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将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中，获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞，使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组，产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明，获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传，间接免疫荧光和Western blot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBV S1糖蛋白。 相似文献
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建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ。用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼脂扩散试验（１０．６７％）。经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点。此外，对４种封闭液的封板结果表明：１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ、０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ、０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2016,(2)
通过临床症状观察,三黄鸡病鸡产生典型的皮肤病变,通过绒毛尿囊膜接种分离并进行传代培养,病毒EID50测定、病毒理化特性检验、琼脂扩散试验、动物回归试验等进行鉴定。证明2013年3月吉林省吉林市某三黄鸡饲养场500只三黄鸡中的50只发病鸡是鸡痘病毒感染,其病毒感染滴度EID_(50)为10~(-5.56)/ml。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2006,28(6):732-736
第1期·研究报告·表达禽流扇茜毒HSHA、H7HA基因DNA疫苗的免疫原性研究··················……张芳芳.姜永萍，刘光亮，等(l)猪瘟病毒非结构蛋白NSZ基因不同片段的克隆及在原核系统中的高效表达...·..············……郭东春，钱平，李祥敏，等(6)多次传代和致细胞病变猪瘟病毒石门株E2基因序列分析.........·...·..··……魏中锋，张彦明，孙裴，等(9)表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验··，、·，，···，·······……智海东，王云峰，孙… 相似文献
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以鸡痘病毒(FPV)疫苗株为载体,将H5亚型AIV血凝素基因(HA)和鸡白细胞介素18(IL-18)基因分别插入到鸡痘病毒表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子(ATI-P7.5×20)和单一启动子(P7.5)下游,构建了携带AIV HA基因和鸡IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-H5HA-IL18.将H5亚型AIV HA基因插入到鸡痘病毒表达载体pUTA2复合启动子(ATI-P7.5×20)下游构建了携带H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2-H5HA.应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株鸡痘病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),在BrdU药物加压下进行3次蚀斑筛选.以不同代次细胞的mRNA为模板,利用H5亚型AIV HA基因和鸡IL-18基因特异引物进行RT-PCR和蛋白印迹检测,筛选出能共表达H5亚型AIV HA基因与鸡IL-18基因和单独表达H5亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒rFPV-H5HA-IL18和rFPV-H5HA,这些重组鸡痘病毒的构建为AIV活载体疫苗的研制奠定了基础. 相似文献
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将含痘病毒启动子LP2EP2的鸡传染性支气管炎病毒S1糖蛋白基因和鸡IL-18(ChIL-18)基因同时插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组禽痘病毒转移载体pSYS1/ChIL-18。用脂质体将其转染已感染禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达S1和鸡IL-18的重组禽痘病毒(rFPV-S1-ChIL-18)。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选,对重组病毒rFPV-S1-ChIL-18进行多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用S1基因和鸡IL-18基因特异引物进行PCR,分别扩增出1条约1.7 kb和1条约0.6 kb的带。经间接免疫荧光法和T细胞转化试验证实感染rFPV-S1-ChIL-18的CEF中存在表达的S1和鸡IL-18。 相似文献
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应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400～800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点. 相似文献
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禽流感的琼脂扩散检测与防制 总被引：2，自引：0，他引：2
