -7℃开始冷冻 10分钟 ,第二分钟植冰 ;② 0 .5℃ /分缓慢冷冻 3 2分钟至-2 3℃ ;③最后以 -2 3℃冷冻 10分钟后投入液氮。冷冻保存 6h～5d的胚胎解冻存活率为 90 .0 %;用 2 0 %FCS +80 %HamF1 0 孵化2 4、48h存活率分别为 77.8%、5 1.9% 相似文献
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对马胚冷冻到0°、-10°、-15°和-20℃或贮存在20°,-5°和-196℃的存活力,通过非手术移植到母马的方法进行了测定。6日胚,7日胚和8日胚(排卵后6,7,8天)用非手术法采集,用 Dulbecco 氏缓冲磷酸盐液冲洗,用1.5M 二甲亚砜(DMSO)或1.0M 甘油在室温平衡,然后以0.5—1.0℃/分的速度冷却到-5℃,放入晶种后保持10分钟,再以0.12—0.27℃/分的速度冷冻到-70℃,然后投入液氮里。在贮存1～214天后,给胚加温,以1.4—10.3℃—/分速度从-70℃加温到-10℃,再以 相似文献
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绵羊冷冻胚胎移植成功 总被引：3，自引：0，他引：3
以成年寒羊母羊做供、受体。使用 FSH(300单位)和 LH(150单位),进行供体超数排卵,并在发情周期的第6～8天(发情开始当天=0天)用杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)+5%失活犊牛血清,冲洗子宫角手术采卵。只有形态正常的胚胎用于冷冻。胚胎冻前分6步(0.25M、0.5M、0.75M、1.0M、1.25M 和1.5M,每种浓度停留7～10分钟)添加抗冻剂(DMSO)。解冻后也分6步(1.5M、1.25M、1.0M、0.75M 和0.25M,每种浓度停留10分钟)除去 PBS 液中的 DMSO。胚胎在盛有0.25～0.3毫升 PBS 液(Whitting-ham,1971)的安瓿(容量1.0毫升)中冷冻,PBS 液含1.5M 的 DMSO。自1979年8月24日至12月27日,胚胎的冷冻和移植试验分三批进行。第一批胚胎是按 Willadsen(1976)冷冻羊胚胎的方法冷冻的,并降温至-120℃时将安瓿移入液氮。安瓶从-80℃--5℃,以12℃/分钟的速度解冻,从-5℃放入手中快速升温解冻。第二和第三批,胚胎是按 Willadsen(1978)所述及的牛胚胎冷冻和解冻方法进行的,并降温至-60℃将安瓿直接投入液氮。将安瓶放入-50℃的酒精浴中,以4℃/分钟的速度解冻至-10℃。从-10℃将安瓿放入手中快速解冻。第三批试验的受体根据母羊的健康和繁殖情况进行了挑选。共49个胚胎(47个形态正常的和2个形态异常的)移入23只受体,4只母羊妊娠。其中一只受体早产,羔羊死亡;一只受体母羊产了3只羊羔,共产了五只羊羔。三批试验的受体妊娠率和胚胎成活率分别如下:0%(0/8)、0%(0/18)、11.1%(1/9)、6.2%(1/16)和50%(3/6)、33.3%(5/15)。 相似文献
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哺乳动物胚胎冷冻技术自建立以来,已进行了一些重大改进。其主要进展有: 1.缩短冷冻时间:提高慢速(0.3℃/分钟)降温操作的中止温度,至到较高的零下温度(-30～-40℃)或者快速降温,降到一定低温便保持此温度一段时间(两步冷冻法)。这样做虽然时间缩短了,但胚胎仍含有水分,这些水分在胚胎投入液氮的急剧降温过程中,便形成小冰晶或者不太稳定的玻璃态。因此,需快速解冻,以防止升温过程中形成有损于胚胎的冰晶。 2.缩短解冻后脱除低温保护剂时间:用非渗透剂(蔗糖)一步稀释,以避免保护剂脱出后胚胎发生渗透性膨胀。 3.玻璃化冷冻法(Vitrification):这是前不久研究出的一种新冷冻方法。其设计根据是,保护剂的稀释液在急剧降温到很低温度时,能被浓缩,而不会形成冰晶。作者已试验成功用两种浓度的低温保护剂,作为胚胎内液(10％甘油和20％丙二醇混合液)和外液(25％甘油和25％丙二醇混合液),且均能达到玻璃化。用此法冷冻的小鼠和牛的晚期桑葚胚已移植成功并产仔。 相似文献
