共查询到19条相似文献，搜索用时 171 毫秒
1.
利用Cre/loxp定位重组系统构建雄性不育基因和恢复基因表达载体 总被引：4，自引：0，他引：4
结合Cre/lox定位重组系统和杂种一代的育种特点，构建了反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pCABARTAAct和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pSTAAct中的反义肌动蛋白雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、反向插入TA29启动子下游的Actin基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp两个同向lox位点之间，再将上述表达盒连同lox位点切下插入pcAMBar，获得以除草剂Basta为筛选剂的反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pcABARTAAct。PCR方法从溶原菌BM25．8基因组DNA扩增出Cre基因，克隆测序验证无误后插入PBl525 CaMV35S-35S双启动子和Nos终止子之间，再将表达盒切下插入pBINPLUS质粒相应位点，得到恢复基因植物表达载体pBINPLUSCre。 相似文献
2.
以本实验室构建的重组南瓜(Cucurbita moschata)韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBdENP。利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化马铃薯(Solanum tuberosum)品种Favorita，经过抗生素筛选，共获得转pBdENP和对照pBI121的抗卡那霉素马铃薯再生植株106株。通过PCR初步筛查，筛选出65株为转基因阳性植株。通过Southern blot对部分植株进一步分析,确证外源gus基因已经插入到转基因马铃薯植株的基因组中，插入拷贝数在1个或2个以上。对这些转基因马铃薯植株进行GUS染色结果表明, dENP和CaMV35S启动子一样均能驱动gus基因的表达，前者仅在马铃薯的韧皮部内特异表达，而CaMV35S启动子驱动的gus基因为组成型性表达。GUS酶活力测定结果进一步表明dENP和CaMV35S启动子驱动gus基因表达水平没有明显区别。以上结果证明dENP启动子驱动的外源基因在马铃薯中也具有韧皮部特异而高效表达的特征，从而可用于马铃薯抗病、抗蚜虫转基因研究。 相似文献
3.
三个韧皮部特异性启动子在转基因烟草中表达的比较研究 总被引：12，自引：1，他引：12
用共整合的luc基因校正嵌合gus基因表达活性的方法对3个韧皮部组织特异性启动子在转基因烟草中的表达进行了比较，用杨树树皮储藏蛋白基因启动子（BP）、竹节花黄斑驳病毒启动子（CP）、笋瓜韧皮部蛋白2基因启动子（SP）以及CaMV35S启动子（35SP）构建了含有启动子-gus以及35SP-luc两类嵌合报告基因的植物表达载体，并通过农杆菌介导法转化了烟草植株，GUS活性的组织化学定位结果表明，3个启动子皆驱动gus报告基因在转基因烟草的叶、叶柄和茎的韧皮部组织中特异地表达，BP和SP在烟草根部是组成型的，通过比较转基因植株的校正GUS活性，确定了3个启动子的相对活性为BP和CP的活性相近，而SP约为CP的84%，结果表明BP和SP是韧皮部组织特异性的强启动子。 相似文献
4.
异戊烯基转移酶(IPT)是细胞分裂素合成途径的第一限速酶,过表达苹果MdIPT3a的转基因烟草表现出典型的细胞分裂素特异的生长表型,可作为苹果同源转基因的潜在筛选标记。为阐明MdIPT3a自主启动子对基因表达的调控作用,本试验克隆了富士苹果MdIPT3a基因上游启动子序列,分别构建不同长度的MdIPT3a启动子驱动GUS基因的植物表达载体,以CaMV35S驱动GUS基因的表达载体作为对照,遗传转化烟草W38,并对转基因植株进行GUS定性和定量分析,探讨不同长度的MdIPT3a启动子对GUS表达的影响。结果表明,转基因植株的各组织均有GUS染色,不同长度的MdIPT3a启动子均能驱动GUS基因表达,最小的有效启动子长446 bp,且含MdIPT3a启动子的转基因植株GUS表达水平显著低于含35S启动子的对照植株。本试验结果为MdIPT3a的同源转基因技术研究提供了一定的理论参考。 相似文献
5.
