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1.
利用屠宰场采集的绵羊卵巢作为试验材料,研究了不同卵母细胞采集方法(卵泡冲洗法、剖切法、注射器抽吸法和真空泵抽吸法)、成熟液中添加不同来源激素(BIONICHE或宁波激素厂生产 FSH/LH)和血清(发情绵羊血清或胎牛血清),以及mSOF和mCR胚胎培养体系对绵羊体外受精各环节效率的影响。结果表明,卵泡冲洗法获得A、B两级卵母细胞比例为77.1%,显著高于其他3种方法(P＜0.05),添加BIONICHE FSH/LH+ESS成熟液中,卵母细胞成熟率显著高于其他添加方式(P＜0.05),mSOF和mCR胚胎培养体系在卵裂率上无显著差异(P＞0.05),但mSOF组中囊胚率和孵化率均显著高于mCR组(P＜0.05)。综上所述,本研究中卵泡冲洗法更适合绵羊卵母细胞采集,成熟液中添加BIONICHE FSH/LH和ESS可显著促进绵羊卵母细胞成熟;与mCR培养体系相比,mSOF培养体系更适合绵羊体外受精胚胎的发育。 相似文献
2.
研究采用刺破法、切剖法和抽吸法采集猪卵母细胞,比较3种不同方法对卵母细胞在体外成熟及受精后发育的影响.结果表明:刺破法和切剖法所得A、B级卵母细胞数显著高于抽吸法(P<0.05);三种方法回收的A、B级卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),但三种方法荻取的A级卵母细胞成熟率均显著高于B级卵母细胞(P<0.05);刺破法得到的成熟卵母细胞受精后的卵裂率显著高于抽吸法(P<0.05),与切剖法相比差异不显著(P>0.05),但在卵裂胚胎中胚胎各发育阶段所占比例相同(P>0.05). 相似文献
3.
本试验利用抽吸法和剖切法两种采集方法采集猪卵巢卵母细胞,对获得可用卵丘卵母细胞数和卵丘完整程度的影响进行比较研究,并分析在卵巢收集时不同的保存温度、运输时间对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：剖切法采集细胞数目显著高于抽吸法（P〈0．01）;A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法（P〈0．05）;抽吸法所采集的c级卵母细胞显著高于剖切法（P〈0．05）;剖切法中卵母细胞卵丘完整率高于抽吸法（P〈O．05）;离体卵巢保存的最佳温度为36℃-38℃;其保存时间为1～1．5h时成熟率57．6％与2—2．5h时成熟率52．8％相比无显著差异（P〉O．05）;保存时间超过6h时卵母细胞的成熟率显著下降。 相似文献
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5.
不同收集方法对猪卵母细胞体外成熟培养的影响 总被引：14，自引：1，他引：13
本实验就猪卵母细胞的三种采集方法：抽吸法、剖解法和机械破碎法进行了对比研究。结果表明：(1)机械破碎法所采集细胞数目显著高于剖解法(P＜0．05)，剖解法显著高于抽吸法(P＜0．05)；而所用时间则与此相反(P＜0．05)。(2)A级卵母细胞的比例在剖解法中显著高于抽吸法(P＜0．05)，同时抽吸法也显著高于机械破碎法(P＜0．05)。机械破碎法采集的B级细胞比例显著高于其余两法(P＜0．05)；抽吸法所采集的C级细胞也显著高于其余两法(P＜0．05)。(3)剖解法中卵丘扩散率要显著高于其它两法(P＜0．05)；而机械破碎法中第一极体排出率要显著低于另两法(P＜0．05)。 相似文献
6.
