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经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品. 纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%. 经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35 kD. 该酶在pH 6.0~11.0,温度低于25 ℃稳定,当温度上升到55 ℃时活性迅速下降. 该酶在pH 10和60 ℃时达到最高活性. 进一步研究得知: Cu2+离子对该酶有明显促进作用,而Mn2+却使酶几乎失活. 以酪蛋白为底物,在pH 10.0、37 ℃时测得米氏常数Km值为1.33%. 相似文献
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【目的】从猪血清7型胸膜肺炎放线杆菌中提取纯化尿素酶,并对其生物特性和理化特性进行研究。【方法】超声破碎放线杆菌粗提尿素酶,再采用硫酸铵盐析和Sephadex G-200凝胶过滤层析对该酶进行纯化,分析其活性及理化特性。【结果】最适于猪胸膜肺炎放线杆菌尿素酶保持活性的pH为8.5,温度为45℃。在该条件下其比酶活约为96.253 U/mg;SDS-PAGE电泳显示,胸膜肺炎放线杆菌尿毒酶含分子质量为11,25和60 ku的亚单位。【结论】与传统方法相比,超声破壁和Sephadex G-200凝胶过滤层析纯化法简单快速,重复性好,测定尿素酶的特性稳定,能满足实验室检测的要求。 相似文献
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鸭肝蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究 总被引:1,自引:1,他引:1
经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品.纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%.经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35kD.该酶在pH6.0~11.0,温度低于25℃稳定,当温度上升到55℃时活性迅速下降.该酶在pH10和60℃时达到最高活性.进一步研究得知:Cu^2+离子对该酶有明显促进作用,而Mn^2+却使酶几乎失活.以酪蛋白为底物,在pH10.0、37℃时测得米氏常数Km值为1.33%. 相似文献
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利用平板快速筛选法,从土壤中筛选到一株细菌BacillusSp.2108,其代谢物对几丁质酶具有较强的抑制活性。对其发酵液离心,用硫酸铵盐析后,经Sephadex G-25脱盐柱脱盐、DEAE Sephrose Fast F low阴离子交换柱层析和低压液相色谱Superdex G 75凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化,最后通过SDS-PAGE检测,得到一条单带。纯品经SDS-PAGE,转膜,测序,及序列比对,初步判定此抑制物是一种中性蛋白酶。 相似文献
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β-葡萄糖苷酶纯化及酶学性质研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了来源于曲霉No.5.1的β-葡萄糖苷酶的纯化和酶学性质。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-chitopearl和Sephadex G-100柱层析得到纯β-葡萄糖苷酶,SDS-PAGE凝胶电泳显示一条带,测得分子量为67.5 kD。该酶最适反应pH6.0,最适反应温度为60℃,在80℃以下、pH3.0~9.0酶活力相对稳定。K 、Na 、Mg2 和Zn2 对酶有激活作用,而Ag 和Fe2 对酶具有明显的抑制作用。该酶对纤维二糖和水杨素的水解能力最强,水解水杨素的Km值为3.09 mmol/L。 相似文献
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为控制马铃薯在贮藏和加工过程发生的酶促褐变,对马铃薯多酚氧化酶进行分离纯化,并研究其酶学特性。采用缓冲液提取、低温离心得到马铃薯多酚氧化酶(PPO)粗酶液,粗酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25分子凝胶柱层析脱盐处理、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析分离纯化得到马铃薯PPO,进一步对其部分酶学特性进行研究。结果显示:纯化后的马铃薯PPO其比活力为283.0 U·mg-1,回收率为16.8%,纯化倍数为18.6倍;该酶最适反应温度为30℃,最适反应pH为6.5;以邻苯二酚为底物时,最适底物浓度为50 mmol·L-1。该酶对焦性没食子酸、间苯二酚的底物亲和性较强,对4-甲基儿茶酚、咖啡酸、没食子酸、对苯二酚、邻苯二酚、绿原酸的底物亲和性较低,对N-BOC-酪胺、愈创木酚亲和性很低。 相似文献
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液态发酵培养假海源菌ZJCN121,粗酶液经过丙酮沉淀和Sephadex G-100柱层析分离纯化得到回收率为13.5%,纯化倍数为21.8,比活为20.59 IU·mg-1的电泳纯岩藻多糖酶。采用SDS-PAGE电泳和EIF-PAGE电泳,分别测得酶的相对分子质量为60.2 kDa、等电点为4.3。该酶的最适反应温度为50℃,最适pH为6.5。其催化Fucus vesiculosus岩藻多糖的Km为5.87 mg·mL-1,Vmax为6.11 g·L-1·min-1。Ca2+、Ba2+对酶稍有激活作用,Fe2+、Cu2+则强烈抑制酶活,Mn2+、K+、Zn2+也在一定程度上抑制酶活性,Mg2+对酶的作用效果不明显。 相似文献