中棉光诱导基因Gacab 启动子的克隆及其功能分析 总被引：3，自引：0，他引：3
利用加接头法，从金华中棉(Gossypium arboreum)中分离获得了捕光叶绿素a／b蛋白复合体基因Gacab编码区5′上游的调控序列1009bp，命名为Gacab P，与公布的其它植物cab启动子序列比较，没有明显的同源性。将GacabP和197、504、779bp的5′端缺失体分别与gus(uid A)基因融合，构建植物表达载体。用Gacab P：：gus转化烟草(Nicotiana tabacum cv．NC89)，GUS组织化学分析发现Gacab P驱动gus基因在转基因烟草的叶片表达。在暗培养的转基因烟草叶片中Gacab P不表现活性，而光能够诱导gus基因的表达，表明Gacab P是一种光诱导型启动子。用基因枪轰击水稻愈伤组织，结果显示，Gacab P及3种不同长度的缺失体均可驱动gus基因的瞬时表达，以504bp的活性最高，瞬时表达水平明显高于35S启动子，197、779和1009bp的表达减弱，由此推测-197～-1bp为Gacab基因的基本启动子，-504～-197bp间包含正调控元件，-1009～-504bp间包含负调控元件。 相似文献
6.
来源于花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus)的CaMV35S启动子是目前商业化转基因作物中最常用的启动子,对其甲基化水平的测定是研究转基因沉默的重要内容之一。本研究通过甲基化敏感内切酶HpyCH4Ⅳ酶切和实时荧光定量PCR扩增技术,建立了CaMV35S启动子甲基化水平的快速测定方法。利用建立的方法分析了我国安徽省2017年市场的棉花(Gossypium hirsutum)种子,发现部分种子中CaMV35S启动子甲基化处于较高水平。本研究为实现转基因材料中CaMV35S启动子甲基化的快速高通量筛查提供了检测方法。基于相同的原理也可以建立其他转基因元件和DNA序列甲基化水平的快速检测方法。 相似文献
7.
抗草甘膦基因在转基因植物体内持续高效表达,不但增加植物代谢压力,有的甚至改变植物形态造成植物的生长发育畸形。为了减少转基因植株的代谢负担和能源浪费,从拟南芥菜(Arabidopsis thaliana)基因组中克隆了Leafy组织特异性启动子替代CaMV35S启动子,用其驱动改造后加二磷酸核酮糖羧化酶(rubisco)小亚基引导肽的5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合酶(CP4EPSPS)基因,同时调控报告基因gus的编码区构建植物表达载体p3300-Leafy-gus和p3300-Leafy-CP4EPSPS,嵌合基因经农杆菌(Agrobacterium)介导转化烟草。稳定表达后经GUS组织染色分析表明,Leafy驱动的gus表达仅局限在植物茎尖和幼叶部分,转基因植株成熟的叶片、茎部和根系均未能检测到GUS活性。草甘膦试验分析表明,Leafy驱动的CP4EPSPS的转基因植株幼芽部位有草甘膦抗性。结果表明,Leafy启动子驱动CP4EPSPS表达增强植株芽端对草甘膦的抗性。 相似文献
8.
植物表达载体构建和转基因烟草抗除草剂及耐盐性的分析* 总被引：4，自引：0，他引：4
利用基因重组,将来自于拟南芥（Arabidopsis thaliana)的发生单个碱基突变的als基因插入含有AtNHXI1基因的质粒pCAMBIA1300中,由CaMV35S启动子分别启动AtNHX1和als的表达,得到了兼有除草剂抗性基因和耐盐相关基因的植物表达载体。用烟草叶盘转化法获得了转基因植株。Southern杂交检测表明,外源基因已经整合到烟草(Nicotiana tobacum)基因组中。抗性测定发现,转基因植株除草剂抗性至少提高了1000倍,而耐盐性提高了约1．0％NaCl浓度,即带有同样启动子的不同外源基因赋予转基因植株的抗性程度有明显差异。 相似文献
9.
