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1.
大麦条纹病由麦类核腔菌(Pyrenophora graminea)引起,是一种世界性病害.为进一步探索条纹病与大麦(Hordeum vulgare)的相互作用,以大麦品种甘啤6号和Issto为实验材料,在接种麦类核腔菌(代号DWC)7和21d后提取叶片蛋白,运用2-DE和质谱分析技术研究条纹病菌侵染后叶片蛋白质组学的变化.结果显示,与对照相比,甘啤6号和Isotta差异表达量在1.4倍以上的蛋白点28个,其中在甘啤6号中表达上调的蛋白点4个,下调的6个,诱导表达的2个,抑制表达的2个;在Isotta中,表达上调的蛋白点3个,下调的4个,诱导表达的4个,抑制表达的3个.质谱鉴定分析发现,表达上调的蛋白包括二磷酸核酮糖羧化酶A(2号蛋白点)、肌动蛋白(9号蛋白点)、核糖体再循环因子(ribosome-recycling factor,RRF)(10号蛋白点)、ATP合酶γ链(11和27号蛋白点)、琥珀酸脱氢酶(辅酶q)黄素蛋白亚基(15号蛋白点)和假定蛋白(26号蛋白点):表达下调的包括过氧化物还原蛋白(4号蛋白点)、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶大亚基(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit,RuBisCo)(3、5、12、14、16和18号蛋白点)、ATP合酶CF1α亚基(13号蛋白点)、Ycf3蛋白(17号蛋白点)和α-1,4葡聚糖蛋白合酶(alpha-1,4-glucanprotein synthase,UTPG)(28号蛋白点);诱导表达蛋白包括假定蛋白(6号蛋白点)、脂氧合酶2(lipoxygenase 2,LOX2)(7号蛋白点)、捕光叶绿素a/b结合蛋白质(light harvesting chlorophyll a/b-binding protein,LHCP)(19号蛋白点)、3-磷酸甘油酸激酶(3-phosphoglycerate kinase,PGK)(20号蛋白点)、凝集素(21号蛋白点)和ATP合酶γ链(22号蛋白点);抑制表达的蛋白包括RuBisCo(1、8、24和25号蛋白点)和二磷酸核酮糖羧化酶小链(ribulose bisphosphate carboxylase small chain,RuBPCase)(23号蛋白点)等.按照其功能分类,这些差异表达蛋白点分别参与了光合作用、蛋白质生物合成、植物防卫反应、能量代谢和细胞信号转导、细胞结构和纤维素生物合成等生理功能.这些差异表达蛋白可能与大麦响应条纹菌侵染过程有关,研究结果有助于从蛋白质水平揭示不同抗性大麦品种抗条纹病的抗性机制.  相似文献   

2.
为了揭示同一烤烟品种在不同生态烟区香型风格的形成机制,以烤烟(Nicotiana tabacum)品种K326为材料,分别提取典型清香型烟区玉溪和典型浓香型烟区桂阳烟叶的叶绿体,TCA-丙酮法提取烟叶叶绿体蛋白质,利用双向电泳技术联合质谱技术对清香型和浓香型烟叶叶绿体的差异蛋白质组进行分析。结果表明,在分子量为14.3~97.2 kD之间,桂阳可检测到的蛋白质点数为1 270个,其中上升表达的蛋白质点为41个,特异表达的蛋白质点为10个;玉溪可检测到的蛋白质点数为892个,其中上升表达的蛋白质点为48个,特异表达的蛋白质点为4个,两者共同表达的蛋白质点为716个。对其中特异表达的14个蛋白质点进行MALDI-TOF-TOF质谱分析和生物信息学的综合比对,桂阳得到6个同源匹配蛋白质,特异表达的蛋白为ATP合酶的β亚基、核酮糖-l,5-二磷酸羧化酶/加氧酶和NADPH脱氢酶;玉溪得到1个同源匹配蛋白质,特异表达的蛋白为1,6-二磷酸果糖醛缩酶。其中与光合作用密切相关的蛋白质在湖南桂阳特异性表达;与糖代谢密切相关的蛋白质在云南玉溪特异性表达。本研究首次从叶绿体蛋白质组水平对烟叶香型风格形成的机理进行了探讨,为烤烟的育种和生产提供一定的理论依据。  相似文献   

