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1.
为探讨原癌基因c-myc对鹿茸生长的调控作用,选择3头成年塔里木马鹿生长期为30、60d的新鲜鹿茸,剖分成茸皮层、间充质细胞层、成软骨细胞层和软骨细胞层。首先用2种免疫组化的方法进行基因表达定位,然后通过荧光定量PCR技术对不同组织基因表达定量进行分析。结果显示：该基因在茸皮的毛囊内根鞘、毛母质和皮脂腺呈阳性反应,在动脉血管的环形平滑肌、真皮乳头层与表皮基部连接的基底层呈阳性反应。在静脉血管、神经和其他附属器反应均呈阴性。定量分析结果表明c-myc基因在不同生长阶段不同组织层均有表达。茸皮层从生长期30～60d,c-myc表达下调,而在其他3个组织中均上调表达;同一生长期茸皮和软骨层的表达量均高于间充质细胞层和成软骨层（P〈0.05）;不同生长期30、60d组织间基因的表达没有显著的变化。研究结果表明,c-myc基因在鹿茸快速生长期参与了茸皮的增殖与分化;在软骨组织中高表达特别是生长后期,说明原癌基因c-myc对马鹿茸软骨发育及骨形成有着一定调控作用。 相似文献
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以梅花鹿为研究对象,通过原位杂交方法对细胞周期蛋白D1（cyclin D1）在梅花鹿茸角中的表达进行了研究。结果显示,cyclin D1在梅花鹿茸角表皮层内表达极少,在茸角真皮层、间充质层及软骨层等处均有表达,但在表达强度上存在差异。在真皮层中,cyclin D1在真皮成纤维细胞中有较强的表达,在鹿茸间充质细胞中也有少量cyclin D1的表达,在鹿茸软骨层中,cyclin D1在软骨细胞中的表达量非常高,主要表达在增殖区的软骨细胞中。结果表明,cyclin D1可能在梅花鹿茸角再生过程中起重要的调控作用。 相似文献
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鹿茸角是哺乳动物唯一的失去后还能完全再生的器官,人们对鹿茸角再生的分子机理了解甚少。本试验以梅花鹿为研究对象,通过原位杂交方法对Bcl-2在梅花鹿茸角中的表达进行了研究。结果显示,Bcl-2在梅花鹿茸角表皮层内表达甚微,在茸角真皮层、间充质层及软骨层等处均有表达,但在表达强度上存在一定差异。在真皮层中,Bcl-2在真皮成纤维细胞中有较强的表达,在鹿茸间充质细胞中也有少量Bcl-2的表达;在鹿茸软骨层中,Bcl-2在软骨细胞中的表达量很高,主要表达在增殖区的软骨细胞中。这表明Bcl-2可能在梅花鹿茸角再生过程中起重要的调节作用。 相似文献
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试验旨在从塔里木马鹿鹿茸顶端组织中克隆血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的编码序列,分析其分子特性及其在鹿茸组织中的表达情况。本研究采用改良的Trizol法提取鹿茸顶端组织总RNA,以RT-PCR方法获得VEGF基因,回收纯化后连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并鉴定,利用免疫组化法确定VEGF蛋白在塔里木马鹿鹿茸顶端组织茸皮层、间充质层和软骨层中的表达水平。结果显示,VEGF基因开放读码框（ORF）全长为648 bp,编码216个氨基酸。通过其序列比对和进化分析发现,塔里木马鹿茸中VEGF与人、牛、羊、猪的VEGF核苷酸序列同源性分别为98.75%、96.55%、97.58%和97.56%,其中与人VEGF同源性较高。免疫组化试验表明,塔里木马鹿VEGF蛋白在间充质、茸皮层和软骨中均有表达,但无明显表达差异。说明塔里木马鹿鹿茸可能会是人类研究再生医学和血管相关疾病的理想模型,同时,本研究为不同发育期塔里木马鹿鹿茸再生干细胞比较蛋白质组学研究提供了基础试验数据。 相似文献
6.
