南瓜蚜传黄化病毒湖北和云南分离物的部分序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

尚巧霞  向海英  韩成贵  李大伟  于嘉林 《植物病理学报》2008,38(1):64-68

 本研究从带有黄化症状的南瓜叶片中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增得到来自湖北和云南的南瓜蚜传黄化病毒(CABYV)2个分离物的1375nt特异性核苷酸片段。分别将PCR产物插入到克隆载体pMD19-T并转化大肠杆菌DH5α,对筛选到的阳性克隆进行了序列测定和分析(GenBank登录号为EF488996和EF488997)。所获片段含有部分复制酶基因576nt,非编码区199nt和完整的CP基因600nt,编码一个由199个氨基酸组成的分子量约为22kDa的结构蛋白。湖北和云南分离物与法国分离物、意大利分离物、西班牙分离物、北京分离物和上海分离物的CP基因核苷酸序列和推测氨基酸序列的同源性分别为93.1%~98.5%和91.4%~98.5%。  相似文献   

广东甘蔗黄叶病田间调查及病原病毒的分子检测   总被引：2，自引：0，他引：2  

许东林  李俊光  周国辉 《植物病理学报》2006,36(5):404-406

 广东省粤北和粤西蔗区多个县市的田间甘蔗上观察到甘蔗黄叶病(Sugarcane yellow leaf disease,SYLD)典型症状,目前该病仅局部分布,但部分田块病株率为5%~80%,发病品种有青皮果蔗、黑皮果蔗、新台糖系列品种、粤糖79/177和粤糖93/159等。采集发病田间显症叶片、无症叶片和在病叶上取食的甘蔗绵蚜(Ceratovacuna lanigera)样品,抽提总RNA,以基于甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV) CP基因序列的特异引物进行一步RT-PCR和巢式PCR扩增,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和BLAST比对。结果显示,RT-PCR及巢式PCR产物核苷酸序列与分离自巴西的SCYLV B1株系相应区段同一率为100%;一步RT-PCR可从约70%的显症叶片样品中检测到SCYLV,而病田中的无症叶片样品以及在病叶上取食的单头甘蔗绵蚜样品需经巢式PCR扩增方可检测到SCYLV,阳性率分别为1%~5%和83%。本研究表明,广东省栽培甘蔗已受到SCYLV侵染,甘蔗绵蚜携带SCYLV。  相似文献   

烟草线条病毒RT-PCR检测方法   总被引：1，自引：0，他引：1  

魏梅生  相宁  张春泉  Said A.Ghabrial 《植物检疫》2006,20(3):136-138

根据已报道的烟草线条病毒外壳蛋白基因序列，设计出一对特异性引物，提取大豆病叶的总RNA，反转录成cDNA，PCR扩增出约400bp大小的产物，产物克隆到pGEM-T Easy载体上，转化大肠杆菌DH 5α，抽提的质粒用Not Ⅰ酶切，出现430bp大小的目标插入片段。经序列测定确认了插入片段的大小为404bp。  相似文献   

湖北省小麦黄花叶病病原的部分序列鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨军  侯明生 《植物病理学报》2001,31(4):319-323

 从湖北省真菌传小麦黄花叶病病毒分离物中抽提病毒总RNA,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,合成病毒外壳蛋白(CP)基因cDNA。对所获得的cDNA克隆进行序列测定及分析,结果表明,湖北省真菌传小麦黄花叶病病毒分离物与小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)、大麦黄花叶病毒(BaYMV)、大麦和性花叶病毒(BaMMV)等病毒CP基因相应序列的同源性均低于70%,而与报道的小麦黄花叶病毒(WYMV)分离物CP基因核苷酸及编码氨基酸序列同源性均超过97%。表明湖北省真菌传小麦黄花叶病病原应为小麦黄花叶病毒(WYMV)。  相似文献   

一个马铃薯X病毒分离物的外壳蛋白基因序列分析与株系鉴定   总被引：5，自引：1，他引：5       下载免费PDF全文

曲静  朱常香  温孚江  郭兴启  宋云枝 《植物保护学报》2003,30(4):358-364

对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX—SD1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板，应用RT-PCR扩增目的基因，通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体，测序。结果表明，PVX—SD1的CP基因长719bp，可编码248个氨基酸；与Gen—Bank中报道的15个有代表性的株系或分离物相比较，核苷酸同源性在80．1％-99．7％，氨基酸同源性在89．8％-100％；与欧洲株系UK3仅1个核苷酸不同，同源性为99．7％，氨基酸同源性达100％，表明它们可能为同一株系，属于X^3组．  相似文献   