本研究旨在开发出一种对COCs损伤小且采集效率和卵母细胞成熟率高的卵母细胞采集方法.从屠宰场采集来的卵巢运回实验室后随机分为3组,分别用抽吸法、解剖法和刀切过滤法3种方法采集COCs,然后进行体外成熟培养,通过对COCs采集效率、COCs完整性及卵母细胞体外成熟率的比较,研究解剖法、刀切过滤法和抽吸法3种采集方法对猪卵母细胞的采集效率和成熟率的影响.结果表明:每个卵巢采集COCs个数,刀切过滤法显著高于解剖法和抽吸法(P＜0.05),而解剖法仅为1.55个,显著低于抽吸法(P＜0.05);采集效率抽吸法最佳,采集和挑选单个COCs的时间显著低于解剖法和刀切过滤法(P＜0.05),刀切过滤法次之,但显著低于解剖法(P＜0.05);A、B级COCs比例,解剖法高达99.23%,显著高于其他2种方法(P＜0.05),刀切过滤法与抽吸法差异不显著(P＞0.05);卵母细胞的成熟率,解剖法和刀切过滤法都达到80%,二者间差异不显著(P＞0.05),但显著高于抽吸法(P＜0.05);100个成熟卵母细胞所需的卵巢数量,刀切过滤法最少,仅为17.4个,而解剖法和抽吸法分别高达80.6和90.3个;需要的总采集时间(采集和挑选的时间),刀切过滤法最低,仅为126.6 min,而解剖法最高,为758.9min.综上所述,与抽吸法和解剖法相比,刀切过滤法是一种高效、快速的卵母细胞采集方法. 相似文献
7.
旨在优化奶牛的手工体细胞克隆技术方案,本试验以牛卵母细胞为材料研究了2个半卵不同粘合交流电压、重构胚不同激活方法和不同的COCs采集方法对奶牛手工体细胞克隆胚发育的影响.结果表明,(1)降低2个半卵粘合交流电压能显著提高其随后的卵母细胞融合率(P<0.05);(2)A23187+6-DMAP组激活的无透明带重构胚分裂率和囊胚率显著高于Ionomycin+6-DMAP组(P<0.05);(3)真空蠕动泵抽吸法和刀片切割法获得的卵母细胞总数显著高于注射器抽吸法(P<0.05),而切割法获得的1和2级卵母细胞百分数显著高于其它2种方法(P<0.05).因此,采用真空蠕动泵抽吸法获得COCs,用较低的粘合交流电压进行半卵粘合,采用A23187+6-DMAP激活法进行融合后的激活能显著提高奶牛手工体细胞克隆效率. 相似文献
8.
不同采卵方法及卵巢所处性周期阶段对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 总被引：2，自引：1，他引：2
本试验主要从采集方法和性周期阶段2方面对绵羊卵母细胞体外成熟的影响进行了探讨。结果表明：不同采卵方法的采卵效果存在差异，卵裂率切割法显著高于抽吸法(27.9%，49.5%；P<0.05)；A、B级卵母细胞成熟率极显著高于C级(75.3%，64.4%，29.1%，P<0.01)，卵裂率A、B级均显著高于C级(42.5%，35.8%，16.0%，P<0.05)；从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别为66.7%、62.9%；38.2%、34.4%，没有显著差异 (P>0.05)。 相似文献
9.
本文研究了淘汰奶牛卵巢采集方法、卵丘细胞和颗粒细胞对卵母细胞体外受精后发育的影响.结果表明奶牛屠宰后取其卵巢,用剖解法可比抽吸法得到更多的可用卵母细胞(8.5:6.2枚/卵巢,P＜0.05).经成熟培养和体外受精后,无卵丘细胞包围的裸露卵母细胞卵裂率为40.2%,但仅28.2%停留在8～16细胞期,最高发育阶段为16细胞期;而有3层以上卵丘细胞紧密包围的卵丘-卵母细胞复合体,其卵裂率(60.2%:53.2%,P＜0.05)和囊胚发育率(31.5%:19.6%,P＜0.05)均高于卵丘细胞包被不全的卵母细胞.在培养液中添加颗粒细胞,提高囊胚细胞数(96.2±5.2:70.4±4.6,P＜0.05),但没有促进牛受精卵的卵裂率. 相似文献
10.
绵羊不同直径卵泡卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的比较 总被引：1，自引：1，他引：0
比较绵羊不同直径卵泡卵子成熟和孤雌胚胎发育的差异性,并对卵母细胞的采集方法进行了改进以获得较小直径卵泡卵子作研究。结果显示:改进的切剖法获得的平均卵母细胞数极显著高于切剖法(7.72 vs 4.93,P<0.01);分组的卵母细胞成熟率(84.93%,67.64%vs38.37%)差异极显著(P<0.01);卵母细胞被孤雌激活后,中等直径组与较大直径组卵裂率(84.92%vs 72.70%)差异显著(P<0.05),桑葚胚率(41.44%vs 35.09%)、囊胚率(21.28%vs 16.68%)差异不显著(P>0.05),较小直径组卵裂率(54.41%)、桑葚胚率(20.11%)、囊胚率(3.7%)差异极显著(P<0.01)。 相似文献
11.