梅花鹿鹿茸角生长顶端的组织结构 总被引：2，自引：0，他引：2
利用光镜和透射电镜对梅花鹿鹿茸角生长顶端的组织结构进行了观察.结果显示,梅花鹿鹿茸角生长顶端分皮肤层、间充质层、前成软骨层、过渡层和软骨层.间充质层细胞形态均一,细胞体积较小,呈梭形,细胞核呈椭圆形,核仁明显,胞质内细胞器含量极少,呈典型的幼稚性细胞形态.前成软骨层内有前成软骨细胞,前成软骨细胞体积较闻充质层细胞大,呈长椭圆形,细胞核呈圆形或椭圆形,有1～2个核仁,胞质内出现较多的粗面内质网及多聚核糖体.过渡层细胞成分多样,包括前成软骨细胞和成软骨细胞;成软骨细胞体积较前成软骨细胞大,胞质内的粗面内质网和高尔基体进一步发育.软骨层内含大量软骨细胞,软骨细胞的形态极不规则,核膜也不规则,胞质内见有粗面内质网、高尔基体、游离核糖体和脂滴,线粒体极少. 相似文献
7.
《中国兽医学报》2019,(2):292-295
为了研究色氨酸2,3-双加氧酶(TDO2)在梅花鹿茸角再生中的作用,本试验通过原位杂交方法检测TDO2mRNA在梅花鹿茸角中的表达。在体外分离培养的鹿茸软骨细胞中添加TDO2抑制剂680C91,诱导24h后,应用Real-time PCR方法检测肥大软骨细胞分化标志分子Ⅹ型胶原(COLⅩ)及RUNT相关转录因子3(RUNX3)mRNA表达的变化,进一步研究TDO2对鹿茸软骨细胞分化的调节机理。结果发现,TDO2在鹿茸真皮层、间充质层及软骨层中均有表达。680C91诱导24h后,鹿茸软骨细胞中COLⅩ的表达量显著降低,同时RUNX3的表达水平也显著降低。以上结果表明,TDO2可能通过RUNX3来调节梅花鹿鹿茸软骨细胞的分化。 相似文献
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为了从梅花鹿鹿茸顶端组织中克隆Smad2与Smad4基因的编码区(CDS)序列,分析其分子特性及在鹿茸顶端不同组织中的表达情况,试验采用TRIzol法提取鹿茸顶端组织总RNA,以PCR方法获得Smad2与Smad4基因,并利用生物信息学软件对其进行生物信息学分析,免疫组化法检测Smad2与Smad4基因在鹿茸顶端不同组织中的表达水平。结果表明:Smad2基因完整的CDS序列长度为1 404 bp,编码467个氨基酸,与牛、人、马和猪的Smad2核苷酸序列同源性分别为98.29%、94.52%、95.30%和95.51%;Smad4基因完整的CDS序列长度为1 662 bp,编码553个氨基酸,与牛、人、马和猪的Smad4核苷酸序列同源性分别为98.26%、94.89%、95.85%和95.97%;Smad2与Smad4蛋白的分子质量分别为52.24 ku与60.50 ku,理论等电点分别为6.13与6.50,均具有较强的亲水性;梅花鹿Smad2与Smad4基因在茸皮层、间充质层和软骨层中均有表达,在软骨层中表达水平较高。说明梅花鹿Smad2与Smad4基因在鹿茸软骨层中表达水平较高,对鹿茸再生发育具有一定的调节作用。 相似文献
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TGF-β信号是刺激骨形成重要的旁分泌信号通路,Wnt信号是细胞生长和分化的重要通路,为探究两信号通路对鹿茸间充质干细胞软骨分化的影响,实验利用10 ng/mL TGF-β1刺激鹿茸间充质干细胞软骨分化,利用定量PCR与Westernblot技术检测分化过程Wnt家族16个生长因子及通路关键基因DKK1和β-catenin的表达变化。结果表明:刺激后第7天细胞开始分泌软骨的表面标志物,软骨分化开始,至第21天骨分化开始;分化过程中检测到Wnt3、Wnt4和Wnt5A 3个Wnt家族生长因子的表达,且Wnt3与Wnt5A基因的表达趋势相近,即在刺激后的第21天达到最高;Wnt4基因表达从软骨与骨的形成阶段呈上调表达趋势,DKK1基因在软骨发育的关键时期即第21天高表达,而β-catenin作为信号通路的枢纽在该时间点呈下调表达。由此可见,Wnt信号通路对塔里木马鹿茸MSCs软骨分化起重要的调控作用,Wnt家族的Wnt3和Wnt5A基因对软骨分化有重要作用影响,而Wnt4基因对软骨骨化有重要影响。 相似文献
10.
