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1.
《延边大学农学学报》2015,(3)
为将玉米高蛋氨酸蛋白基因在原核细胞中加以表达、培育高蛋氨酸水平的益生菌并用于提高动物饲料的蛋氨酸含量,本研究采用PCR克隆的方法,从玉米自交系B73中克隆出目的基因dzs18。结果表明:目标DNA序列长度729bp;目的基因编码由211个氨基酸组成的富含蛋氨酸的18kDδ-zein,其蛋氨酸残基数(50)占总氨基酸数量的23.7%。该蛋白质氨基酸序列的中部,即第75个氨基酸到第167个氨基酸之间,存在1个由93个氨基酸序列构成的蛋氨酸高密区,蛋氨酸残基数(41)所占比率为44.1%。利用所克隆的B73-dzs18,成功构建出dzs18基因的原核表达载体pGEX4T1-dzs18;目的基因正确插入到载体中GST标签基因的下游;序列测定证明,目的基因dzs18与GST标签基因构成具有无移码突变、连读阅读的GST-dzs18融合基因。 相似文献
2.
SCMRP基因原核表达及多克隆抗体制备 总被引：1，自引：0，他引：1
SCMRP基因是根据大豆密码子偏向性,采用生物信息学方法对玉米胚乳蛋白基因(MRZP)进行改造并合成的新基因,是适合在大豆中高效表达的高含硫氨基酸基因,可用于豆科作物的品质改良。将新合成的SCMRP基因构建到含有6×His标签序列的原核表达载体pET-32b上,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,SDS-PAGE和Western blot分析表明:经IPTG诱导,转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株中能正常表达出约20ku的目标蛋白质,IPTG最佳诱导表达时间是6h,融合蛋白质以可溶组分形式存在。菌体总蛋白经金属鳌合层析纯化后免疫新西兰大耳兔,制备兔抗血清,经Western blot和琼脂板双向扩散试验表明,已纯化出SCMRP-6×His融合蛋白质,成功制备出SCMRP兔多克隆抗体,抗血清效价达到1:256。上述结果表明,新合成的SCMRP基因是能够在生物体中正常表达的完整基因,制备的SCMRP兔多克隆抗体可用于转SCMRP基因植物蛋白质表达分析。研究结果将为通过转基因技术改良豆科植物含硫氨基酸品质奠定重要基础。 相似文献
3.
利用基因工程技术表达并获得高产量的重组蛋白在现代生物学发展与生产应用中起着重要的作用。研究发现,有些原始基因异源表达非常困难,经过改造表达系统后,如选择最优的启动子、信号肽和提高基因拷贝数等,重组蛋白的表达量依旧很低。因此,从基因本身序列出发,探寻提高表达量的途径也一直是研究热点。综述了翻译起始区、密码子偏好性、mRNA的二级结构和类SD序列方面对蛋白质翻译速率的影响,为提高重组蛋白表达量提供更有效的策略。 相似文献
4.
解析籽粒苋编码优质贮藏蛋白基因AhAMA1的功能,以期为应用于作物品质改良提供依据。从籽粒苋(cv. SX-04)发育种子中分离AhAMA1基因,检测其时空表达谱。应用生物信息学工具分析AhAMA1蛋白理化特性,构建AhAMA1基因组成型植物表达载体,并通过农杆菌介导渗透侵染法在本氏烟草叶组织瞬时表达AhAMA1,并检测烟叶组织的总蛋白质、油脂和淀粉及必需氨基酸含量。结果发现,AhAMA1基因在籽粒苋种子发育后期表达量最高;分离到的AhAMA1编码序列与数据库中AMA1基因ORF序列(915 bp)完全一致,编码304个氨基酸;AhAMA1分子量为34.96 ku,理论等电点(pI)为6.65;成熟蛋白含有29个带正电的氨基酸(Arg+Lys)和30个带负电的氨基酸(Asp+Glu);总平均亲水性为-0.343,属于疏水蛋白;AhAMA1蛋白不稳定指数为32.78,属于稳定蛋白。系统进化树分析结果显示,AhAMA1与千穗谷凝集素序列同源性达99%,亲缘关系较近。AhAMA1基因瞬时表达导致烟草叶片蛋白含量提高到22.39%,是野生型烟草叶片蛋白含量的2倍,油脂和淀粉含量比野生烟草稍有下降。研究成功分离到AhAMA1基因编码序列,其异源表达可提高宿主组织蛋白质和必需氨基酸含量。研究结果可为应用该基因提高植物蛋白含量及品质改良提供科学参考。 相似文献
5.