3.
小麦(Triticum aestivum)穗突变体SDA1是由隐性多效性单基因小麦穗发育异常基因1(Triticum aestivum spike development atrophy 1,TaSDA1)控制的小麦突变体,表现为穗部发育萎缩不结实、叶片变窄、植株变矮等.为进一步了解TaSDA1基因发生突变的机制,本研究以小麦穗突变体SDA1与野生型为材料,进行主要农艺性状如抽穗期、株高、旗叶长宽、穗长、小穗数调查,并对小麦抽穗期叶片总蛋白进行双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE),对差异蛋白质点进行质谱分析和qRT-PCR验证.结果表明,SDA1的主要农艺性状存在显著性差异;利用PDQuest8.0.1软件分析得到27个差异蛋白,有23个质谱检测成功,其中有6个蛋白在SDA1中缺失,17个蛋白在SDA1中表达下调;qRT-PCR检测结果与差异蛋白质谱检测结果一致.在SDA1中,23个质谱成功的差异蛋白主要包括5个光合作用中核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)全酶的大小亚基,4个(SSP7101,SSP7110,SSP7112和SSP8418)表达下调,1个缺失(SSP213);参与能量代谢的叶绿体中的甘油醛-3-磷酸脱氢酶A(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase A,GAPA,SSP8000)表达下调;具有抗氧化能力的过氧化物氧化还原酶(peroxiredoxin,Prx,SSP7320)表达下调;1个RNA结合蛋白(SSP1309)表达下调,导致2个翻译延伸因子(translation elongation factor,eEF-Tu,SSP4614和SSP4802)表达下调,最终导致蛋白合成受阻;参与抗逆境胁迫的蛋白(SSP3738和SSP5209)表达下调,SSP3719蛋白缺失.qRT-PCR验证结果表明,核酮糖1,5二磷酸羧化酶大亚基蛋白(SSP7101)、叶绿体PtrTox结合蛋白(SSP7303)、翻译延伸因子(SSP4614)、磷酸丙糖异构酶(SSP5209)在转录水平与蛋白表达结果一致.SDA1变异表型可能与旗叶的光合作用能力下降、能量代谢紊乱、抗氧胁迫能力下降、抗胁迫能力下降、mRNA编辑过程以及蛋白合成过程受阻有关.本研究结果表明,TaSDA1基因具有多效复杂的调控功能.穗部和叶片的发育状况决定了小麦的产量,阐明SDA1的遗传机理将为小麦穗部和叶片性状的遗传改良奠定理论基础.  相似文献   

4.
“神舟3号”飞船搭载草地早熟禾(Poa pratensisL.)‘Nassau’干种子,地面种植后筛选出突变株系PM1、PM2和PM3,分别测定其光合作用光响应曲线、CO2响应曲线及叶绿素含量。结果表明,PM1和PM3株系与对照相比,叶绿素a与b绝对含量降低,且光合能力有所降低。PM2株系比对照叶绿素含量显著增加,且叶绿素a/b比值比对照明显降低,但其表观量子效率较CK低,光合能力也有所降低;3个突变株系的近CO2饱和点均比CK高,CO2补偿点差异不大,羧化效率PM2  相似文献   

5.
抗真菌γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因导入苹果获得转基因植株   总被引:3,自引:0,他引:3  
以“皇家嘎啦”(RoyalGala)苹果(Malus domestica Borkh)为试材,在绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶的激活酶(Rubisco-activase)启动子(RCAP)驱动下,将抗真菌γ-硫堇蛋白(γ-thionin)Rs-afp1基因和uidA(gus)基因导入白化茎段外植体,获得了nptⅡ抗性植株.转化体经PCR和Southern  相似文献   