为研究orf25基因的功能及其与烟草雄性不育性的相关性,通过PCR方法从质粒p UC57-Pchs A中扩增了花特异性启动子Pchs A,并以其取代植物表达载体p BI121中的组成型启动子Ca MV35S,然后将orf25基因插入到Pchs A启动子下游,构建由Pchs A启动子驱动的orf25基因表达载体,测序结果显示植物表达载体p BI121-Pchs A-orf25构建成功。将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404中,采用根癌农杆菌介导法遗传转化雄性不育烟草MS革新3号,共获得76株转基因烟草植株,经PCR鉴定,转基因阳性植株为18株,转化率为23.7%。研究结果证明目的基因orf25已整合到烟草基因组中,为进一步探究该基因的功能及其与烟草雄性不育性的关系奠定了基础。 相似文献
10.
为了研究多基因互作,减少多次转化的不确定性,本研究在花青素合成调节基因del(delila)和ros(rosea1)的上下游分别引入CaMV 35S启动子和nos终止子,以pBI121-del和pCAMBIA1301-ros做中间载体,并利用BamHⅠ和BglⅡ产生相同4碱基末端的片段,在连接酶的作用下将CaMV 35S启动子分别驱动的del和ros基因构建在同一个植物表达载体pCAMBIA2301上,利用所构建的载体pCAMBIA2301-delros通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404介导的方法转化草莓(Fragaria ananassa Duch.),并进行PCR检测,获得转基因草莓。通过组织观察发现,转基因草莓的根和叶的颜色变成红紫色;实时RT-PCR分析表明,在转基因草莓中花青素合成的结构基因花色素合成酶(anthocyanidinsynthase,ANS)、查尔酮异构酶(chalcone-flavanone isomerase,CHI)、查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)、二羟黄酮醇-4-还原酶(dihydroflavonol-4-reductase,DFR)、黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)和类黄酮-3-O-葡糖基转移酶(UDP glucose-flavonoid 3-O-glcosyl-transferase,UFGT)在转基因株系中的表达均上调,这也进一步证实通过该方法构建的植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros可以用来转化植物。本研究结果表明,植物表达载体pCAMBIA2301-del-ros成功构建,为多基因植物表达载体的构建提供了一种思路,也为在植物体内同时研究多个基因的互作提供借鉴。 相似文献
11.
内含子是基因的重要组成部分,它与功能基因表达之间的关系越来越被重视。本研究以pCAM-BIA3301为载体,利用玉米泛素启动子Ubi1和水稻肌动蛋白启动子Actin1构建两个GUS基因表达载体p33U1和p33A1,同时设置3个对照载体。通过基因枪轰击法将上述载体转入水稻胚性愈伤组织,探讨内含子对外源目的基因表达的调控作用。组织化学检测结果表明：CaMV35S启动子调控下的iGUS（带内含子）基因能够顺利表达;同样,Actin1启动子（带内含子）调控下的不带内含子的GUS基因也可以正常表达,而当Actin1启动子（带内含子）驱动iGUS基因时,则导致GUS染色反应不能发生。Ubi1启动子（带内含子）调控GUS基因的瞬时表达也得出类似结果,证明表达框中内含子的数量为1个或两个时,对GUS基因的表达起到了不同的调控作用。本研究结果对植物表达载体构建及功能基因表达都具有指导意义。 相似文献
12.
为了探明胚乳特异启动子的调控活性，对小麦醇溶蛋白盒结合因子基因（pbf）的启动子序列进行了5´、3´和中间缺失片段-GUS基因嵌合体载体（pbf.a-d）的构建，并在小麦离体胚乳中转化。GUS瞬间表达活性检测和功能缺失试验表明：pbf 的-2510- -1bp全长序列能够在小麦离体胚乳中表现活性，而5´ 端-2510bp- -670bp以及3´端-1288bp- -1bp序列的缺失则使启动子在胚乳中丧失了活性；中间序列-2160bp- -689bp的缺失使GUS的表达强度明显降低。文中对pbf启动子序列中存在的重要基序种类和数量以及基序对启动子表达调控活性的作用也给予了初步分析。本文对小麦胚乳发育状态及GUS瞬间表达体系等对pbf启动子活性检测的影响也作了探讨。 相似文献
13.