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以"渝薯17"为实验材料,从淀粉生产废水中分离纯化β-淀粉酶.去皮、1∶10(m/V)匀浆抽提,经过乙醇分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析获得电泳纯β-淀粉酶并对其酶学性质进行了研究.结果表明:该酶的比活力高达333.15U/mg,显著高于市售枯草杆菌来源酶活(50U/mg);纯化倍数9.93倍,回收率66.60%;亚基分子量约为55.12kD,全酶分子量约为223.54kD;最适温度50℃,最适pH值6.2;50℃以下,pH值6~8具较好的稳定性.在最适条件下以可溶性淀粉为底物,测得Km为0.001 36g/mL,V_(max)为0.112mg/mL·min;Mn~(2+),Pb~(2+),Li~+,Zn~(2+),K~+,Cu~(2+),草酸,SDS对该酶有不同程度的抑制作用,Co~(2+)有激活作用,有机物作用不明显. 相似文献
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《江苏农业学报》2015,(5)
为获得康氏木霉(Trichodermakoningii)内切β-葡聚糖苷酶组分,并研究其酶学性质,通过硫酸铵盐析、DEAE Sepharose FF阴离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析对康氏木霉GIMP3.444纤维素酶主要组分进行分离纯化,SDS-PAGE电泳检测蛋白质纯度和分子量,MALDI-TOFMS鉴定蛋白质种类。结果显示,从康氏木霉所产的纤维素酶系中分离纯化获得一种内切β-葡聚糖苷酶组分,相对分子质量为44 600,酶的比活力为19.65 U/mg。该内切酶的最适反应p H值为4.5,最适反应温度为55℃。以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物时,酶的米氏常数(Km)为7.22 mg/ml。不同金属离子对酶活性影响不同,其中Ca2+(0.3 mmol/L)对酶的抑制作用较强,抑制了近35%的活力。通过MALDI-TOFMS鉴定及数据库分析,确定该酶为一种新的内切β-葡聚糖苷酶组分。 相似文献
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新鲜鸭肝经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝过氧化氢酶电泳纯制品,回收率为18.23%,比活达4780.38U/mg,纯化倍数为66.15。最适温度为40℃,最适pH为7.0,该酶在20~40℃,pH5~8内稳定.经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为250KD,亚基分子量为62.5KD。 相似文献
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牛血清乙酰胆碱脂酶的分离纯化 总被引:3,自引:0,他引:3
以牛血清为原材料,采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G—100凝胶柱和DEAE-纤维素DE23柱层析对牛血清中的乙酰胆碱酯酶进行分离纯化。结果表明,经以上三步分离纯化后,可获得电泳纯的乙酰胆碱酯酶,最终收集的酶液经聚丙烯酰胺pAGE凝胶电泳鉴定后,仅出现一条谱带;对Sephadex G-100凝胶和Sephadex G-75凝胶分离纯化乙酰胆碱脂酶的效果进行了比较.发现两者对乙酰胆碱酯酶的分离效果相差不大。 相似文献
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白芨中性杂多糖的分离纯化与结构分析 总被引:20,自引:0,他引:20
以白芨(Bletilla striata (Thunb.) Reichb.f.)块茎为材料,经热水抽提,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,阴离子交换纤维素柱(DE-52)层析和凝胶柱(Sephadex G-100)层析,分离纯化得一白芨中性多糖.经高效凝胶渗透色谱(GPC)和凝胶柱层析(Sephadex G-100)鉴定为均一组分.GPC法测得其重均分子量约为99.658 ku.薄层层析、红外吸收光谱(FT-IR)、13C核磁共振谱(13C-NMR)和1H核磁共振谱(1H-NMR)分析该多糖为一中性杂多糖,由β-1,4-甘露糖(β-1,4-Man),β-1,4-葡萄糖(β-1,4-Glu)和α-1,6-葡萄糖(α-1,6-Glu)残基组成,三者的的摩尔比约为6.8∶3.2∶1.5. 相似文献
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根霉(Rhizopus sp.A03)发酵豆渣产α-半乳糖苷酶,粗酶液依次经过三相分离、Sephadex G-100凝胶过滤获得了电泳纯的α-半乳糖苷酶,纯化了2.3倍,总酶活回收率达到25.9%,SDS-PAGE显示其相对分子质量为168.8 kDa.该酶水解对硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷的最适pH值为4.5,最适温度为45℃, 表观Km值为0.340±0.026 mmol/L,表观kcat/Km值为2.866×104 mol-l/(Ls);水解蜜二糖和棉子糖的表观速率均为10.0μmol/(h·mg);水解活性受Fe3+、Cu2+、Mn2+和Hg+等离子的强烈抑制,但Fe2+对酶活性具有显著的激活作用.该酶活性在pH4.0~8.9保持稳定,在45℃时保温60 min,残余酶活达到了77.4%. 相似文献
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将Pr1粗酶液通过凝胶过滤层析、SDS-PAGE等方法进行了初步的纯化.在凝胶过滤层析后,发现两种分子量不同的Pr1同工酶(Pr1E1,Pr1E2).以Suc-(Ala)2-Pro-Phe-PNA 为底物时,Pr1酶的Km值为0.0176 μmol·L-1,50 μL粗酶液反应10 min时的Vmax为0.1446;Pr1E1和Pr1E2最适反应温度均为50℃;Pr1E1和Pr1E2最适反应pH均为8.2.Pr1酶的最佳保存温度在-20℃与-80℃. 相似文献