[目的]调查不同氮肥水平处理对水稻OsAAP6基因表达的影响,并进一步探究OsAAP6基因在不同氮肥条件下对其水稻籽粒中蛋白质(包括谷蛋白、醇溶蛋白、球蛋白和清蛋白)含量和氨基酸含量等营养品质的影响作用,为今后利用OsAAP66基因提高稻米营养品质提供参考。[方法]设置5个氮肥浓度梯度,在水稻OsAAP6遗传材料中分别检测OsAAP6基因的表达水平,并利用近红外谷物分析仪和考马斯亮蓝G-250法检测分析其成熟种子中蛋白质含量和氨基酸含量等稻米营养品质性状。[结果]随着田间氮肥施加量的增加,OsAAP6基因的表达水平明显提高,并能显著促进水稻籽粒中谷蛋白的积累,进而增加水稻籽粒中总蛋白质的含量;在氮肥浓度较高的条件下,OsAAP6基因有助于提高水稻籽粒中总必需氨基酸的含量;随着氮肥施加量的增加,OsAAP6基因能够显著提高水稻籽粒中总氨基酸的含量。[结论]OsAAP6基因随着田间氮肥浓度的增加,其表达水平不断升高,并能促进水稻籽粒中蛋白质含量和氨基酸含量等稻米营养品质的提高,这为今后利用OsAAP6基因提高稻米的营养品质提供了重要参考。 相似文献
6.
植物体内阳离子扩散协助蛋白(cation diffusion facilitator proteins,CDF)也称为金属耐受蛋白(metal tolerance protein,MTP),在提高植物对锌抗性和调节锌在植物体内分布起到重要作用。本研究根据拟南芥AtMTP1基因序列从模式豆科植物蒺藜苜蓿基因组中鉴定了一个CDF家族锌转运体基因MtMTP3。生物信息学分析表明MtMTP3编码385个氨基酸,属于CDF家族锌转运体;酵母功能互补实验证实MtMTP3具有转运Zn的功能;基因表达检测结果显示MtMTP3主要在蒺藜苜蓿根部表达,高浓度Zn、Mn或者缺Fe处理均能促进MtMTP3的表达,表明该蛋白与根部重金属转运有关;RT-PCR和定量PCR检测结果显示该基因在低磷条件下表达量升高,接种丛枝菌根真菌能显著抑制MtMTP3表达,即使在高浓度锌处理下,MtMTP3表达也明显受到抑制。这些研究结果表明,丛枝菌根真菌可能通过促进磷吸收,进而调控MtMTP3基因的表达。 相似文献
7.
以模式豆科植物蒺藜苜蓿中1个聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)基因为对象,对其进行生物信息学分析,结果显示:该基因全长4 150bp,其编码区1 278bp,编码425个氨基酸;其编码蛋白包括2个与细胞壁主要成分果胶降解有关的保守结构域PL-6superfamily和Glyco_hydro_28;该酶蛋白与鹰嘴豆、赤豆等豆科植物中的PG蛋白同源关系更近。苜蓿基因表达谱数据库分析和RT-PCR检测结果表明,MtPG在根瘤中呈显著增强表达,在非共生组织如根、叶中表达量很低。此外,基于该基因3个Tnt1转座子插入的目标候选突变体(NF0999、NF5561和NF4746)插入位点分析,得到1个纯合突变体材料NF4746,共生表型观察表明,MtPG基因在豆科植物共生固氮的早期侵染过程中发挥重要作用。 相似文献
8.
