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1.
云南澳洲坚果苗木感染番茄斑萎病毒属病毒初报 总被引：1，自引：0，他引：1
在云南省临沧市永德县海拔约800 m 的澳洲坚果（Macadamia sp.）种苗繁育基地发现叶片
褪绿、黄化、叶脉间呈现近似圆形或不规则褐色枯斑的植株。为了确认植株病因,采集典型病株,应用
电子显微镜负染色法、超薄切片和DAS-ELISA 进行检测,在澳洲坚果苗木病叶分离物Maca-LC 的粗汁
液和病叶超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒粒体。该病毒粒子为球形,直径
80 ~ 85 nm。进一步应用DAS-ELISA 方法鉴定,病叶与Tospovirus 的西瓜银色斑驳病毒（Watermelon silver
mottle virus,WSMoV）/花生芽坏死病毒（Groundnut bud necrosis virus,GBNV）复合抗血清呈阳性反应。
通过病症典型症状、病毒形态学观察及血清学方法检测表明,侵染云南澳洲坚果种苗的病毒分离物
Maca-LC 为番茄斑萎病毒属Tospovirus 病毒。 相似文献
2.
在对青海辣椒上的病毒病进行调查时发现疑似番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt tospovirus,TSWV）病样,表现为环斑、坏死等症状。为明确其感染的病毒种类,对其进行了检测和鉴定。对Tospovirus的通用引物进行检测时发现采集的49份样品中有14份样品扩增到了目的条带,序列测定结果显示其与TSWV的同源性最高;同时利用TSWV特异性引物对阳性样品进行检测,结果全部为阳性;基于克隆的NSs基因序列聚类分析结果显示其属于TSWV的1个分离物,与中国云南、黑龙江等地分离物相对近缘,而与国外其他分离物相对远缘。在分子鉴定的基础上,利用TSWV的抗体通过Western blot进一步对样品进行了检测,结果也证明采集样品中存在TSWV的感染。这些结果表明青海辣椒上存在TSWV的感染。 相似文献
3.
云南省蝴蝶兰上凤仙花坏死斑病毒的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
2008 年对云南省主要花卉基地进行调查,获得症状表现为环斑、坏死,疑似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒的蝴蝶兰样品。应用生物测定,结合现代电镜技术、免疫试纸条检测技术初步确定为番茄斑萎病毒属的凤仙花坏死斑病毒（Impaliens necrotic spot virus,INSV）,通过设计的4 对引物进行RT-PCR扩增和测序,获得核壳体蛋白（Nucleocapsid protein）基因核酸长度为886 nts,RNA M 编码的非结构蛋白（Nonstructure protein,NSm）基因核酸长度为681 nts,依赖于RNA 的RNA 聚合酶（RdRp）基因核酸长度为1 048 nts,测序结果在NCBI BLAST 网络数据库中比对,同时应用生物信息软件DNAman 比对,其与INSV的同源性都达90%以上,都证明分离到的病原物为凤仙花坏死斑病毒（INSV）。 相似文献
4.
陕西杨凌地区番茄斑萎病毒外壳蛋白基因的克隆与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是世界上危害最大的十大病毒之一,为了确定陕西杨凌地区的番茄感染TSWV情况,采集该地区4份疑似感染TSWV的番茄样品,通过表型观察以及PCR分子鉴定进行分析。结果显示,2份材料扩增出234bp的特异性条带,表明样品感染了TSWV。采用同源克隆方法获得了杨凌地区757bpTSWV的外壳蛋白基因(CP),其与西班牙TSWV分离物同源性最高,为99%,而与昆明的TSWV分离物亲缘关系较远。 相似文献
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广东辣椒上首次检测到西瓜银斑驳病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
2014 年在广东辣椒产区发现疑似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）病毒侵染引起的辣椒褪绿坏死环斑症状。Dot-ELISA 检测显示,该病毒分离物与番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus,TSWV）单克隆抗体不产生血清学反应,表明该病毒不属于TSWV。利用Tospovirus 属病毒通用引物gL3637/gL4435C进行RT-PCR 检测,可以从所有辣椒病样总RNA 中扩增出预期大小约800 bp 的目的片段。基因克隆与序列分析表明,该片段序列与西瓜银斑驳病毒（Watermelon silver mottle virus,WSMoV）中国广州分离物的同源性最高,为97.5%。系统进化分析也显示,该病毒分离物与WSMoV 各分离物亲缘关系最近,并聚类在一个分支。因此,侵染广东辣椒的病毒分离物为WSMoV。 相似文献
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7.