6.
“神舟3号”飞船搭载草地早熟禾‘Nassu’干种子,地面种植后筛选出突变株系PM1、PM2和PM3。观察其叶片表面结构和叶肉细胞超微结构,结果表明:3个突变株系的叶片气孔密度增大,气孔面积减少,单位视野中气孔所占面积比则变化不大;叶肉细胞中叶绿体体积增大,形状变圆并移向细胞中央;PM3株系白绿相间叶片的白色部分,其叶肉细胞中叶绿体多数正在或已经消解,结构不完整。在各突变株系中淀粉粒数量却有不同程度的增加。  相似文献   

7.
由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Ktihn)引起的纹枯病是玉米产业一个突出的世界性难题,为探讨玉米纹枯病发病后的蛋白表达机制,本研究以高耐纹枯病玉米(Zea mays)自交系R15和高感自交系掖478为材料,分时段(0、12、24、36和48 h)提取接菌后叶片总蛋白,利用IEF/SDS-PAGE凝胶电泳技术,对抗、感材料的总蛋白表达差异结果进行了比较分析.结果表明:在蛋白表达谱600~800个清晰蛋白点中,部分蛋白质(多肽)的表达量在两自交系中存在着一定的差异;对其中15个差异表达蛋白进行了基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)分析鉴定,并且结合数据库和生物信息学软件分析,确定了莽草酸激酶Ⅰ、铁氧-硫氧蛋白还原酶催化亚基(FTR-C)等蛋白增量表达,而磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基、光合系统Ⅰ反应中心N亚基等蛋白减量表达,其中增量表达的蛋白能诱导抗病系统的启动,而减量表达的蛋白会抑制物质和能量代谢途径,最终导致植株感病死亡.  相似文献   

8.
水稻植株光合作用能力的变化与其抗白背飞虱的关系   总被引:6,自引:0,他引:6  
稻株受白背飞虱为害后 ,感虫品种 (TN1和汕优 63)光合作用速率和叶绿素含量下降率比抗虫品种 (N2 2 )明显 ;汕优 63和N2 2品种的二磷酸核酮糖 (RuBP)羧化酶的含量和活力均增加 ,TN1品种在为害 5d时RuBP羧化酶的含量和活力明显增加 ,而在为害 1 0d时显著下降 ;感虫品种受害后叶片光合产物滞留比抗虫品种多 ,即感虫品种光合产物向叶鞘、茎、分蘖和根等部位的转移量少于抗虫品种。  相似文献   

9.
抗真菌γ—硫堇蛋白Rs—afp1基因导入苹果获得转基因植株   总被引:3,自引:0,他引:3  
以“皇家嘎啦”(Royal Gala)苹果(Malus domestica Borkh)为试材,在绿色组织特异表达的菠菜核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶的激活酶(Rubisco-activase)启动子(RCAP)驱动下,将抗真菌γ-硫堇蛋白(γ-thionin)Rs-afp1基因和uidA(gus)基因导入白化茎段外植体,获得了nptⅡ抗性植株。转化体经PCR和Southern blotting杂交检测,证实了γ-硫堇蛋白Rs-afp1基因和gus基因已经整合到苹果的染色体组上。gus染色证实了RCAD启动子在苹果组织中的特异性表达。转基因植株已移栽于大田,进行农业性状鉴定。  相似文献   

10.
为探究西兰花叶中生物活性成分的具体含量,以西兰花叶为原材料,对西兰花叶中萝卜硫素、总酚、总黄酮、总蛋白质的含量和组成进行了测定与分析。结果表明,西兰花废弃叶中萝卜硫素含量为92.50 μg·g-1 DW,总酚含量为3.15 mg·g-1 DW,总黄酮含量为2.48 mg·g-1 DW,总蛋白质含量为89.38 mg·g-1 DW,蛋白质组成中核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)所占比例最大。本研究明确了西兰花叶片中4种生物活性成分的具体含量,为进一步开发利用西兰花废弃物提供了一定的数据支持。  相似文献   