逆境对于水稻产量和品质有很大影响,研究在逆境下水稻基因的表达变化对于研究水稻抗逆有着重要意义。运用荧光差异显示（Fluorescence Differential Display,FDD）技术,从低温处理的水稻中克隆到OsRAN1基因并通过半定量PT-PCR分析该基因在低温和高盐逆境下的表达。该基因cDNA序列全长为984bp,含有一个编码221个氨基酸残基的开放阅读框,推测分子量为25.0KD,此氨基酸序列具有GTPase活性区域,属于小G蛋白Ran亚家族,通过氨基酸相似性比对发现,Ran家族氨基酸序列高度保守,OsRAN1与TaRAN1和AtRAN1相似性分别达到98.19%和92.76%。通过半定量PT-PCR分析,发现在低温胁迫下,OsRAN1在根和叶鞘中表达量均有增加,尤其是高盐胁迫下根中OsRAN1表达量有迅速升高然后降低的变化。推测该基因在水稻逆境应答中起着重要作用。 相似文献
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《西南农业学报》2017,(8)
【目的】为探明GDSL家族脂肪酶的抗逆机理,【方法】在前期研究基础上,利用RACE技术克隆木豆GDSL脂肪酶基因,并通过荧光定量PCR技术检测其表达特性。【结果】获得1条木豆GDSL脂肪酶基因,命名为Cc GDSL1,该基因含开放阅读框全长1107 bp,编码369个氨基酸;经同源性分析,Cc GDSL1编码的氨基酸序列与豆科植物中GDSL脂肪酶具有较高的相似性。该基因在叶、茎和根中均表达,且叶和茎中表达量显著高于根;干旱胁迫能提高Cc GDSL1的表达量,随干旱的持续表现出先降后升随后趋于稳定的表达模式。【结论】推测Cc GDSL1基因参与木豆应激干旱胁迫。 相似文献
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【目的】将H5N1亚型禽流感病毒血凝素（AIVHA）基因转入牧草植物中,利用豆科牧草作为植物生物反应器来生产禽流感抗原蛋白,探索研制禽流感转基因植物可饲用疫苗的可行性。【方法】以百脉根子叶柄外植体作为转化受体,通过农杆菌介导法将AIVHA基因导入百脉根,子叶柄外植体经过共培养、筛选分化、再生, 得到抗性植株。对抗性植株进行了PCR、RT-PCR检测和Western blot分析。【结果】证明AIVHA基因已经导入到百脉根基因组中,在核酸水平和蛋白水平都得到了表达。【结论】利用百脉根表达禽流感抗原蛋白是可行的。 相似文献
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Yang YU Wen-sheng HOU Yael Hacham Shi SUN Cun-xiang WU Ifat Matityahu Shi-kui SONG Rachel Amir Tian-fu HAN 《农业科学学报》2018,17(1):54-62
Soybean(Glycine max(L.) Merr.) is a major crop that provides plant-origin protein and oil for humans and livestock.Although the soybean vegetative tissues and seeds provide a major source of high-quality protein,they suffer from low concentration of an essential sulfur-containing amino acid,methionine,which significantly limits their nutritional quality.The level of methionine is mainly controlled by the first unique enzyme of methionine synthesis,cystathione γ-synthase(CGS).Aiming to elevate methionine level in vegetative tissues and seeds,we constitutively over-expressed a feedback-insensitive Arabidopsis CGS(At D-CGS) in soybean cultivars,Zigongdongdou(ZD) and Jilinxiaoli 1(JX).The levels of soluble methionine increased remarkably in leaves of transgenic soybeans compared to wild-type plants(6.6-and 7.3-fold in two transgenic ZD lines,and 3.7-fold in one transgenic JX line).Furthermore,the total methionine contents were significantly increased in seeds of the transgenic ZD lines(1.5-to 4.8-fold increase) and the transgenic JX lines(1.3-to 2.3-fold increase) than in the wild type.The protein contents of the transgenic soybean seeds were significantly elevated compared to the wild type,suggesting that the scarcity of methionine in soybeans may limit protein accumulation in soybean seeds.The increased protein content did not alter the profile of major storage proteins in the seeds.Generally,this study provides a promising strategy to increase the levels of methionine and protein in soybean through the breeding programs. 相似文献
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《农业科学学报》2017,(12)
Lentil is a highly nutritious legume with an ample quantity of carbohydrates and good amount of proteins, minerals, vitamins, phytochemicals and fibres. Although it has been used as staple food since ancient times, its usage has been limited in developed countries, especially due to the lower protein digestibility, presence of anti-nutritional factors, flatulence and poor cooking qualities. Processing of lentils including dehulling and splitting and isolation of major fractions, e.g., proteins and starches are some of the strategies that can be adopted to add value and increase consumption of these legumes. This review paper intends to provide detailed overview of lentil's global production, nutritional composition and processing methods of lentil. Methods of isolation/characterization of lentil protein and starch and their subsequent application in foods are also presented. 相似文献