通过分析β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase, GUS）基因产物,对水稻HIGH-TILLERING DWARF1(HTD1)基因启动子在转基因拟南芥中的表达特性进行初步研究。用已构建的含HTD1基因启动子和GUS报告基因的植物表达载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色,观察该启动子的表达特性。结果表明,在HTD1基因启动子的驱动下,GUS报告基因主要在转基因拟南芥幼苗期的叶片、叶柄、下胚轴以及主根基部的维管组织中表达。 相似文献
14.
组织特异性启动子是基因工程研究及实际应用中的重要工具。为了研究烟草NtMTPC4启动子的表达特性,采用实时荧光定量PCR方法分析烟草金属耐受蛋白C4(MTPC4)基因NtMTPC4在烟草不同组织中的表达模式,并利用PCR技术克隆得到NtMTPC4的上游启动子NtMTPC4-P。根据调控元件的分布对NtMTPC4-P进行不同程度的缺失,获得了NtMTPC4-P1、NtMTPC4-P2和NtMTPC4-P3缺失体;构建全长NtMTPC4-P和不同缺失体的植物表达载体,并通过花序浸染法转化拟南芥,对获得的转基因拟南芥进行GUS组织化学染色分析。结果表明,NtMTPC4基因的表达具有组织特异性,其在花中的表达量最高。NtMTPC4-P全长2 287 bp,含有CAAT-box、TATA-box、GTGANTG10和POLLEN1LELAT52等顺式作用元件和调控元件。GUS组织化学染色结果表明,全长启动子NtMTPC4-P和不同缺失体都能特异性地驱动GUS基因在转基因拟南芥花粉中的表达。本研究结果为通过基因工程技术在花粉中特异表达目的基因提供了新的调控元件。 相似文献
15.
埃及伊蚊TMOF同源基因表达载体构建及烟草转化 总被引：2，自引：2，他引：0
胰蛋白酶调节抑制因子（Trypsin-modulating oostatic factor, TMOF）可以有效地抑制昆虫中肠胰蛋白酶的活性。本文为了研究埃及伊蚊TMOF同源物基因在转基因植物广谱抗虫中的作用,利用人工合成的Aea-TMOF同源物基因,以改造过的pCAMBIA1301质粒为基本载体,构建了由组成型CaMV35S启动子驱动Aea-TMOF基因的植物表达载体pCAMBIA1301+ Aea-TMOF。然后,采用冻融法转入农杆菌LBA4404菌株,通过叶盘法对烟草进行了遗传转化。经PCR和GUS染色检测,Aea-TMOF同源物基因已整合到烟草基因组中。 相似文献
16.
向日葵种子特异性启动子Ha ds10G1的克隆及其功能验证 总被引：3，自引：0，他引：3
利用PCR技术从向日葵基因组DNA中克隆了Lea蛋白基因家族中Ha ds10 G1基因上游1414bp的调控序列，序列分析表明-1—1414bp与报道序列同源性为100%，将其与GUS基因融合构建植物表达载体后，通过农杆菌介导法转化烟草NC89，PCR扩增初步证明目的片段已整合到烟草基因组中，转基因植株的GUS活性检测表明，在茎、叶中无GUS活性，GUS活性只存在于种子中，因此，Ha ds10 G1启动子具有种子特异性的功能。 相似文献
17.
