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1.
DNA分子标记是继形态标记、细胞标记和生化标记之后发展起来的一种新的较为理想的遗传标记，在甘蔗育种方面发挥了重要作用。DNA分子标记包括：限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、简单重复序列(SSR)、染色体或基因组原位杂交(GISH)、荧光原位杂交(FISH)等。本文对植物DNA分子标记的原理、特点及其在甘蔗种属鉴定、遗传多样性分析、分子图谱构建及病害分子诊断等方面的研究进行简要的概述。 相似文献
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以实时荧光定量PCR技术检测转基因玉米MON88017 总被引：2，自引：0，他引：2
根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的标准曲线。检测了5个已知MON88017含量(0.01%、0.05%、0.10%、0.50%、1.00%)的混合样品中的转基因含量,结果表明检测底限可以达到19~30个阳性拷贝。该研究建立的实时荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强。 相似文献
3.
《分子植物育种》2021,19(18):5917-5932
水稻的香味是一种重要的食味品质性状,是水稻第8号染色体Badh2基因突变导致其功能缺失,引起芳香活性物质2-乙酰-1-吡咯啉(2AP)的积累从而产生香味。Badh2基因至少存在18个等位突变位点,利用等位突变位点辅助培育香稻被证明是一个有效手段。传统Sanger测序法和SSR分子标记PCR电泳分析进行位点检测效率较低。为了开发效率更高的检测方法,本研究利用了实时荧光PCR检测技术对广西地方常见的水稻突变荧光分子标记。对40份广西地方香稻的Badh2基因进行直接测序,发现这些香稻的Badh2基因主要存在两种突变,第4、5外显子806 bp缺失(badh2-E4-5.1)和第7外显子8 bp缺失(badh2-E7)。针对这两种突变类型设计实时荧光PCR检测方法,并对已测序的40份香稻进行验证,实时荧光PCR检测的准确性达到93.75%。进一步对50份地方品种进行香味基因型分型鉴定,其中24份香稻为badh2-E4-5,22份香稻为badh2-E7。本研究针对广西地方香稻品种的主要两种突变类型,设计开发了这两种等位基因的荧光分子标记,适用于香稻基因型的鉴定筛选,对香稻育种具有重要的现实意义。 相似文献
4.
双链DNA(dsDNA)定量分析是植物分子生物学研究的基础,对基因型分析尤为重要。本研究以λ噬菌体dsDNA为标准样品,建立了荧光定量标准曲线,探讨荧光核酸定量通量性及其与紫外法定量的差异,并分析荧光染料在基因分型中的应用。结果表明,荧光染料能够对dsDNA进行高效微量定量分析(1.1ngmL-1),但因鉴定核酸的浓度较低,对小麦籽粒和叶片全基因组DNA定量时稀释倍数较大,易增大浓度误差。降低反应体系量导致标准曲线决定系数降低,影响测量准确性。精确定量dsDNA浓度时,总反应体系应大于200mL;对PCR产物进行基因分型时,总反应体系应不低于40mL。相同DNA模板浓度下,FLUOstar平台可以对抗秆锈病基因显性标记csSr32#1(Sr32)和IB-267(Sr50)的PCR产物进行基因型分型,判断准确率为100%。对特异性强且等位基因片段差异大(≥100bp)的共显性标记,如抗叶锈病基因标记We173(Yr26)等,用荧光染料同样可以进行基因分型。与琼脂糖凝胶电泳相比,荧光染料鉴定等位基因价格略高,但方法简单、准确快速、重现性好,可用于分子育种中世代材料快速筛选。 相似文献
5.
外源钙对贮藏期马铃薯细胞膜及过氧化物酶的影响 总被引：2，自引：1，他引：1
以马铃薯品种克新1号为实验材料,利用0.5％和1.0％Ca(NO3)2进行采后浸钙处理,分析其对细胞膜的相对透性及过氧化物酶(POD)活性的影响。结果表明：钙处理能有效降低相对电导率和丙二醛(MDA)含量,提高过氧化物酶活性,从而增加马铃薯块茎的耐贮藏性,其中以1.0％Ca(NO3)2处理的效果最好。 相似文献
6.