RT-PCR检测番茄不孕病毒   总被引：5，自引：1，他引：5  

吴红芝  孙宝华  陈海如  袁向军 《植物检疫》2002,16(2):66-69

根据番茄不孕病毒 (TAV)RNA3上外壳蛋白基因序列设计、合成引物 ,以感病组织和健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,结果从感病组织中扩增出与预期的6 42bp大小一致的目标片段 ,而健康组织无此扩增产物 ;将PCR产物插入 pGEM T载体克隆并测序 ,序列分析表明与TAV不同株系的序列同源性达到 96 2 %以上 ;将感病组织总RNA以 1 0倍梯度稀释成不同浓度 ,测出RT PCR检测TAV的灵敏度为 1 0 -5 ;PCR产物克隆作为RT -PCR反应的阳性对照 ,解决了毒源保存和传播的问题 ,从而建立了TAV快速、灵敏、准确的RT -PCR鉴定和检测技术  相似文献   

小西葫芦黄花叶病毒北京分离物的鉴定及其基因组3′端特性分析     

张永江  李明福  相宁  李桂芬 《植物保护学报》2006,(1)

在北京东郊自然感病的南瓜Cucurbita moschata上获得一病毒分离物(BJ-1),经生物学、血清学和分子生物学鉴定,确定为小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellowmosaic virus,ZYMV)。为分析其基因组3′端特性,以发病叶片中提取的总RNA为模板,对基因组3′端进行RT-PCR扩增,产物克隆到pMD18-T载体上进行序列分析,共测定了该病毒分离物包括全部CP基因在内的1269bp。该分离物CP基因由837个核苷酸组成,编码279个氨基酸。对包括该分离物在内的30个序列的760bp(含NIb基因3′端56bp和CP基因中的704bp)片段、NIb蛋白与CP蛋白的切割位点、蚜传必需基序的变异、寄主来源及地域来源进行了分析。结果表明,ZYMV不同分离物的基因分型与上述五个因素无明显关系。  相似文献   

北京地区百合无症病毒CP基因的克隆与分析     

王贤  田保华  王永勤  熊敏  卫尊征  王月华 《中国植保导刊》2011,31(5)

以感染百合无症病毒(LSV)的百合叶片为材料,提取总RNA为模板,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出856bp大小的LSV CP基因片段.经Blast比对发现,该基因片段与Genbank上发表的ISV CP基因序列(DQ294655.1)同源性为97.31%.由该序列推导出的氨基酸序列与其相似度为98.6%,仅存在某些氨基酸的差异.经过聚类分析表明,该CP基因的氨基酸序列与厦门和兰州分离的病毒遗传距离较近,而与海宁和广州分离的病毒遗传距离较远.  相似文献   

小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析   总被引：8，自引：2，他引：8  

古勤生  范在丰  Piero Roggero  陈红运  俞正旺  李怀方 《植物病理学报》2003,33(6):498-502

 以小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)的中国分离物(CH-87)接种发病的叶片中提取的总RNA为模板,经RT-PCR扩增获得ZYMV CP基因,将其克隆到pUCm-T质粒上进行序列分析。结果表明该CP基因由837个核苷酸组成,编码279个氨基酸。与已发表序列相比较,该CP基因与国际上已报道的4个基因型不同,应属于新的基因型,暂命名为基因型Ⅴ。  相似文献   

中国小麦花叶病毒(CWMV)复制酶基因在病株体内的表达分析     

张芬  蔡年俊  羊健  李静  陈剑平  张恒木 《植物病理学报》2017,47(5):640-646

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101),并克隆至原核表达载体pGEX-6P1,然后导入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLysS中诱导表达。重组的复制酶蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。Western-blot分析表明该抗体具有高度的特异性,能用于病株体内CWMV复制酶蛋白的检测。检测分析显示在病株体内,CWMV基因组RNA1可直接充当其复制酶基因的mRNA;在感染的细胞中,其复制酶组分主要是RNA1 ORF1编码的蛋白,分子量约153 kDa,且特异性地定位于膜结构上。  相似文献   

马铃薯Y病毒CP基因5′端和3′端反向重复结构介导的抗病性研究     

李鹏  宋云枝  刘晓玲  朱常香  温孚江 《植物病理学报》2007,(1)