《中国兽医学报》2017,(1):118-122
以梅花鹿茸角为研究对象,通过原位杂交方法检测吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)和吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)在茸角中的表达。在培养的鹿茸软骨细胞中分别添加IDO1抑制剂1-甲基-L-色氨酸(1-L-MT)和IDO2抑制剂1-甲基-D-色氨酸(1-D-MT),作用24h后,通过荧光定量PCR方法检测软骨细胞分化标志分子Ⅹ型胶原(ColⅩ)表达的变化,进一步研究IDO1和IDO2对鹿茸软骨细胞分化的影响。结果显示:IDO1和IDO2主要在鹿茸真皮层成纤维细胞、间充质细胞和软骨细胞中表达。用浓度分别为200μmol/L和100μmol/L的1-L-MT和1-DMT处理鹿茸软骨细胞24h后,荧光定量PCR结果显示,ColⅩmRNA在鹿茸软骨细胞中的表达量均显著下降。结果表明:当IDO的活性受到抑制时,鹿茸软骨细胞的分化过程也受到明显抑制,IDO可能在梅花鹿鹿茸软骨细胞分化过程中起重要的作用。 相似文献
11.
M. Cegielski I. Izykowska M. Podhorska-Okolow B. Gworys M. Zabel P. Dziegiel 《Anatomia, histologia, embryologia》2009,38(3):184-188
This study aims at presenting histology of growing and mature antlers in red deer stag ( Cervus elaphus ). Growing antlers constitute a model organ for examining regeneration processes of tissues because they are the only mammalian appendages capable of regeneration. Histological study revealed that the tip of a growing antler consists of hairy skin, perichondrium, mesenchyme and chondroprogenitors area. By performing immunochistochemistry, we found that cell expressing Ki-67 and PCNA antigens were localized in basal layer of epidermis, skin glands and beneath their secretory sections, mesenchyme as well as within and in the vicinity of central blood vessels. Ultrastructurally, cells from chondroprogenitors zone have chondroblast-like morphology and take part in producing of collagen fibres followed by the process of cartilage mineralization. However, mature antlers also consist of lamellar osseous tissue. 相似文献
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为比较2、35日龄滩羊皮肤毛囊的发育特点与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）的分布特征，探究出生后滩羊被毛生长发育的变化特点，试验应用常规HE染色及改良Masson胶原纤维染色、Gomori银氨法染色、磷钨酸染色等特殊染色观察2与35日龄滩羊皮肤组织结构特点；应用免疫组织化学法结合免疫荧光染色法观察VEGF及VEGFR2在2与35日龄滩羊皮肤组织中的分布定位，并用IPP图像分析软件进行定量分析。结果显示：与2日龄滩羊皮肤组织比较，35日龄滩羊表皮与真皮间界限更加清晰，毛囊结构发育完整；毛囊密度显著降低（P<0.05）；胶原纤维与弹性纤维含量增加，形成网格状分布。免疫组化及免疫荧光结果显示，VEGF及VEGFR2在滩羊皮肤表皮及毛囊外根鞘、皮脂腺上均有表达。统计表明，VEGF及VEGFR2在2日龄滩羊皮肤组织中的表达量均显著高于35日龄（P<0.05）。综合上述结果，滩羊毛囊发育过程中，胶原纤维和弹性纤维增加明显；VEGF与VEGFR2通路在毛囊角质形成中起直接调节作用。 相似文献
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Cutaneous DNA vaccination against Ebola virus by particle bombardment: histopathology and alteration of CD3-positive dendritic epidermal cells 总被引：2，自引：0，他引：2
We analyzed the localization of gold particles, expression of immunogenic protein, and histopathologic changes after vaccinating guinea pigs and mice with a DNA vaccine to the Ebola virus glycoprotein administered by cutaneous particle bombardment. Gold particles were deposited in all layers of the epidermis and in the dermis. Those in the epidermis were lost as the damaged layers sloughed, while those in the dermis were phagocytized by macrophages. Glycoprotein was demonstrated by immunohistochemistry primarily in keratinocytes in the epidermis and hair follicle epithelium and less frequently in dermal macrophages, fibroblasts, sebocytes, and cells that appeared to be Langerhans cells. The number of cells that expressed glycoprotein increased between 4 and 8 hours postvaccination, then decreased to near zero by 48 hours. The vaccine sites were histologically divisible into three zones. The central portion, zone 1, contained the most gold particles in the dermis and epidermis and had extensive tissue damage, including full-thickness epidermal necrosis. Zone 2 contained fewer gold particles in the epidermis and