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自从70年代,人们首次从分子水平上证实了农杆菌浸染植物,到1983年第一个转基因植物问世,农杆菌介导转基因工程已是日新月异,硕果累累,转化成功的植物达116种,利用农杆菌可侵染双子叶植物的特点,这种方法已被广泛地应用在蔬菜育种中。1 农杆菌转化系统的原理和方法 土壤农杆菌是一种革兰氏阴性菌,从该菌中分 相似文献
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为了提高阔叶猕猴桃的遗传转化效率,以阔叶猕猴桃叶柄为试材,通过根癌农杆菌介导法进行了遗传转化技术参数的研究。结果表明,叶柄预培养3～4d、用农杆菌悬浮液(D600nm值0.5)感染10min、共培养48h、共培养时在培养基中加入200μmol/L乙酰丁香酮处理可以获得较高的gus基因表达率。在供试的1200个叶柄中获得了49个抗性芽,转化频率为4.1%。对转基因抗性材料进行PCR检测和gus基因组织化学染色,证实了外源基因已整合到阔叶猕猴桃的基因组中,并得到稳定表达。 相似文献
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根癌农杆菌介导的抱子甘蓝转基因技术初探 总被引：1，自引：0，他引：1
根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和发根农杆菌(A. rhizogenes)介导的转基因技术已广泛地应用于十字花科芸薹属(Brassica)蔬菜。然而，在抱子甘蓝上仅有发根农杆菌的报道，且转基因频率很低〔1，2〕，尚未见到根癌农杆菌转化的报道。本试验试图探讨根癌农杆菌介导的转基因技术在抱子甘蓝上应用的可行性，为今后导入外源基因奠定基础。1 材料与方法试验在阿德雷德大学园艺系组织培养实验室进行，所用品种Roger和Troika为当地的优良品种。实验所用的外植体为幼苗的下胚轴，均通过以下方法获得：种子消毒后置于含1/2MS培… 相似文献
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提高农杆菌介导番茄遗传转化效率的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
利用农杆菌介导法对番茄进行遗传转化,比较了不同的农杆菌种类、农杆菌侵染时间、外植体种类及番茄品种对农杆菌侵染效率的影响.转化后得到的再生植株,利用PCR、Southern杂交检测GUS基因是否整和进入基因组.结果表明:农杆菌介导法成功介导了GUS基因导入番茄.农杆菌EHA105侵染番茄的效率明显高于LBA4404,侵染时间3 min较好.子叶外植体的转化明显优于下胚轴,黄色串珠樱桃番茄的遗传转化效率高于中蔬5号;优化的转化条件可以使番茄获得较高的遗传转化效率. 相似文献
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用不同的野生型根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）T37，B6，TFA16YE和发根农杆菌（Agrobacteriu．rhizogenes）TR105，15834，A4对马铃薯普通栽培种品种“甘农薯1号”的块茎圆片、茎段采用两步侵染法和一步侵染法进行了双转化实验。结果表明：两步侵染法效果较好，并得到了分化苗。试验证明，Ti和Ri质粒上的T-DNA可进入同一个受体细胞并进行表达，2种T-DNA上的不同激素在受体细胞中表达可以使受体细胞建立新的激素平衡，从而提高了转化细胞分化苗的能力，可以克服野生型农杆菌难以分化苗的缺点，为今后用野生型质粒作载体以及同时向一个受体细胞中转移多个基因打下了基础；此外不同菌种组合的效果不同，分化植株的形态差异也很大；试验还发现，T-DNA在整合到受体细胞染色体上时，可以引起某些基因发生突变。因此，今后只要用双转化法能使野生型农杆菌双转化的细胞分化出正常植株，则野生型农杆菌就可以作为一种重要的诱变源为育种提供较多的变异。 相似文献
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自1989 年发现了菊花对农杆菌浸染的敏感性,农杆菌介导转化法已成功应用于菊花花色、花期、株形、抗病虫及耐非生物胁迫等性状的改良中。从影响菊花遗传转化效率的农杆菌菌株类型、外植体选用、辅助添加剂的使用以及抗生素筛选等几方面阐述了菊花遗传转化技术研究的进展和应用现状,对菊花分子育种性状改良和重要功能基因发掘等研究进展进行综述,并对菊花转化效率改善途径的探索和环境友好型转基因新技术研发前景提出展望,以期为菊花分子育种提供参考。 相似文献
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以农杆茵和转化的甜瓜组织为试验材料,通过组织化学染色法,来研究GUS基因在农杆菌和甜瓜组织中的表达.结果表明,含有GUS基因的农杆茵和甜瓜愈伤组织都能被染成蓝色,而不含有GUS基因的农杆菌和甜瓜愈伤组织没有被染色,因此在检测转基因植株时,可以减少或避免假阳性的出现,为植物的转化奠定了坚实的基础. 相似文献