季节和方法对牛、绵羊卵母细胞回收及体外成熟的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
利用屠宰牛、绵羊卵巢,研究了季节和方法对卵母细胞回收及体外成熟的影响。结果表明,季节对牛卵母细胞的回收和利用没有影响;抽吸法是合适的牛卵巢卵母细胞采集方法;季节对绵羊卵母细胞的回收和利用有显著影响,绵羊在非繁殖季节卵母细胞的回收率和可用率显著高于繁殖季节（P<0.05）,而体外成熟率极显著低于繁殖季节（P<0.01）;切割法回收的绵羊卵母细胞可用率（P<0.01）和体外成熟率（P<0.05）显著高于抽吸法,适合绵羊卵母细胞的回收。 相似文献
12.
探讨了卵泡液、受精时间和季节对绵羊卵母细胞体外培养效果的影响。从屠宰场采集羊卵巢,抽取卵巢表面2mm-6mm的卵泡卵母细胞,进行体外成熟培养;卵母细胞成熟后,与处理后的精子共同培养进行受精。结果表明,在卵母细胞成熟培养液中添加绵羊卵泡液（SFF）组的卵裂率和囊胚发育率均优于添加同等浓度的牛卵泡液（BFF）组;受精22、18、12h组的卵裂率分别为64.85%、54.39%、48.72%,受精22h和18h组间差异显著（P〈0.05）,受精22h组和12h组间差异极显著（P〈0.01）。秋季绵羊体外受精的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差异显著（P〈0.05）,但秋季与春季相比差异不显著（P〉0.05）。因此,进行绵羊卵母细胞体外成熟培养时,培养液中添加SFF;受精时,精卵共培养时间为22h的效果较好。在绵羊的繁殖季节秋季进行体外受精较春季和夏季的结果好。 相似文献
13.
本试验主要比较了离子霉素、电脉冲两种方法激活牛、羊体外成熟卵母细胞的效率。两种激活方法中。牛胚胎卵裂率无显著差异（90．61％对94．40％，P〉0．05），而离子霉素激活胚胎的囊胚发育率极显著高于电激活方法（12．3％对2．4％，P〈0．01）。两种方法对羊胚胎的研究中，羊胚胎卵裂率无显著差异（72．4％对77．4％，P〉0．05）。但是离子霉素激活胚胎的囊胚发育率显著高于电激活方法（3．67％对10．40％，P〈0．05）。本试验中还比较了用化学激活法（离子霉素）激活牛体外成熟卵母细胞后，用SOFaa体系培养，换液与不换液对孤雌激活胚胎体外发育的影响。结果表明：在第4天不换液的胚胎卵裂率和囊胚率极显著高于换液的胚胎（11．64％对3．49％。P〈0．01）。 相似文献
14.
为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。 相似文献
15.
为探究睾丸注射法制备转基因动物的可能性,将携带有徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体γ(PPARγ)和绿色荧光蛋白标签的重组载体经脂质体包裹后,将线性化的重组质粒pEGFP-PPARγ通过随机打点注射入性成熟的湖羊睾丸内,采用常规PCR、基因组DNA点杂交及蛋白免疫印迹技术检测外源PPARγ基因在湖羊体内稳定整合的能力,并检测F1代阳性个体屠宰性能、肌内脂肪含量、器官重量及肉品质。F1代羔羊检测转基因羊阳性率为13.7%,证实外源基因在转基因后代体内成功表达。阳性个体胴体重和屠宰率极显著低于对照组个体(P<0.01),阳性个体骨肉比极显著高于对照组个体(P<0.01);阳性个体背最长肌脂肪含量显著高于对照组个体(P<0.05),腰肌内脂肪含量与股二头肌内脂肪含量差异不显著(P>0.05);阳性个体肺脏和小肠极显著大于对照组个体(P<0.01),阳性个体脾脏显著大于对照组个体(P<0.05),阳性个体心脏和肺脏显著小于对照组个体(P<0.05),肝脏、肾脏、胃、睾丸、皮、头之间差异不显著(P>0.05);阳性个体股二头肌嫩度显著低于对照组个体(P<0.05),pH、肉色、失水率之间差异不显著(P>0.05)。 相似文献
16.