采用指纹电荷(chargefingerprint)法研究了海南岛五指山土壤指纹铝(指纹电荷法测定的CECt由Ca2 和Al3 两部分组成,其中Al3 被称为指纹铝)和交换性酸(用氯化钾交换-中和滴定法测定)之间的关系。结果表明:海南岛五指山土壤交换性酸主要由交换性铝构成,土壤交换性氢含量不高。在此项研究所设定的不同的土壤pH范围内(7.0、6.4、5.8、5.2、4.6、4.0),土壤中指纹铝随土壤pH的降低而增加且当pH≤5.2时,土壤指纹铝含量随土壤pH的降低迅速增加。当pH≤5.2时,交换性氢、交换性铝、交换性酸都与指纹铝含量呈极显著正相关;pH≥5.8时,交换性氢、交换性铝、交换性酸均与指纹铝含量不相关。因此认为,pH在5.2与5.8之间的某一pH值为土壤中交换性铝和指纹铝数量的突变点。同时可以将土壤交换性酸及其组成作为研究土壤中铝行为特征及预测土壤酸化对土壤电荷保持能力影响的一个重要指标。 相似文献
7.
猪流感病毒M基因核酸探针的制备与应用 总被引：5，自引：0，他引：5
以地高辛(DIG)标记猪流感病毒(SIV)M基因的保守片段制成核酸探针,与H1及H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA、猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)的cDNA、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的DNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA、猪伪狂犬病(PRV)的DNA进行斑点杂交,以检测探针的特异性,结果该探针仅与H1及H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA杂交呈阳性,与其余病毒杂交呈阴性;敏感性试验显示,探针最低能检出约5 pg的H3亚型的SIV RT-PCR产物.应用该探针对35份疑似SI临床病料进行检测,结果检出9份阳性,与RT-PCR检测结果一致.本研究结果表明,建立的DIG标记的核酸探针特异性强,敏感性高,适合于对SI的诊断和流行病学调查. 相似文献
8.
利用35对SSR引物分析40对不同的甜菜单胚细胞质雄性不育系与保持系的遗传多样性。结果表明：每对引物扩增得到的条带数在2～12之间,有效等位基因数(Ne)、Shannon’s信息指数(I)、Nei’s基因多样性指数(H)的平均值分别为2.306、0.891和0.519。采用类平均法(UPGMA)进行聚类分析并计算遗传距离。聚类结果显示,除供试材料22与其他材料的遗传距离较大,亲缘关系较远,单独为一类群;其余的供试甜菜品系可分为4个类群;共有14对甜菜单胚细胞质雄性不育系与保持系完全聚合在一起,说明经过回交后,不育系和保持系的细胞核基因组之间几乎达到一致,纯度较高,今后可以直接应用于甜菜育种中;另有26对纯度较低,遗传距离较大,还需要继续进行回交至纯合。80份供试材料的遗传距离最大为0.462,最小为0.120。14对聚合在一起的原配组中的不育系之间遗传距离各不相同,今后可选择14对中遗传距离较大的不育系和其异型保持系配制二元不育系,用于杂交种中的母本。加大培育出甜菜新品种的可能性,同时减少了育种工作中的盲目性,有效的提高了甜菜育种效率。 相似文献
9.
林木研究中常采用的分子标记技术主要包括RFLP、RAPD、AFLP、SSR及ISSR等。本文综述了这些分子标记技术的原理、优缺点。归纳总结了分子标记在木兰科植物中的应用研究进展:(1)利用RAPD、RFLP、cpDNA基因系列测定(psbA-trnH、atpB-rbcL、matK、ndhF)等分子标记在分子水平上对一些群体、个体进行了亲缘关系和分类研究;(2)利用RAPD、SSR和ISSR标记对一些群体、个体进行了遗传结构和遗传多样性研究;(3)采用DAF和RAPD获得了厚朴的DNA指纹图谱。分子标记在木兰科植物的其它方面的应用还很少。今后,除了继续对上述方面进行深入系统的研究外,还应充分运用分子标记技术,开展木兰科植物的分子遗传图谱、分子标记辅助选择育种、保育生物学等方面的研究。 相似文献
10.