dermis and had less extensive necrosis. The majority of cells in which glycoprotein was expressed were in zone 2. Zone 3 contained gold particles only in the epidermis and had necrosis of only a few scattered cells. Regeneration of the epidermis in damaged areas was evident at 24 hours postvaccination and was essentially complete by day 5 in the mice and day 10 in the guinea pigs. Inflammatory changes were characterized by hemorrhage, edema, and infiltrates of neutrophils initially and by infiltrates of lymphocytes and macrophages at later times. In zone 1, inflammation affected both the epidermis and dermis. Peripherally, inflammation was relatively limited to the epidermis. CD3-positive dendritic epidermal cells were demonstrated in the epidermis and superficial hair follicles of unvaccinated immunocompetent mice and beige mice but not of SCID mice. These cells disappeared from all but the most peripheral portions of the vaccine sites of vaccinated mice within 24 hours. They reappeared slowly, failing to reach numbers comparable with unvaccinated mice by 35 days postvaccination. The epidermis of control guinea pigs also had CD3-positive cells, but they did not have dendrites. These findings should contribute to a better understanding of the mechanisms operating in response to DNA vaccination by particle bombardment. 相似文献
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This study was aimed to clone the coding sequence of vascular endothelial growth factor (VEGF) from the antler tissue at the top of the Tarim Red deer, and analyze the molecular properties and expression in antler tissue. This study extracted total RNA in antler tip by improved Trizol method and got the VEGF gene by RT-PCR method, then purified and connected it to pMD18-T vector, and conversed it into Escherichia coli DH5α, the expression of the VEGF protein at the top of antler tissue, between the cortex and chopped level of mesenchymal and cartilage layer in Red deer were determined using immunohistochemical method. The results showed that the open reading frame (ORF) length of VEGF gene was 648 bp, and encoding 216 amino acids, sequence homology of the nucleotide were 98.75%, 96.55%, 97.58% and 97.56% comparing with human, cattle, sheep and pig, respectively. The VEGF of Tarim Red deer antler was high similarity with that of human through its sequence analysis and comparison. The VEGF protein were expressed in the top of antler tissue, including skin mesenchymal and cartilage layer from immunohistochemical experiment, but there was no obvious difference. It was predicted that the Tarim Red deer antler might be ideal model of the blood vessel related of regenerative medicine diseases for human research. 相似文献
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试验旨在研究TMEM219基因3种剪切体在不同重量鹿茸尖端的表达规律及TMEM219基因表达对鹿茸重量的影响,以期探究TMEM219基因对鹿茸生长发育的调控机理。利用实时荧光定量PCR技术对TMEM219基因及其3种剪切体在同一重量组鹿茸的不同组织及不同重量组鹿茸的同一组织mRNA的相对表达水平进行检测,同时测定并比较不同产茸量梅花鹿的血清中胰岛素生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）的浓度。结果表明,TMEM219基因的3种剪接体在梅花鹿鹿茸的间充质及前成软骨组织（RP）、过渡组织（TZ）及软骨组织（C）中均有表达,TMEM219-918基因相对表达量极显著高于TMEM219-1005与TMEM219-1960基因（P<0.01）,TMEM219-1005与TMEM219-1960基因相对表达量无显著差异（P>0.05）;高重量组TMEM219基因表达量显著高于低重量组（P<0.05）;同时,高重量组个体血清中IGF-1浓度显著高于低重量组个体（P<0.05）,而IGFBP-3浓度显著低于低重量组个体（P<0.05）。结果提示,TMEM219基因高表达可能会促进鹿茸的生长,增加鹿茸重量;推测其可能的机理是TMEM219竞争性结合IGFBP-3,减少与其结合的IGF-1,加强IGF-1与IGF-1R的亲和力,进而提高IGF-1对鹿茸生长的促进作用。TMEM219基因可能成为影响鹿茸生长发育的候选基因,为提高鹿茸生长提供理论基础。 相似文献