转柽柳金属硫蛋白基因（MT1）烟草的获得及对重金属镉的抗性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
将柽柳（Tamarix. sp）金属硫蛋白基因（MT1）插入到植物表达载体pBI121，利用农杆菌（Agrobactrium tumefaciens）介导法将MT1导入烟草基因组。对转基因T1植株的卡那霉素抗性分析表明，多数转基因植株后代表现为3:1的分离比例，只有少数转基因植株的抗性分离表现为15:1或不符合孟德尔遗传的分离比例。说明整合到烟草基因组的外源基因多为单拷贝基因，也有少数为多拷贝基因。对具有卡那霉素抗性的转基因植株进行PCR-Southern检测和Northern杂交分析表明，外源MT1基因已整合到烟草基因组，并且得到了正确表达。转基因植株对重金属镉的抗性比对照显著提高，表现为转基因植株的株高和鲜重均明显优于非转基因株系。 相似文献
18.
Takanori Kobayashi Yuko Nakayama Michiko Takahashi Haruhiko Inoue Hiromi Nakanishi Toshihiro Yoshihara 《Soil Science and Plant Nutrition》2013,59(7):1167-1175
Iron deficiency-responsive element 1 (IDE1) and IDE2 are cis-acting elements that are responsible for Fe-deficiency-inducible and root-specific expression of the barley (Hordeum vulgare L.) gene IDS2 (Fe-deficiency-specific clone no. 2). Using these cis-acting elements, we aimed to construct super-promoters that would induce prominent gene expression in the roots of Fe-deficient rice plants (Oryza sativa L.). Modules containing IDE1 and IDE2 of the IDS2 promoter were used as repeats or were linked to the Fe-deficiency-responsive promoter of barley IDS3, and were connected to known enhancer-like sequences. Five artificial promoters, as well as the native promoters of barley IDS2 or IDS3, were connected individually upstream of β-glucuronidase (GUS) and were introduced into rice. Transgenic rice plants were grown under control or Fe-deficient conditions, and GUS expression was analyzed. The artificial promoter that contained one module of IDE1 and IDE2 conferred strong Fe-deficiency-inducible GUS expression to the roots of rice plants. Each of the five artificial promoters induced a similar level of GUS expression in Fe-deficient roots, which did not exceed the GUS expression driven by the native IDS2 or IDS3 promoter. Artificial and native promoters induced GUS expression in response to Fe-deficiency in leaves, although the level of expression was lower than that in roots. Histochemical observations revealed that GUS expression driven by artificial and native promoters was spatially similar, and expression was dominant within vascular bundles and root exodermis. These findings suggest that there is coordinated expression of the genes that are involved in Fe-deficiency-induced Fe uptake in rice. 相似文献
19.
Satoshi ITO Haruhiko INOUE Takanori KOBAYASHI Masaaki YOSHIBA Satoshi MORI Naoko K. NISHIZAWA Kyoko HIGUCHI 《Soil Science and Plant Nutrition》2009,55(2):277-282
Barley ( Hordeum vulgare L.) nicotianamine synthase gene ( HvNAS1 ) expression in barley is strongly induced by Fe deficiency in the roots and rice ( Oryza sativa L.) nicotianamine synthase gene ( OsNAS1 ) expression in rice is induced by Fe deficiency both in the roots and in the shoots. In dicots, NAS genes are not strongly induced by Fe deficiency, and they function to maintain Fe homeostasis. Rice OsNAS1promoter::GUS or barley HvNAS1promoter::GUS was introduced into tobacco ( Nicotiana tabacum L.) and tissue specificities and systemic regulation of their expression were compared. A split-root experiment revealed that the HvNAS1 promoter exhibited functions similar to those of Fe-acquisition-related genes in tobacco roots, suggesting that this promoter responded to certain Fe-deficiency systemic signals and to the Fe concentration in the rhizosphere. The HvNAS1 promoter might harbor a type of universal system of gene expression for Fe acquisition. However, the OsNAS1 promoter did not respond to local application of Fe to the roots and induced GUS activities in mature leaves in response to Fe deficiency. This promoter might possess numerous types of cis -acting sequences that are involved in Fe metabolism. 相似文献