11.
The present study is focused on the possible mediatory role of salicylic acid (SA) under cadmium (Cd+2) toxicity. Cadmium treatments resulted in the inhibition of root dry biomass, root elongation and increased Cd accumulation in roots. Pretreatment of seeds with SA (500 μM) for 20 hrs resulted in protection against Cd, increased root dry biomass, root elongation and minimal accumulation of cadmium. Cadmium chloride (CdCl2; 0.0, 100, 400 and 1000 μM) produced a significant inhibition in chlorophyll, photosynthetic efficiency [carbon dioxide (14CO2)-fixation], relative water content (RWC) and abscisic acid (ABA) content. Pretreatment of seeds with SA alleviated the Cd negative effect on these parameters. A drop in the activities of carboxylating enzymes, phosphoenol pyruvate carboxylase (PEPC, EC 4.1.1.31), and ribulose1,5-bisphosphate carboxylase (RuBPC, EC 4.1.1.39) were observed in Cd treated plants. Pretreatment with SA ameliorated the inhibitory effect of Cd on the studied enzymatic activities. Cadmium applied to salicylic acid free plants increased the level of stress metabolites, malondialdehide (MDA), hydrogen peroxides, and free proline content. Salicylic acid pretreatment decreased the toxic effect level of cadmium manifested by lower lipid peroxidation, lesser production of H2O2 and reduction in free proline content. The ultrastructural investigation of the root cells of wheat exposed to different concentrations of Cd for 15 days was carried out. The results indicated that Cd induced several obvious ultrastructural changes such as increased vacuolation, condensed cytoplasm with increased density of the matrix, reduction of mitochondrial cristae, severe plasmolysis, highly condensed nuclear chromatin and increment of disintegrated organelles. Electron dense granules appeared between the cell wall and plasmalemma. In vacuoles, electron dense granules encircled by the membrane were aggregated and formed into larger precipitates, which increase in number and volume as a consequence of excessive Cd exposure. An important issue arising from this study was how the short-term treatment with SA affected several physiological processes, such as plant growth, photosynthesis, and antioxidant defense system. We assume that the beneficial effect of SA during an earlier growth period could be related to avoidance of cumulative damage upon exposure to cadmium. One of the important roles of SA in inducing resistance to various environmental stresses is manifested by its ability to express genes that code for pathogenesis-related proteins or defense-related enzymes. Also, SA could form a complex with Cd that may provide Cd tolerance.  相似文献   

12.
极低频高压脉冲电场提高陈年棉种活力的参数优化   总被引:1,自引:1,他引:0  
为研究极低频脉冲电场对陈年棉种活力的影响,该文利用高压脉冲电源和弧形电极-平板组成的电场系统在极间距离为50 mm条件下,以16 k V、10 Hz为中心点,利用Design-expert软件设计正交试验,高压脉冲电场处理棉种时间为40 s。并利用响应面分析法,对发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数等4个指标进行参数优化,得出最优处理电压为16.25 k V,最优频率为10.90 Hz。在此基础上,对优化条件进行了试验验证。结果表明:陈年棉种在脉冲电压16.25 k V、脉冲频率10.90 Hz处理条件下,与对照相比,发芽势提高了44.2%,发芽率提高了56.8%,发芽指数提高了64.3%,活力指数提高了81.8%,各指标都达到极显著差异(P0.01)。陈年棉种的电场生物学效应对电场电压和频率都具有选择性,在电压为16.25 k V、频率为10.90 Hz的脉冲电场作用下,陈年棉种的电场生物学效应最明显,研究结果为后续作物种子高压电场处理的参数优化提供参考。  相似文献   

13.
《Journal of plant nutrition》2013,36(12):2453-2468
Abstract

The top three leaves play important roles in biomass production and grain yield of rice (Oryza sativa L.) crop since the three leaves not only assimilate majority of carbon for grain filling during ripening phase, but also provide large proportion of remobilized‐nitrogen (N) for grain development during their senescence. The objectives of this study were to (a) compare senescence of the top three leaves and (b) compare the changes in N, chlorophyll, and ribulose‐1,5‐bisphosphate carboxylase/oxygenase (Rubisco) contents of the top three leaves after their full expansion in field‐grown rice plants. When the basis of comparison among the top three leaves was plant age in terms of days after transplanting (DAT), senescence generally started earliest in ?3rd leaf, intermediate in ?2nd leaf, and latest in flag leaf. If the basis of comparison among the top three leaves was leaf age in terms of days after full leaf expansion (DAFE), it was not clear which leaf senesced earlier. Senescence rate was generally greatest in flag leaf, intermediate in ?2nd leaf, and smallest in ?3rd leaf. Ribulose‐1,5‐bisphosphate carboxylase/oxygenase content declined earlier, and at a faster rate than N and chlorophyll contents during the senescence of all top three leaves. Correlation analysis indicated a close relationship between N and chlorophyll contents. Ribulose‐1,5‐bisphosphate carboxylase/oxygenase content correlated with N content better than with chlorophyll content. The suitability of N, chlorophyll, and Rubisco contents for quantifying the leaf senescence of field‐grown rice plants is discussed.  相似文献   