本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)外壳蛋白(CP)基因(PVYNCP)5′端和3′端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKII-5′IR和pROKII-3′IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草。抗病性试验表明,转化PVYNCP基因3′端茎50 bp(环50 bp)hp RNA(hairpin RNA)的烟草抗病率达69%,而转化PVYNCP基因5′端相同片段长度的hpRNA的烟草却全部发病。Southern blot结果表明,转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性;Northern blot结果表明,目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的抗病性。研究结果证明PVYNCP基因的3′端比5′端更能有效地诱发基因沉默,并且hpRNA茎部的长度可减少到50 bp。该结果为探索利用CP基因的最短长度和有效部位的基因片段来培育多抗病毒转基因植物提供了依据。  相似文献   

马铃薯A病毒CP基因的克隆与序列分析   总被引：9，自引：0，他引：9       下载免费PDF全文

吴兴泉  陈士华  吴祖建  林奇英  谢联辉 《植物保护》2003,29(5):25-28

利用根据马铃薯A病毒 (PVA)外壳蛋白 (CP)基因序列设计合成的一对引物 ,以带毒植物总RNA为模板 ,RT-PCR扩增得到长 0.8kb的目的片段。将目的片段转入大肠杆菌并进行了序列测定。测序结果与PVA其他分离物CP基因序列比较 ,发现其核苷酸同源性最高可达 99%。依据CP序列建立了PVA病毒的系统进化树并对PVA不同分离物CP氨基酸序列差异性做了分析  相似文献   

表达dsRNA的细菌提取液可抑制黄瓜花叶病毒对烟草的侵染   总被引：7，自引：0，他引：7  

张德咏  朱春晖  成飞雪  何明远  张战泓  刘勇 《植物病理学报》2008,38(3):304-311

 利用RT-PCR分别克隆了CMV P3613株系的RNA2片段、MP(movement protein)基因片段及CMV AN株系的CP(coat protein)基因片段。以CP基因为中间间隔序列,分别构建了含有RNA2片段和MP基因反向重复片段的原核表达载体。体外转录试验表明:两个载体转录后都能形成预期大小的dsRNA。经过IPTG诱导,在大肠杆菌HT115(DE3)菌株中可表达产生预期大小的核酸片段,经DNase和RNaseA消化处理,证实为dsRNA。将表达病毒基因dsRNA的细菌超声破碎后处理烟草,进行保护和治疗试验,结果表明:表达CMV MP基因和RNA2片段dsRNA的细菌破碎液能够诱导烟草对CMV产生抗性。接种病毒60d后,保护效果试验病株率分别为45%和60%,治疗效果试验病株率分别为75%和85%,而其他对照发病率均为100%。本研究结果证明了利用RNA沉默的原理,构建具有反向重复序列的原核表达载体,用细菌表达dsRNA的粗提取物可防治CMV对烟草的侵染。  相似文献   

小西葫芦黄花叶病毒北京分离物的鉴定及其基因组3''端特性分析   总被引：4，自引：1，他引：4  

张永江  李明福  相宁  李桂芬 《植物保护学报》2006,33(1):32-36

在北京东郊自然感病的南瓜Cucurbita moschata上获得一病毒分离物（BJ-1），经生物学、血清学和分子生物学鉴定，确定为小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）。为分析其基因组3’端特性，以发病叶片中提取的总RNA为模板，对基因组3’端进行RT-PCR扩增，产物克隆到pMD18-T栽体上进行序列分析，共测定了该病毒分离物包括全部CP基因在内的1269bp。该分离物CP基因由837个核苷酸组成，编码279个氨基酸。对包括该分离物在内的30个序列的760bp（含NIb基因3’端56bp和CP基因中的704bp）片段、NIb蛋白与CP蛋白的切割位点、蚜传必需基序的变异、寄主来源及地域来源进行了分析。结果表明，ZYMV不同分离物的基因分型与上述五个因素无明显关系。  相似文献   

侵染华南地区甘蔗的SCMV遗传多样性初探   总被引：3，自引：0，他引：3  

许东林  周国辉 《植物病理学报》2005,(Z1)

甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SC- MV)引起的甘蔗花叶病在我国浙江、福建、广东、广西、云南、海南等地甘蔗产区普遍发生,为害严重。SCMV属马铃薯Y病毒科(Potyviridae)成员,株系繁多,变异较大。本文简要报道华南地区甘蔗上SCMV的遗传多样性的初步研究结果。 1 材料与方法 1．1 样品采集与病毒CP基因片段RT-PCR检测  相似文献   

