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《分子植物育种》2016,(1)
在转基因植物及其产品的成分检测中,内参照基因(endogenous reference gene)起着重要的作用,木薯内参照基因的研究是转基因木薯成分定性PCR和定量PCR检测的基础。本研究选择木薯的亚麻苦苷酶(linamarase,LAM)和Polyubiquitin(PUBQ)基因为研究对象,运用定性PCR的方法在22种木薯的不同品种中进行稳定性分析,在12种大戟科其它植物、20种非大戟科植物及五类主要转基因作物的混合样品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中对LAM2和PUBQ1定性PCR引物进行特异性检测分析及灵敏度检测分析。结果显示:LAM2和PUBQ1引物在木薯的不同品种中均能得到稳定性扩增;在12种大戟科其它植物、20种非大戟科植物能够进行特异性扩增,没有发现非特异性扩增产物出现;LAM2在五类主要转基因作物的混合样品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中也没有非特异性扩增产物出现,而PUBQ1在五类主要转基因作物的混合样品(玉米,大豆,水稻,棉花和油菜)中却有很多的非特异性扩增产物出现。灵敏度检测发现定性PCR LAM2检测方法的灵敏度达到质量百分含量0.01%,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测结果表明LAM2的灵敏度可达到0.001~0.000 1 ng/μL。选择部分品种的PCR扩增产物进行测序,序列分析表明LAM2在不同品种的木薯的基因组DNA均可以扩增到293 bp的核苷酸片段,比对分析表明所获得的木薯不同品种中LAM2 PCR扩增片段的核苷酸序列一致没有发现变异位点。研究结果表明LAM2引物扩增系统初步符合内参照基因的种内一致性,稳定性,种间特异性的特点,灵敏度检测的要求可应用于转基因木薯成分定性和定量PCR检测。 相似文献
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<正>据上海农科院有关人士透露,该院通过几年努力,完成了转基因生物检测技术方法标准方面的研究和转基因检测标准体系的建设,填补了我国在转基因农产品的定性、定量检测技术方面的空白,很大程度上满足了我国农 相似文献
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通过定性PCR扩增了转基因水稻M12转化体特异性片段和水稻内标基因(sps)片段, 将PCR产物酶切连接后构建到T载体, 得到适于转基因水稻M12品系特异性PCR检测的质粒分子pM12, 建立了事件特异性定性、定量PCR检测方法。定性PCR结果表明, 本方法可特异性检测出M12, 检测限可达100拷贝单倍体水稻基因组; 定量PCR结果表明, M12和sps定量PCR标准曲线R 2为0.998和0.997, 扩增效率为95.3%和108.4%, 重复性分析标准偏差范围为0.043~0.276, 定量极限和检测极限可达100和10拷贝。对转基因含量为1.0%的混合样品定量结果的相对偏差在8.0%以内。本研究建立的方法可用于转基因水稻M12及其加工产品成分的检测。 相似文献
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<正>近日,由浙江省农科院承担的省重大科技专项农业项目"转基因产品定量、特异性检测及安全性评价技术研究"通过了验收。项目建立了番茄、大豆等4种农产品高效核酸提取方法,并初步建立了转基因生物的安全数据库。对于转基因 相似文献
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作物生物技术产业化最新进展和未来走向 总被引：6，自引：0，他引：6
被认为遗传改良很有希望的植物基因工程将对食物、饲料和纤维安全做出巨大贡献。近20年来,随着转基因技术取得不断进展和日臻成熟,一大批抗病、抗虫、抗除草剂等转基因玉米、棉花、大豆、油菜、番茄和马铃薯等品种培育成功,全球转基因作物产业化发展迅速。我国在转基因作物的研究和产业化方面取得的进展较快。目前已有10余种转基因植物进入田间试种,有6种转基因植物被批准商品化生产。尽管21世纪作物生物技术产业化发展还面临诸多问题,受到一定限制。但进入21世纪,农作物基因工程无论是研究还是产业化的前景一定会更好,发展步子会更快。…… 相似文献