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培育苹果转基因植株的研究 总被引：15，自引：2，他引：13
采用“皇家嘎拉”苹果白化面外植体，通过根癌农杆菌ＥＨＡ１０５介导，证明了培养基中存在生长素可促进基因转化，转化效率比对照提高２倍以上。将外植体下ＥＨＡ１０１株系在含有生长素的２基中共培养，获得了转基因植株。采用ＰＣＲ分析和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ核酸杂交，确定ＧＵＳ基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ基因在杆株体内的表达。 相似文献
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沙田柚遗传转化的探讨 总被引：6，自引：0，他引：6
采用含ｎｏｓ基因和人工合成柞蚕抗菌肽Ｄ基因ＡＰ－Ｄ基因的根癌农杆菌对沙田柚外植体进行转基因研究，与根癌农杆菌共培养产生的芽，苗经Ｋｍ敏感性筛选，获得了若干转基因植株，并对这些植株进行了报告基因ｎｏｓ表达的电泳检测，同位素标记、ＡＰ－Ｄ基因为探针的点印迹杂交，外源ＡＰ－Ｄ基因的ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｎ杂交。结果显示，报告基因ｎｏｓ、抗菌肽Ｄ基因已转入沙田柚植株细胞中。 相似文献
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根癌农杆菌介导蓝猪耳转化系统的建立 总被引：7，自引：0，他引：7
通过对影响根癌农杆菌介导蓝猪耳转化效果各种因素的研究, 建立了蓝猪耳高效稳定的遗传转化系统。研究结果表明, 农杆菌侵染叶片外植体效率最高; 外植体预培养不利于农杆菌的侵染; 乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化蓝猪耳的效率。另外, 菌液浓度、侵染和共培养的时间及再生的途径等均对转化效率有一定的影响。叶片外植体与农杆菌共培养后, 经过抗性芽的诱导、根的再生, 70 d左右就可以获得抗性苗。抗性植株经GUS染色、PCR分析和Southern blot检测, 外源基因已经整合到蓝猪耳基因组中, 转化频率为7%～8%。 相似文献
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《中国瓜菜》2019,(12)
遗传转化是实现基因功能验证和基因快速转育的重要手段,但目前甜瓜的遗传转化依旧存在众多技术难题。笔者利用野生型发根农杆菌K599侵染甜瓜'E31',成功诱导甜瓜产生了不定根。借助该技术,将含有GUS基因和EGF基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,利用转化后的农杆菌侵染甜瓜'E31',成功诱导出了不定根。PCR检测结果表明,新生不定根的阳性率达到100%。通过GOS染色和激光共聚焦显微镜检测,在不定根中检测到GOS基因和EGFP基因的大量表达,成功实现了外源基因在甜瓜新生不定根内过表达。该方法周期短、操作方便、转化率高,可实现基因功能的快速验证,为甜瓜根系抗病抗逆方面的研究提供技术支持。 相似文献
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抗生素对甜瓜植株再生的影响 总被引：9，自引：0，他引：9
在建立以农杆菌介导的表达ACC脱氨酶基因的甜瓜遗传转化体系过程中，进行了抗生素影响甜瓜植株再生试验。结果表明：卡那霉素对甜瓜愈伤组织、不定芽分化及生根均有明显的抑制作用，75mg/L的卡那霉素可作为今后甜瓜遗传转化筛选转化体和非转化体的临界浓度；200－400mg/L浓度范围内的氨苄青霉素能够很好地抑制农杆菌过度生长造成的污染，但对甜瓜植株再生的影响较小。 相似文献
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超声波辅助发根农杆菌对黄瓜遗传转化的影响 总被引：12，自引：1，他引：11
由于超声波处理可增加农杆菌与外植体之间的接触面积, 提高农杆菌对外植体的转化频率。本试验用野生型发根农杆菌A4 菌株感染黄瓜无菌苗的子叶和下胚轴, 建立了黄瓜的发根遗传体系。并对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮等影响因素进行了优化。 相似文献
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高渗处理对根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,EHA105菌株)介导法,对平菇(Pleurotus ostreatus)菌丝体遗传转化的最佳试验条件进行研究,结果表明:当平菇菌丝体与甘露醇和山梨醇的混合液预处理20min,且与农杆菌共培养60min时,转化效率高且用时较少。经PCR和Southern Blotting检测表明,转移DNA(transferred DNA,T-DNA)中的潮霉素抗性基因hph已整合到转化子基因组中。 相似文献