14.
以棉种‘新陆中54号’为材料,用3种种衣剂(棉1、棉2、棉3)包衣棉种后播种于塑料营养盒内,25℃恒温培养,分别在第4天(棉种长出胚根)和第7天(棉株幼苗)均进行5、10、15、20℃共4个低温处理,与各低温下未包衣种子(对照,CK)进行比较,低温处理24h后,观察各处理棉花胚根、幼苗外部形态和超微结构的变化,以期通过模拟新疆早春"倒春寒"发生特点,考察种衣剂对提高棉花耐寒性的功效。结果表明:20℃下种衣剂处理与CK无差异,种子萌发正常,发芽率在92.24%~95.51%,3种种衣剂包衣处理胚根生长量为3.66~3.81cm,幼苗叶色浓绿,茎杆直立,胚根细胞中线粒体结构完整,叶肉细胞中线粒体、叶绿体结构规则;15℃低温下种衣剂处理棉种发芽率较CK提高4.45~6.98个百分点,胚根生长速度下降,但包衣处理生长量较CK提高25.27%~36.05%,幼苗叶色浓绿,棉苗直立,胚根细胞中线粒体内脊清晰,叶肉细胞中叶绿体、线粒体结构清晰,细胞器结构和数量明显优于CK;10℃低温下棉种发芽受到抑制,但包衣处理较CK发芽率提高0.73~4.25个百分点,19.15%~42.55%的幼苗叶片下垂萎蔫,保持正常温度后种衣剂处理棉苗很快恢复到正常形态,胚根细胞中线粒体、内质网数目多于CK,叶肉细胞中叶绿体轮廓清晰,内含物较少;5℃低温下各处理棉种发芽率均低于50.00%,CK幼苗叶色脱水失绿,萎蔫下垂,萎蔫率达74.47%,叶绿体膨胀成圆球形、轮廓模糊,包衣处理幼苗萎蔫率在60.42%~67.45%,叶肉细胞中叶绿体结构完整,呈椭球型,线粒体结构较规则、内含物浑浊。研究表明种衣剂能促进低温处理下种子萌发、提高发芽率和胚根生长速度、保护棉苗外部形态和细胞超微结构稳定,维持正常生长,增强幼苗抵御低温的危害能力。  相似文献   

15.
刘杰  吴国瑞  张金伟  孙周平 《核农学报》2021,35(7):1687-1695
为解决保健功能型类中药渣带来的生态污染问题,探讨该类药渣作为栽培基质资源化利用的可行性,本试验将中药渣与牛粪分别按5∶0(T1)、4∶1(T2)、3∶2(T3)、2∶3(T4)的体积比配制成4种复合基质,并以市售成品椰糠基质作为对照(CK),采用基质袋培的方式种植秋冬茬番茄,分析中药渣复合基质对番茄的影响,并采用主成分分析和聚类分析对各基质配方进行评价。结果表明,以测定的番茄各指标作主成分分析时,各基质配方的优劣顺序为T2>T1>CK>T3>T4,此外,当综合基质及番茄指标作为归类依据时,这5个配方可以归为3类:第1类CK(良好型)、第2类T1、T2(改良型)、第3类T3、T4(中等型)。综合来看,T2的每株果实产量与CK相比无显著性差异,可达3 435 g,保证了果实产量,且其果实品质包括番茄红素、总黄酮、维生素C(Vc)、可溶性蛋白含量均高于CK,分别能提高281%、8%、98%、54%,改善了果实的保健功效,因此,建议选用药渣与牛粪体积比为4∶1的基质复合配方,用于低成本有机基质配方的开发以及设施番茄高品质栽培。本研究结果不仅可以实现大量保健功能型类中药渣的基质化再利用,解决生态污染问题,还可以为我国设施蔬菜基质袋化高品质栽培提供技术指导。  相似文献   