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《上海畜牧兽医通讯》1993,(4)
关于牛的冷冻受精卵移植的研究(胚胎移植)。供卵牛是经过超排处置的10头黑白花牛和2头黑毛和牛,另外对2头自然发情的牛自其桑椹胚采取66个胚泡供本次试验使用。冻结的容器采用6×70mm的玻璃安瓿,用1.0摩尔的甘油作冻结保护物质。冻结法:35℃～-5℃以1℃1分的速度冷却(置于-5℃的冰中),再以0.3℃/分的速度冷却至-36℃。然后由-36℃直接移入液氮中保存;其融解的方法是置于37℃温水中融解。融解后,66个受精卵中有39 相似文献
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用简易分割方法,分割奶牛冷冻胚胎16枚,获得半胚32枚,分割成功率为100％(16/16),可移植半胚29枚,移植于16头受体牛,到第3个情期未返情者经直肠检查有6头妊娠,妊娠率为37.5％(6/16)。其中,在分割前或者分割后经恢复培养0.5～2h再移植的10头受体牛,5头妊娠;而未经恢复培养,分割后直接移植的6头受体牛中,只有1头妊娠。移植后3个月,直肠检查确定2头流产。已有1头受体黄牛生出1头奶牛牛犊(母)和1头受体奶牛产1头奶牛牛犊。其余的2头妊娠受体牛将于9月份产犊。此外,用简易分割法分割奶牛胚胎5枚,得到半胚10枚,裸半胚直接冷冻,解冻后回收可移植半胚5枚,移植于4头受体牛,无一头妊娠。结果表明,冷冻胚胎的分割半胚优于分割后冷冻半胚移植效果;冷冻胚胎分割前或者分割后恢复培养移植优于未经恢复培养而直接移植;简易分割法可应用于冷冻胚胎的分割。 相似文献
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为了研究山羊胚胎冷冻贮藏的快速方法,以二甲亚砜(DMSO)和甘油作为防冻剂采用两步法将80个16-细胞胚进行冷冻。在液氮中贮存30天,并以50℃/分进行融解。将在 DMSO中冷冻的41个胚胎和在甘油中冷冻的20个胚胎 相似文献
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为了探究萨能奶山羊细管冻精最适冷冻程序,本试验设置5个不同的冷冻程序[在5～-10℃温区内,各组降温速率相同（6℃/min）,在-10～-140℃危险温区内设置5个不同梯度的降温速率（25℃/min,35℃/min,40℃/min,55℃/min,65℃/min）]用于程序化冷冻中。试验利用全自动细管精液程控冷冻仪编制冷冻程序,通过casa系统测定精液在不同冷冻程序下精子活力变化,同时利用特异性荧光探针（异硫氰酸镧-花生凝集素,FITC-PNA)检测解冻后精子顶体完整率,用低渗精子肿胀法（HOST)检测解冻后精子质膜完整率。结果表明,冷冻程序C组（5～-10℃,降温速率6℃/min;-10～-140℃,降温速率40℃/min）解冻后精子活力、质膜完整率和顶体完整率最高,分别达到60.75%、38.10%和71.01%,均显著高于其他组（P<0.05）。在危险温区内,降温速率为40℃/min可以较好地保证冷冻萨能奶山羊精子的活力和质膜功能,同时利用程序化冷冻程序C组可显著提高精子的受精能力,C组的降温速率可以提高冷冻萨能奶山羊解冻后精液质量。 相似文献