DNA分子标记广泛用于生物研究的许多方面。本文简要介绍了RFLP、RAPD、AFLP、SSR及ISSR等几种目前常用分子标记的原理,归纳总结了分子标记在银杏中的应用研究进展。(1)获得了2个雄性特有的RAPD标记和2个雌性特有的AFLP标记,为银杏的早期性别鉴定及相关基因克隆奠定了基础;(2)采用RAPD标记和ISSR标记对我国部分栽培品种进行了分子鉴别和分类的研究,编制了一些品种的DNA指纹检索表;(3)利用RAPD和ISSR标记对一些群体、个体及栽培品种或变异类型进行了遗传分化和遗传多样性研究,结果发现银杏具有较高的遗传多样性,群体间、个体间、栽培品种及类型间都存在不同程度的遗传分化;(4)利用ISSR标记对一些个体的遗传杂合性进行了研究,结果显示个体的平均杂合率为43.53%;(5)构建了包含62个RAPD标记、19个连锁群的银杏分子遗传图谱;(6)探索了银杏优先保护种群的确定。分子标记在银杏其它方面的应用还很少。今后,除了继续对上述方面进行深入系统的研究外,还应充分运用DNA分子标记技术,开展银杏的分子标记辅助选择育种、种质评价与鉴别及保育生物学等方面的研究。 相似文献
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Revital Sabban-AminEduard Belausov Edna Pesis 《Postharvest Biology and Technology》2011,62(3):295-304
‘Granny Smith’ apples are highly susceptible to superficial scald, a symptom of chilling injury. For many crops, low temperature storage results in oxidative stress and chilling injury, caused by increased production of superoxide anions which in turn leads to the generation of other dangerous reactive oxygen species (ROS). Application, prior to cold storage, of low oxygen (LO2, <0.5%) atmospheres, ethanol (<2% vapour) or 1-methylcyclopropene (1-MCP, 0.5 μL L−1) at 20 °C, was effective in reducing superficial scald in fruit following 24 weeks of cold storage. ROS levels were measured by confocal laser-scanning microscopy of apple peel treated with the fluorescent probe 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate. In control fruit, ROS levels increased during cold storage and shelf-life and were very high after only 8 weeks, whereas in 1-MCP-, ethanol- and LO2-treated fruit, ROS levels remained low throughout storage. Gene-expression levels of ROS-scavenging enzymes were induced by the various pretreatments: catalase (MdCAT) was induced by LO2 treatment, whereas Mn superoxide dismutase (MdMnSOD) was induced by 1-MCP treatment. Polyphenol oxidase (MdPPO) gene expression levels were associated with scald symptom development and were highest in control fruit. Ethylene levels and expression of ethylene biosynthesis genes were correlated with α-farnesene levels and <alpha>-farnesene synthase (MdAFS) gene expression in the variously treated fruit. Accumulation of the α-farnesene oxidation product, 6-methyl-5-hepten-2-one (MHO), was highest in control fruit after 8 weeks, in accordance with ROS accumulation. The LO2 pretreatment mechanism might involve production of anaerobic metabolites, causing a delay in ethylene and α-farnesene biosynthesis and oxidation; this is different from the mechansism of action of 1-MCP, even though both consequently reduce ROS accumulation and scald symptoms. 相似文献
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竞争性等位基因特异性PCR分型技术在植物抗病遗传育种中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)广泛分布在植物基因组中,位点丰富,易于实现高通量分析。竞争性等位基因特异性PCR(kompetitive allele specific PCR,KASP)是一种对特定位点处的SNP以及插入和缺失(insertion-deletion,In Dels)进行双等位基因分型的技术,具有稳定性好、准确性高、无需合成特异荧光探针、检测成本较低和高通量等优点,近些年在医学和农学领域都有广泛的应用。本研究介绍了KASP技术的原理,综述了该技术在小麦等植物抗病遗传育种中的应用,并讨论了该技术的优缺点。 相似文献
13.