试验从屠宰场收集了 4 8头青年黄牛、34头青年水牛的卵巢共 16 4个 ,共回收可用卵母细胞 86 4枚。水牛平均每个卵巢可回收 3.2 2枚可用卵母细胞 ,相当于黄牛 (6 .72枚 )的一半。试验结果表明 :水牛卵巢生长卵泡少 ,卵母细胞产量少、质量差 ;3种采集黄牛卵泡卵母细胞的方法 ,用抽吸加切割法平均从每个卵巢回收的可用卵数 (7.71枚 )都极显著高于抽吸法 (6 .19枚 )和切割法 (6 .4 4枚 ) (P <0 .0 1) ,但是该法手续繁杂 ,适于一次且只能收集少量卵巢时使用 ;在黄牛和水牛卵母细胞成熟培养液中用 0 .3%PVP代替 10 %FBS ,牛卵母细胞的体外成熟率无显著差异 (P >0 .0 5 )。 相似文献
17.
不同季节水牛卵母细胞体外受精效果的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
利用屠宰场收集水牛卵巢回收卵母细胞，比较了不同季节的水牛卵母细胞体外受精的效果。试验连续进行了2年，按水牛发情的规律，1年的试验数据分3个阶段统计。结果表明，水牛发情旺季（8~11月）平均每个水牛卵巢回收可用卵母细胞3.66枚，明显高于发情淡季的4~7月和12月~次年3月两个季节（分别为2.76和3.07枚，P＜0.01）；而在不同季节回收的水牛卵母细胞体外受精后分裂率和囊胚率差异不显著（P＞0.05）。 相似文献
18.
试验通过开展绵羊低温保存精液和冷冻精液制备精子对体外受精效果影响的研究,旨在探讨制备绵羊IVF优质精液的新方法。结果表明:利用低温保存精液和冷冻精液,分别采用Percoll离心法和上游法制备精子进行体外受精,低温保存精液上游法的卵裂率78.6%显著高于低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法和60.2%、62.3%,(P<0.05),极显著高于冷冻精液上游法21.1%,P<0.01;低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法组间无显著(P>0.05)差异,但均显著(P<0.05)高于冷冻精液上游法。低温保存绵羊精液可用于制备IVF精子,上游法优于Percoll离心法,可显著提高体外受精效果。 相似文献
19.
【目的】研究miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响。【方法】采用Percoll密度梯度离心法获得纯化绵羊精子，将绵羊卵丘-卵母细胞复合体（COCs）在培养箱中培养16~18 h获得成熟卵母细胞，从1月龄纯种萨福克绵羊耳组织分离成纤维细胞，通过实时荧光定量PCR比较绵羊精子、成熟卵母细胞与成纤维细胞中miR-449b的相对表达量；给成熟卵母细胞分别显微注射0.9 %生理盐水（Con组）、miR-449b模拟物对照（NC mimic）与miR-449b模拟物（miR-449b mimic），注射后进行孤雌激活，分别于激活的第2、7天统计胚胎卵裂率与囊胚率；将成熟卵母细胞进行体外受精（IVF），收集IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎，采用免疫荧光法比较组蛋白H3K9me3的变化。【结果】miR-449b在精子中的表达显著高于成熟卵母细胞和成纤维细胞（P＜0.05）；与Con组相比，miR-449b mimic和NC mimic组胚胎的卵裂率均显著降低（P＜0.05），NC mimic组胚胎卵裂率显著低于miR-449b mimic组（P＜0，05）；miR-449b mimic组胚胎囊胚率提高，但差异不显著（P＞0.05）；IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎均表达组蛋白H3K9me3，且都在细胞核表达。与Con组相比，NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著增加（P＜0.05），miR-449b mimic组显著降低（P＜0.05）；NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著高于miR-449b mimic组（P<0.05），miR-449b mimic与IVF组无显著差异（P＞0.05）。【结论】miR-449b能显著提高绵羊早期胚胎的发育率，且降低早期胚胎中H3K9me3的表达水平。 相似文献