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以拟南芥为研究对象,根据已知的生物信息数据,通过反向遗传学的方法,对与钴胺素合成相关蛋白CSRP基因进行分子克隆,得到该基因的基因组序列和cDNA序列,构建二元重组质粒,利用根癌农杆菌介导的花浸泡转基因方法分别转化突变体和野生型植株,进行互补试验和过表达试验,筛选转基因植株,并进一步预测其编码蛋白的亚细胞定位于叶绿体中.结果表明,在突变体中转入该基因后,转基因植株恢复野生型的表型,而在过表达的转基因植株中表型更为明显,即生长旺盛,晚花.说明该基因对于拟南芥的营养生长起促进作用,由于其功能预测与钴胺素合成相关的蛋白,推测其可能在植物营养生长中起作用. 相似文献
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Ané JM Kiss GB Riely BK Penmetsa RV Oldroyd GE Ayax C Lévy J Debellé F Baek JM Kalo P Rosenberg C Roe BA Long SR Dénarié J Cook DR 《Science (New York, N.Y.)》2004,303(5662):1364-1367
Legumes form symbiotic associations with both mycorrhizal fungi and nitrogen-fixing soil bacteria called rhizobia. Several of the plant genes required for transduction of rhizobial signals, the Nod factors, are also necessary for mycorrhizal symbiosis. Here, we describe the cloning and characterization of one such gene from the legume Medicago truncatula. The DMI1 (does not make infections) gene encodes a novel protein with low global similarity to a ligand-gated cation channel domain of archaea. The protein is highly conserved in angiosperms and ancestral to land plants. We suggest that DMI1 represents an ancient plant-specific innovation, potentially enabling mycorrhizal associations. 相似文献
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转Bt基因棉花的研究应用及问题与对策 总被引：2，自引：1，他引：1
20世纪80年代初Bt毒蛋白基因被克隆并转化到植物当中,转Bt基因棉花的应用已取得了相当的效益。但随着转Bt基因棉花的种植,也出现了许多问题,诸如抗药性的产生、抗虫谱狭窄、表达水平低等。现在转抗虫基因棉花的研究主要围绕着转多基因抗虫棉的培育,采用特异启动子调控外源抗虫基因在棉株体内的高效表达,修饰Bt基因以改善Bt毒蛋白的杀虫效能,重视外源与内源抗虫系统间的协调性,加强现代基因工程与传统抗虫育种相结合和筛选广谱性抗虫基因培育广谱性抗虫棉花,等等。 相似文献
20.
Bhaskar Bhagya Kandikere R. Sridhar Sahadevan Seena Chiu-Chung Young Ananthapadmanabha B. Arun 《Frontiers of Agriculture in China》2010,4(4):481-488
This study has been performed to evaluate the nutritional, antinutritional and protein qualities of tender pods of Canavalia maritima, the coastal sand dune wild legume of southwest India. The proximal features, minerals, amino acids, fatty acids, antinutritional
and protein qualities of fresh and pressure-cooked tender pods have been assessed. The crude protein was comparable to seeds
of many edible legumes. Cooking significantly elevated the carbohydrates and calorific value of tender pods (P < 0.05), while crude fiber was significantly decreased (P < 0.05). Minerals of fresh pods did not drain too much on cooking and K, Mg, Zn and Mn in fresh as well as cooked pods were
comparable or higher than the NRC-NAS recommended pattern. Although cooking decreased the essential amino acids, threonine,
valine, isoleucine, phenylalanine and lysine in cooked pods were equivalent or higher than the FAO-WHO-UNU recommended pattern.
The palmitoleic acid in fresh pods and eicosenoic acid in cooked pods were relatively high. Similarly, the essential fatty
acids, linolenic acid and linoleic acid were confined to fresh and cooked pods respectively. The fresh pods were devoid of
tannins and trypsin inhibitors. The total phenolics and hemagglutinin activity decreased substantially in cooked pods. The
diet of pressure-cooked pods showed improvement of in vivo protein quality, elevation of growth parameters and positive nitrogen balance in rats. Overall, the pressurecooking of tender
pods of C. maritima improved the nutritional qualities by lowering the hemagglutinin activity. 相似文献