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用常规方法将7日龄牛胚胎冷冻,在37℃水中解冻,一步法除去甘油.将一部分胚胎放在 PBS 液中,一部分放在12.5%蔗糖液(455毫渗摩)+20%牛血清中.显微操作时放大100倍,轻度吸引固定。用显微刀片切开透明带,分割胚胎成两半胚。将分割后的两半胚留在透明带里或裸露,进行体外培养24～72小时或非手术移植给青年母牛。结果,仍留在透明带里的两半胚移植妊 相似文献
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冷冻胚胎解冻后直接移植给受体的方法,应用方便,有利于体外大量生产牛胚胎程序的商品化。牛胚胎直接移植现在用的程序是以蔗糖作渗透压缓冲剂,在冷冻细管里脱除甘油,然后移植,或者将蔗糖添加在冷冻液里,省去专门的脱除步骤。现在研究的新方法是用1.5M乙二醇(ethykne glycol)作冷冻保 相似文献
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奶牛冷冻胚胎分割移植效果探讨 总被引：2，自引：0，他引：2
分割加拿大奶牛冷冻胚胎 ,借荷斯坦牛受体移植。共分割冷冻胚胎 1 5枚 ,分割为裸半胚 30个 ,分割成功率 1 0 0 %。移植受体 2 7头 (其中移植一对半胚的受体 3头 ) ,移植妊娠 1 4头 ,受体移植妊娠率51 .85% ,产犊 1 4头 ,半胚产犊率为 4 6 .6 7% ,按未分割的整胚计算 ,产犊率达到 93.34 % ,比整胚移植产犊率还提高 1 8.34个百分点。移植半胚生产 1头犊牛需胚胎 1 .0 7枚 ,比整胚减少 0 .2 6枚 ,降低成本1 51 0 .6 0元。说明胚胎分割是降低成本 ,扩大卵源 ,增加良种牛数量的有效方法。 相似文献
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关于影响牛鲜胚或冻胚移植妊娠率的因素在国内外已有很多的报道,但都是以单项因素研究居多.本试验对影响牛体内胚胎(以冷冻胚胎为主)移植妊娠率的多项因素如胚胎冷冻、解冻、胚龄、黄体质量、受体牛的生理状态等进行分析,以选择最佳的技术方案,为牛胚胎移植产业化服务. 相似文献
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猪冷冻（—20℃）胚胎在我国移植成功 总被引：5，自引：0，他引：5
实验Ⅰ将129枚猪胚胎,用于冷冻-解冻-体外培养研究。以含有1.5M甘油的PBS液为冷冻液,以1℃/分的速率从35℃降至-7℃,在-7℃自动诱发给冰,然后以0.3℃/分的速率降至-35℃,再以0.1℃/分的速率降至-36℃,立即投入液氮(-196℃);胚胎解冻在37℃水浴中进行、分步脱出甘油后以改进的mBMOC-Ⅱ为培养液进行体外培养。结果,囊胚、扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵化出后期囊胚、解冻后体外培养存活率分别为0％(0 /2)、64％(16/25)、0％(0/9)。在液氮中(-196℃)保存80～103天,扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵出后期囊胚解冻后,体外培养存活率分别为41.6％(5/12)、63.7％(7/11)和0％(0/70)。结果表明,在液氮温度(-196℃)保存下,刚孵出囊胚有较高的耐冻性和存活能力。实验Ⅱ进行猪冷冻胚胎解冻后体内发育能力研究。96枚扩张囊胚和刚孵出囊胚,分批冷冻和保存在-20℃、-35℃和-196℃。解冻后移植3头受体,其中2头返情,1头妊娠并于1990年7月31日产仔2头,公母各1头,初生重均为1.35kg,妊娠期为116夭。该结果为我国首例猪冷冻(-20℃)胚胎移植成功,并为今后开展猪胚胎超低温(-196℃)冷冻保存技术研究奠定了基础。 相似文献