马铃薯Y病毒CP基因5'端和3'端反向重复结构介导的抗病性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

李鹏  宋云枝  刘晓玲  朱常香  温孚江 《植物病理学报》2007,37(1):69-76

 本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVY^N)外壳蛋白(CP)基因(PVY^N CP)5'端和3'端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKⅡ-5'IR和pROKⅡ-3'IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草。抗病性试验表明,转化PVY^N CP基因3'端茎50 bp(环50 bp) hpRNA(hairpin RNA)的烟草抗病率达69%,而转化PVY^N CP基因5'端相同片段长度的hpRNA的烟草却全部发病。Southern blot结果表明,转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性;Northern blot结果表明,目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的抗病性。研究结果证明PVY^N CP基因的3'端比5'端更能有效地诱发基因沉默,并且hpRNA茎部的长度可减少到50 bp。该结果为探索利用CP基因的最短长度和有效部位的基因片段来培育多抗病毒转基因植物提供了依据。  相似文献   

水稻受稻瘟病菌诱导的一个基因片段的分离和克隆     

董继新  董海涛  吴玉良 《植物病理学报》1999,29(4):289-293

 本研究利用一对抗瘟性近等基因系(near-isogenic lines,NILs) H7R (抗病)和H7S (感病),经稻瘟病菌诱导后提取RNA,进行m RNA差异显示(differentialdisplay,DD)。在获得多个差异cDNA片段的基础上,经PCR重扩增,Southern杂交粗筛,Northern进一步鉴定。其中25号片段(克隆RM a25)经序列测定,国际联网查询,证实是受稻瘟病菌诱导的水稻新基因cDNA片段。  相似文献   

对鳞翅目害虫有活性的cry1C基因的克隆和表达   总被引：2，自引：0，他引：2       下载免费PDF全文

宋福平  张杰  韩岚岚  高继国  黄大昉 《植物保护学报》2003,30(2):161-165

在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上，构建了Btc001菌株质粒DNA HindⅢ片段的文库，并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCIR-RFIP)方法筛选出含有crylC6全长基因的13．5kb大片段，酶切分析得到该片段的物理图谱，BamHI和EcoRI切完成了6．5kb含全长基因的亚克隆，并对这条6．5kb片段亚克隆、测序，序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686)，并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S581CB和S381CB，扩增产物插入表达载体pET-21b中，诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性，LC50达到7．9μg/ml。  相似文献   

白草花叶病毒承德玉米分离物3′-cDNA 片段序列分析     

崔小雯  高波  许斐斐  李向东  张春庆  苗洪芹 《植物病理学报》2012,42(1):32-36

 采自河北承德11 个表现矮花叶症状的玉米样品,用甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV)和白草花叶病毒
(Pennisetum mosaic virus, PenMV)简并引物扩增了基因组3′ 端约2. 1 kb 的片段并进行测序。Blast 结果表明其中8 个样
品含有PenMV。扩增到的PenMV 序列均为2 135 nt,包括部分NIb 基因(985 nt)、完整的CP 基因(909 nt)和3′-UTR(241
nt)。这8 个分离物CP 基因和3′-UTR 与GenBank 上其他PenMV 分离物相应序列的核苷酸一致率分别为89. 8% ~ 93． 4%
和95. 9% ~ 97. 9% 。根据扩增的2 135 nt 序列和CP 基因序列构建系统发育树,8 个分离物与GenBank 上其他PenMV 分离
物都分为2 个组:山西组和承德组。重组分析表明CD9 的CP 基因存在重组。  相似文献   

玉米矮花叶病毒北京分离物复制酶基因的克隆及序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈红运  范在丰  邓丛良  李怀方 《植物病理学报》2002,32(1):33-36

 以MDMV北京分离物RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增了含复制酶(NIb)基因的DNA片段,将其克隆到p UC18载体上并进行序列分析。结果表明:NIb基因由1563个碱基组成,编码521个氨基酸并含有高度保守基序GDD。NIa/NIb和NIb/CP交界处的蛋白酶切割位点分别为Q/C和Q/S-NIb基因(北京分离物)在碱基数目上与保加利亚分离物完全一致,二者的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为70.6%和76.6%,而与SCMV-SC的核苷酸及氨基酸序列同源性则高达81.3%和92.1%。  相似文献