16.
In this study, we measured the effect of ginsenosides on glucose uptake using the Caco-2 cell system. At submicromolar concentrations, these compounds exhibited marked effects on the rate of glucose transport across the differentiated Caco-2 cell monolayer. Compound K (CK), the main intestinal bacterial metabolite of the protopanaxadiol ginsenosides, significantly enhanced the steady-state glucose transport rate to about 50% of the control sample rate (from 1.54 +/- 0.09 to 2.25 +/- 0.15 nmol/min). Conversely, the protopanaxatriol ginsenoside Rg1 inhibited glucose transport to about 70% of the original rate (from 1.54 +/- 0.09 to 1.02 +/- 0.05 nmol/min). Consistent with the effect on glucose uptake rate, CK and Rg1 conferred a significant and paralleled alteration on both the protein and mRNA expression levels of the Na+/glucose cotransporter 1 (SGLT1) gene. Unlike SGLT1, there is no significant alteration on the protein or mRNA levels of GLUTs in CK- or Rg1-treated cells. Taken together, our results demonstrate that ginsenosides CK and Rg1 elicited potent enhancing and suppressing effects, respectively, on glucose uptake across human intestinal Caco-2 monolayer through modulation of SGLT1 expression.  相似文献   

17.
为探究不同基因型玉米品种对砷胁迫的响应差异性,本研究采用营养液培养试验,研究了砷胁迫下20个玉米品种的发芽势、发芽率、根长、株高、干重、地上部及根部砷含量、抗氧化酶活性、抗氧化非酶物质含量及基因表达等指标变化,评价了不同基因型品种的耐砷性。结果表明,与对照(CK)相比,砷处理条件下,玉米各测定指标表现出明显的差异性,其中发芽势、发芽率、根长、株高、干重的处理/CK比率范围分别是0.58~1.18、0.61~1.18、0.49~1.04、0.72~1.12、0.55~2.83,各品种玉米的砷转运系数为0.02~0.07。利用12个指标进行主成分分析和聚类分析,筛选出2个砷耐受型品种,5个砷敏感型品种,其中康农玉999为最耐受型品种,三北89为最敏感型品种。进一步对康农玉999和三北89进行抗氧化系统分析,发现砷处理下康农玉999的过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性均略低于CK,且超氧化物歧化酶(SOD)活性下降幅度较大,相比于CK降低79%,而丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、抗坏血酸(AsA)含量均高于CK;三北89的SOD、CAT、POD活性和GSH、AsA含量均高于CK,MDA含量相比于CK降低50%。对2个品种进行基因表达分析,结果显示,与康农玉999相比,检测出的5个与植物抗砷性相关转录本中,三北89有4个抗砷相关转录本表达量明显上升,只有1个ArsB相关转录本表达量略降低。综上可知,砷胁迫下不同基因型玉米种子的生长和生理参数以及相关基因表达均表现出明显的差异性。本研究结果为砷污染土壤进行玉米的农业生产种植提供了理论依据。  相似文献   

18.
小麦Rubisco抗体的制备和旗叶中Rubisco含量的ELISA测定   总被引:2,自引:0,他引:2  
Rubisco(核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶)为光合生物中的关键性酶。以小麦(Triticum aestivum L. cv.)叶片为材料,在(NH4)2SO4盐析和DEAE-Sepharose F F层析纯化的基础上添加了Sephacryl S 300分子筛,进一步纯化了Rubisco。 将纯化的Rubisco免疫大白兔制备了Rubisco的多克隆抗体, 经Western blot检测,Rubisco抗体与Rubisco呈免疫反应特异性。并运用Rubisco抗体,采用ELISA方法直接测定小麦旗叶生长发育过程中Rubisco含量的变化,结果表明:不同生长阶段,旗叶的Rubisco含量与光合速率大小呈正相关。该方法比免疫沉淀法更为快捷、准确。  相似文献   

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