类番茄茄与番茄属间有性杂交的研究 总被引：4，自引：1，他引：3
用类番茄茄与番茄属的 9个种进行有性杂交 ,通过人工离体胚培养获得栽培番茄‘粤农二号’×类番茄茄的F1植株。杂种近于不育。用栽培番茄、类番茄茄、野生番茄及(栽培番茄×野生番茄 )与之回交及杂交 ,获得与栽培番茄的回交子一代及与秘鲁番茄、多腺番茄、潘那利番茄、粤农二号×秘鲁番茄F1的杂种 ,但它们的能育性很低。用栽培番茄、野生番茄与它们再回交及杂交 ,未能得到与栽培番茄的二次回交子一代 ,只获得 (粤农二号×类番茄茄 )× (粤农二号×秘鲁番茄 )的F1与秘鲁番茄、多腺番茄的复合杂种。人工苗期接种黄瓜花叶病毒 (CMV)结果表明 ,类番茄茄及其与番茄属的远缘杂种对CMV有较强的抗性。 相似文献
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番茄斑萎病毒TSWV 的鉴定及抗病种质的筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
在北京顺义地区番茄栽培温室中随机抽取了15份疑似感染番茄斑萎病毒（TSWV）的植株叶片和果实,利用TSWV试剂盒进行DAS-ELISA检测,结果均为阳性,表明其感染了TSWV。利用来自秘鲁番茄的抗TSWV基因Sw-5的共显性SCAR标记,对442份番茄材料进行分析,筛选出24份含有Sw-5的材料,其中4份为野生番茄,1份为杂交种,16份为高代育种自交系,3份为野生潘那利番茄渐渗系。4份野生番茄综合农艺性状较差,如果实小、产量低、品质和风味差等,不能直接应用于育种;其余20份含Sw-5的材料综合农艺性状较好,可作为番茄抗TSWV的育种材料。 相似文献
9.
为明确引起四川彭州莴笋病毒病的病毒种类,通过生物接种和电子显微镜方法,结合小RNA测序技术和反转录PCR对采集病样进行鉴定和分析。摩擦接种试验表明回接莴笋的发病症状与田间相似,矮牵牛叶片出现局部枯斑;利用电镜可观察到叶肉细胞中有大量病毒粒体聚集于内质网池,其形态特征与正番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）病毒相似;通过小RNA测序技术获得了番茄斑萎病毒（tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV）接近全长的序列,表明侵染该批次莴笋样品的病原物可能是TSWV。利用RT-PCR方法确定田间和回接莴笋及枯斑寄主中均存在TSWV,进一步证明四川彭州莴笋病毒病是由TSWV侵染引起的,这是四川首次发现TSWV为害莴笋。对拼接序列和N基因序列分别构建系统发育树可知,彭州分离物TSWV-SCPZ分别与韩国分离物（YY和K）和美国分离物（MR-01）亲缘关系最近。 相似文献
10.
北京、河北和宁夏番茄穴盘商品苗质量检测 总被引：1，自引：0，他引：1
抽样采集北京、河北和宁夏地区集约化育苗场生产的番茄穴盘商品苗样品85份,对株高、茎粗、干鲜质量和壮苗指数等生理指标进行检测,并对番茄早疫病和TYLCV带菌情况进行PCR检测。结果表明,北京地区采集的65份样品平均壮苗指数为0.156,早疫病检出率67.69%,TYLCV检出率7.69%;河北地区采集的15份样品平均壮苗指数0.165,早疫病检出率86.67%,TYLCV检出率为0;宁夏地区采集的5份样品平均壮苗指数0.069,早疫病和TYLCV检出率均为0。 相似文献
11.