[目的]研究二倍体野生棉与四倍体栽培棉间的遗传亲缘关系,进一步探索各棉种间的起源与进化.[方法]以5个二倍体基因组的代表种B1(异常棉)、C1(斯特提棉)、E2(索马里棉)、F1(长萼棉)以及G1(比克氏棉)的基因组DNA(gDNA)为探针,以2个四倍体栽培种(陆地棉中棉所16、海岛棉新海7号)有丝分裂中期染色体为靶DNA,进行了基因组原位杂交(Genomic in situ hybridization,GISH)分析.[结果]以B1、E2和F1gDNA为探针时,杂交信号主要分布在2个栽培种较长的13对A亚组染色体上;各产生3对较强的GISH-NOR信号,其中1对分布在较长的A亚组上,2对分布在较短的D亚组上,其GISH-NOR信号强度与分布情况与以D基因组棉种为探针时相似.说明二倍体B、E、F基因组与四倍体棉A亚基因组具有较高的同源性,亲缘关系更近.这一点与它们的地理分布情况相符;而它们基因组中的45S rDNA重复序列与二倍体D基因组的45SrDNA重复序列同源性较高.C1和G1中以gDNA为探针时,杂交信号分布在2个栽培种全部26对染色体上,无法区分开A或D亚组染色体,都有3对较强的GISH-NOR信号.这一现象与D基因组拟似棉(D6) gDNA为探针的GISH相似,表明二倍体C和G基因组与四倍体棉的A和D亚基因组均具有较高的同源性,或者C和G基因组同时含有A基因组(或其他非洲棉基因组)和D基因组成分,进一步证实了其基因组成分的杂合性;而它们基因组中的45S rDNA重复序列同属D基因组类型.[结论]这些发现可为棉花杂交育种和棉属起源与演化研究提供有用信息. 相似文献
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量子点荧光探针是近几年发展起来的一种新型荧光标记物,量子点在生命科学的应用已成为人们研究的热点。但将量子点荧光探针用于食品安全检测的研究还处于起步阶段。简要综述量子点的光学特性、制备方法及其在食品安全检测方面的研究进展和应用前景。 相似文献
15.
Abscisic acid, gibberellin and cell viability in cereal aleurone 总被引：3，自引：0，他引：3
Paul C. Bethke Angelika Fath Yoav N. Spiegel Yong-sic Hwang Russell L. Jones 《Euphytica》2002,126(1):3-11
The aleurone layer of cereals is a secretory tissue whose activity is regulated by abscisic acid (ABA) and gibberellins (GAs).
Whereas GA triggers enzyme synthesis and secretion and initiates a program that culminates in cell death, ABA prevents enzyme
production and cell death. Reactive oxygen species (ROS) are key players in regulating cell viability and GA sensitizes the
aleurone cell to ROS. Sensitivity of GA-treated cells results in part from a reduction in steady-state amounts of mRNAs encoding
enzymes that scavenge ROS. mRNAs encoding catalase, superoxide dismutase and ascorbate peroxidase are almost undetectable
in aleurone layers 24 h after incubation in GA. For layers incubated in ABA, however, the amounts of these mRNAs increase.
Western blotting and enzyme activity assays confirm that GA but not ABA reduced the amount and activity of ROS scavenging
enzymes (Fath et al., 2001b). Substantial amounts of ROS are produced by enzymes engaged in lipid metabolism, and by the electron
transport chain in the mitochondria. Aleurone layers contain abundant stores of triglycerides and ROS are produced as these
lipids are rapidly converted to sugars. We hypothesize that the ROS produced in GA-treated aleurone cells bring about cell
death by disrupting the plasma membrane. Aleurone cells incubated in ABA, on the other hand, are better able to maintain redox
balance. ABA does not initiate rapid triglyceride metabolism, and the activities of ROS-scavenging enzymes remain high in
ABA-treated cells. We conclude that GA initiates a metabolic cascade in aleurone cells that results in death from ROS. ABA
maintains viability by keeping ROS under control.