禽流感ＡＩ是由正粘病毒科Ａ型流感病毒ＡＩＶ引起的禽类全身性或呼吸道传染病，主要侵害鸡、火鸡、鸭和鹅等。由于禽流感的临诊症状变化较大，单凭症状或病理变化进行确诊比较困难，往往容易误诊。采用琼脂扩散ＡＧＰ试验是检测禽流感的常规方法，具有较广泛的应用价值。现将禽流感的ＡＧＰ检测与防制简介如下。一、禽流感的ＡＧＰ检测法１试剂与材料１抗原：禽流感琼脂扩散试验用抗原由指定单位提供。２阳性血清：由指定单位提供。３ｐＨ６４００１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ液甲液：Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ３５８克，加１０００毫升蒸馏水；乙… 相似文献
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鸡传染性法氏囊病常用的实验室诊断方法是病毒的分离和鉴定、琼脂扩散试验以及易感雏鸡接种等。其中琼脂扩散试验是比较经典而且实用方便的方法，现将鸡传染性法氏囊病的血清学诊断方法介绍如下。 相似文献
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1鸡马立克氏病（MD）的流行情况1·1MD发病历史及流行简况MD在湖南首例发病报告于衡南县肉食公司东阳鸡场，1974年该场从外省购进惠阳鸡，1975年该群鸡发病600余只，死亡550多只以后，各地市种鸡场先后从外省引进种鸡带入MD，导致全省各地先后有MD发生．1981年～1984年，湖南农学院、省畜牧兽医研究所、省畜牧兽医总站先后对全省12个地市的鸡场、专业户的54个鸡群进行了血清学检查，各鸡群的阳性率为26％～582％．1987～1989年，全省畜禽疫病普查抽检14个地市9023只鸡，利用琼脂扩散试验检查MD阳性率平均为7．59％．MD流行初期给我省… 相似文献
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肖履中 《青海畜牧兽医杂志》2000,30(3):9-9,F003
取白喉型鸡痘病死鸡的喉气管组织 ,固定、包埋、切片、染色 ,用电镜对其形态的超微结构进行观察。结果表明 ,鸡痘病毒HQ98株除了有与一般鸡痘病毒相似的形态结构外 ,其核心膜为二层 ,包涵体均被一层膜包围 ,病毒粒子的第二层外膜就是从包涵体膜出芽时获得。该病毒的大小为 175 .72± 2 0 .80nm× 2 76.84± 2 7.5 1nm 相似文献
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鸡马立克氏病琼脂扩散沉淀反应。我们在学习有关资料的基础上,应用羽囊浸液琼脂扩散法诊断了杭州市郊某大队鸡场发生的鸡马立克氏病。现报告如下: 试验材料和方法一、马立克氏病阳性血清;由哈尔滨兽医研究所供应,批号8102。二、受检鸡羽囊浸液制备:从受检鸡的 相似文献
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H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗 总被引：1，自引：0，他引：1
H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗，该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术，将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中，构建重组鸡痘病毒(rFPV—HA—NA)，经体外、体内试验表明该重组鸡痘病毒具有良好的免疫原性。同时经细胞连续传代，证实了重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性，从而进一步保证了该疫苗的免疫原性。 相似文献
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美国七彩山鸡痘是山鸡的一种急性、接触性传染病。其特征是在皮肤，特别是眼、嘴及肛门周围出现鸡痘疹，在口腔、喉头及食道等粘膜处发生白喉性假膜。一般死亡率较低，但并发其他传染病或卫生条件及营养不良时，可引起较多的死亡，对幼美国七彩山鸡更易造成严重的损失。１病原美国七彩山鸡痘病毒属鸡痘病毒科美国七彩痘病毒属。美国七彩山鸡痘病毒是以鸟类为宿主的鸡痘病毒的总称。目前认为美国七彩山鸡痘病毒中有山鸡、鸡、鸽、火鸡、鹌鹑、麻雀等鸡痘病毒。在自然情况下每一种病毒只对同种宿主有易感性，鸵鸟感染的是火鸡痘病毒。鸡痘病毒… 相似文献
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根据已发表的鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了(P3,P5)1对引物,通过对影响PCR扩增条件的优化,在不同的退火温度下,直接以病毒液为模板扩增出预期的1 107 bp的片段。特异性检测表明,两对引物对FPV102株、FPV282E4(北京)、大华农鸡痘疫苗毒株、重组鸡痘疫苗病毒及临床病料均能扩增出相应的特异性片段,而用鸡马立克氏病毒、传染性支气管炎病毒,鸽痘病毒及鸡胚成纤维细胞制备的模板进行PCR扩增均为阴性。敏感性检测表明,引物能检测0.195 ng/μL的模板量。用此方法检测50份临床样品,其中的阳性率为92%,用琼脂扩散试验方法检测的阳性率为70%。以上结果表明,该方法可以用于FPV临床样品的检测。 相似文献
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共表达新城疫病毒F基因、传染性法氏囊病病毒VP0基因的重组鸡痘病毒的抗原性和免疫原性 总被引：11，自引：2，他引：9
以鸡痘病毒(FPV)282E4株TK基因为侧翼,将2个相同的复合启动子ATI@p7.5×20以反向方式连接,分别调控新城疫病毒(NDV)F基因和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP0基因,得到重组转移质粒pVP0-2ATI@p7.5×20F.然后将该重组转移质粒用脂质体转染预先感染FPV 282E4株的鸡胚成纤维细胞(CEF),在经BrdU(5-溴-脱氧尿嘧啶)加压处理后的CEF上传代,用间接免疫荧光试验、Western blot检测,有2株鸡痘病毒能同时表达NDV F蛋白和IBDV VP0蛋白.用这2株重组鸡痘病毒刺种商品Leghorn雏鸡,于刺种前及刺种后1、2、3周对抗NDV特异性抗体水平和淋巴细胞转化能力检测,结果发现,重组鸡痘病毒能激发机体产生良好的免疫反应.结果表明,重组鸡痘病毒可以作为疫苗备选株进行研究与开发. 相似文献