为明确东亚西番莲病毒（East Asian passiflora virus,EAPV）在福建西番莲上的发生情况,采用血清学和RT-PCR检测技术对采集的西番莲病样进行检测,并对阳性样品PCR产物进一步克隆、测序和序列分析。结果表明,11份样品的马铃薯Y病毒属（Potyvirus）病毒血清学检测结果为阳性,大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）血清学检测结果均为阴性;应用Potyvirus属通用引物从11份样品中扩增得到预期大小约660 bp的目的片段,序列比对发现,其中10份阳性样品与已报道的夜来香花叶病毒（Telosma mosaic virus,TeMV）核苷酸序列高度一致,1份样品与已报道的EAPV核苷酸序列一致性超过98.3%。针对EAPV疑似样品（命名为FJBXG-P1）,利用特异性引物扩增得到预期大小约955 bp的目的片段,获得的外壳蛋白（Coat protein,CP）基因序列全长870 bp（GenBank登录号：MG650164）。序列比对发现,EAPV分离物FJBXG-P1的CP基因序列与已报道的EAPV核苷酸序列、氨基酸序列一致性分别为81.0% ~ 97.6%和84.0% ~ 96.9%;系统发育分析结果表明,38个EAPV分离物在系统发育关系上聚为两簇（GroupⅠ和GroupⅡ）,其中GroupⅠ为AO株系,GroupⅡ为IB株系,FJBXG-P1分离物属于AO株系。福建西番莲上EPAV的检出,是该病毒在中国大陆地区发生的首次报道。 相似文献
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为了明确引起茄子斑驳紫花病的病毒种类,利用小干扰RNA(si RNA)高通量测序技术,结合生物信息学方法寻找茄子样本中的病毒序列,发现存在烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)和番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)。为了验证该结果,对待测样品中TMGMV和ToMMV的外壳蛋白(coatprotein,CP)全长基因进行RT-PCR扩增和系统进化分析,分别得到500bp的TMGMV-CP和482bp的ToMMV-CP特异性条带,与GenBank中TMGMV和ToMMV序列相似性分别达到98%～100%和100%,说明待测样品中确实存在TMGMV和ToMMV。对采自山东、河南、辽宁、河北等地的23份疑似斑驳紫花病茄子样品,分别采用特异性引物524-F/R和ToMMV-F/R进行检测。结果显示,所有样品中均含有TMGMV,20份样品中含有ToMMV,复合侵染检出率为86.96%。对茄子、番茄和辣椒幼苗的致病性检测显示,接种后茄子花表现出与田间相同的症状,茄子、番茄和辣椒的叶片表现典型的病毒侵染症状,在接种发病组织中检测到病毒ToMMV和TMGMV。结果表明,茄子斑驳紫花病样中鉴定出TMGMV和ToMMV两种病毒。 相似文献
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新疆杏品种SFB基因的克隆及实时定量表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以新疆杏27个品种花粉为材料,进行转录水平SFB基因的克隆与测序;选取冬杏、苏陆克、库尔勒托拥3个杏品种,对其进行花粉离体培养,分析SFB基因在不同时期的表达特性。结果表明,在27个品种中扩增出4种大小不同的条带,引物组合1在26个品种中扩增出条带,其中品种贝新纳尔,赛买提的片段大小为447 bp;大优佳的片段大小为446 bp,其余品种的大小为434 bp。引物组合2在品种托乎提中扩增出大小为660 bp大小的条带。序列比对显示27个品种的SFB基因为20种基因序列,与其他物种SFB基因序列比对显示20种基因序列均为新SFB基因序列,在GenBank上的登录号为:HQ148064-HQ148083;SFB基因在3个杏品种花粉离体培养不同培养时期均有表达,其表达丰度的变化趋势一致,呈先增后减的趋势,均在培养24 h时表达丰度最高,但是每个品种的表达峰值不同。 相似文献
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以我国云南和四川产的5个块菌菌株为试验材料，提取块菌DNA并对rDNA的ITS序列分析试验条件的初步研究，结果表明：运用常规CTAB法提取块菌子实体DNA．获得的DNA产量高，可以满足本试验的要求：明确了rDNAITS区域的适宜PCR扩增和克隆条件：获得4个长度为650bp、1个长度为800bp的PCR产物：将PCR产物连接到PMD18-T载体上．转4LE．coliJM109．获得了阳性克隆．供进一步序列分析用。 相似文献
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葡萄4 种病毒多重RT-PCR 检测体系的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
以复合感染4种病毒的‘红地球’（Red Globe）葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3（Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3）、沙地葡萄茎痘相关病毒（Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV）、葡萄病毒B（Grapevine virus B,GVB）和葡萄病毒A（Grapevine virus A,GVA）的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196 bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。 相似文献