This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date. 相似文献
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拟南芥长链脂肪醇氧化酶(AtFAO3)在抗病防卫反应中的作用分析 总被引：1，自引：0，他引：1
长链脂肪醇氧化物酶(FAO)基因编码一个与膜结合,包含黄素,产生H_2O_2的长链脂肪醇氧化酶.在拟南芥基因组中包含4个FAO同源基因.然而,拟南芥FAO在响应非生物和生物环境胁迫中起何种作用还不得而知.本研究中,我们分析了拟南芥AtFAO3在植物防卫病原细菌Pseudomonas syringae pathovar(pv.)tomato strain DC3000(Pst DC3000)中的作用.拟南芥原生质体细胞瞬时表达AtFAO3偶联GFP融合蛋白表明,AtFAO3定位于细胞膜.与野生型植株相比,拟南芥AtFAO3基因T-DNA插入突变体Atfao3在正常条件叶片中H_2O_2含量下降,在氧胁迫或生物胁迫下积累活性氧含量减少.接种病原细菌Pst DC3000后,与野生型植株相比,Atfao3突变体体内细菌繁殖数量增加,叶片病害症状加重,防卫相关基因PR1、PR2和PAL表达减弱.我们基于以上T-DNA突变体分析结果表明,AtFAO3在植物对病原细菌防卫中起重要作用. 相似文献
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Serina M. DeSalvio Brianna L. Cheek Robert N. Vaughn Olufemi J. Alabi John E. Holme Nisha Jain David M. Stelly 《Plant Breeding》2023,142(2):238-246
We report the development of a novel and more efficient, rapid, cost-effective and simple technique than current PCR-based identification methods for screening cotton (Gossypium hirsutum) plants for the presence of cotton leafroll dwarf virus (CLRDV). This protocol takes advantage of the PACE (PCR Allele Competitive Extension) system and uses PCR amplification of cDNA, coupled with sequence-specific fluorescent probes to differentiate between infected and uninfected cotton plants. This procedure has the potential for application in detection of other RNA viruses in a variety of other crops, by using primers specific for the RNA-dependent RNA polymerase (RdRP) gene and a widely conserved housekeeping gene in the host organism; in this case, the G. hirsutum polyubiquitin gene (GhUB). 相似文献
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利用外源信号物质氟草敏(norflurazon)和2,6-二甲氧基对苯醌(2,6-DMBQ)分别诱导肉苁蓉种子萌发与吸器形成,研究它们在此过程中对过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性及活性氧(ROS)含量的影响。结果表明：在诱导肉苁蓉种子萌发时,经norflurazon处理0~168 h后,种子中POD和CAT活性呈现显著升高的变化趋势,种子中ROS含量显著升高。在诱导肉苁蓉种子萌发体吸器形成时,经2,6-DMBQ处理0~72 h后,肉苁蓉种子萌发体中POD和CAT活性呈现显著升高的变化趋势,萌发体中ROS含量显著升高。表明在诱导肉苁蓉种子萌发与吸器形成过程中,外源信号物质norflurazon和2,6-DMBQ能影响POD、CAT活性及ROS含量的变化。
相似文献19.
植物中活性氧的研究进展 总被引：3，自引：1，他引：2
为了增强对ROS功能的认识,增加对ROS在橡胶树死皮病中的作用以及对橡胶树高产分子机制的了解,本研究归纳了ROS产生和清除途径、影响其代谢的因子、ROS在植物中的功能以及ROS检测方法等,着重分析了橡胶树乳管细胞中的ROS产生和清除体系,指出线粒体也是乳管细胞中产生ROS的重要细胞器,并在最后做出展望。 相似文献
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为对转基因玉米MIR162的进口实行监测、规范转基因玉米在国内市场中的流通,建立一种转基因玉米MIR162准确快速的检测方法,通过设计转基因玉米MIR162品系特异性序列的引物和探针,摸索和优化多重荧光PCR体系和参数,开发建立多重实时荧光PCR TaqMan-MGB杂交探针标记法快速鉴定转基因玉米MIR162。结果表明,转基因玉米MIR162品系标准品和平行样品中内标基因和品系特异性基因均出现明显扩增曲线,其他转基因玉米品系标准品仅内标基因有扩增曲线,空白对照无扩增曲线,说明该TaqMan-MGB探针对转基因玉米MIR162品系具有扩增特异性。该方法可作为鉴定筛查转基因玉米MIR162品系及其转化体成分的有效方法,用于规范管理转基因产品在市场上的流通。 相似文献