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<正>近日,由浙江省农科院承担的浙江省重大农业科技项目"转基因产品定量、特异性检测及安全性评价技术研究"通过了验收。项目建立了番茄、大豆等4种农产品高效核酸提取方法,并初步建立了转基因生物的安全数据库,使该省转基因产品风险管理逐步与国际接轨。 相似文献
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中国已为抗虫水稻等7种转基因作物发放安全证书 总被引：1，自引：0，他引：1
<正>本刊讯截至目前,中国已为抗虫棉花、抗病番木瓜等7种转基因植物批准发放了农业转基因生物安全证书。此外,还批准了转基因棉花、大豆、玉米、油菜等4种作物的进口安全证书。为了加强农业转基因生物知识科普宣传,促进公众科学理性对待转基因技术及产品,农业部农业转基因生物安全管理办公室、中国科学 相似文献
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转基因植物中外源基因的整合拷贝数是影响外源基因表达水平及遗传稳定性的重要因素之一。本研究利用实时荧光定量PCR技术并以番茄抗坏血酸过氧化物酶apx(ascorbate peroxidase)基因和光诱导的早期蛋白elip(early light inducible protein)基因为内参开展对12株转基因樱桃番茄外源基因拷贝数的检测。研究结果表明:常规番茄使用的内参基因apx在樱桃番茄中可能以多拷贝形式存在;以elip基因为内参检测到转基因植株内整合的拷贝数为0~20不等,其中4株在普通PCR检测中存在假阳性,且80%的转基因植株发生了基因重排现象。 相似文献
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主要农作物种子转基因检测方法及应用 总被引：3，自引：0，他引：3
每年我国进口大量的转基因大豆、玉米等农产品,目前也正在研发多种转基因农作物新品种。按照我国和国际有关法律法规,需对农作物的种子和加工制品进行转基因成分检测,确定为非转基因产品或将转基因成分标识后才可以进入市场流通,对于正在研发的转基因新品种也需通过检测进行监管。对我国主要农作物种子转基因检测方法的实际应用进行了综述,包括种子产品抽样、核酸定性、定量检测(通用元件检测、品系特异性检测等)、蛋白定性检测(试纸条快速检测)等方法。旨在为有关农作物种子生产、经营、产品加工和管理及研发工作者提供相关技术信息。 相似文献
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利用花粉管通道法将外源质粒DNA注入棉花的改良方法 总被引：4，自引：1，他引：4
我国从１９７８年即开始应用花粉管道法将外源ＤＮＡ导入植物,目前已在棉花、水稻、油菜、甜瓜等作物中取得成功［１］。由于棉花组织再生较困难,一些转化法（如农杆菌介导法）在棉花上不易成功,而花粉管通道法避开了再生的障碍且容易操作,因而近几年利用花粉通道法将... 相似文献
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综述了转基因植物的DNA成分定性、定量检测,基因芯片检测技术的原理和特点,初步探讨未知转基因核酸成分检测技术研究状况,最后指明转基因检测技术的发展依赖于现代分子生物学研究技术的发展,并朝着低成本、自动化、高灵敏度、高特异性、高通量的方向发展。 相似文献
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随着科学技术的发展,近20年来,包括小麦、玉米、水稻在内的主要农作物转基因研究得到了突飞猛进的发展,转基因棉花、大豆、玉米和油菜已经在世界各地广泛种植,种植面积逐年扩大。在提高经济效益的同时,为了防止作物间基因漂移,打击非法种植、销售转基因作物,维护消费者的知情权和选择权,对农作物进行转基因检测变得尤为重要。 相似文献
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<正>植物转基因技术是当今国际农业生物技术研究开发和竞争的热点。虽然目前美国已经开展了转基因大豆、玉米和棉花的商业化种植,并大量出口,但只批准了一种抗除草剂的转基因水稻作商业化生产。在美国以外,没有国家批准种植转基因水稻,也不准许任何转基因水稻进入市场。这也是美国稻农至今仍然不愿意种植转基因水稻的原因。但是,目前美国稻农正遭遇转基因之痛。 相似文献
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转cry1Aa基因抗虫棉整合结构解析及转化体特异性检测方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
【目的】cry1Aa基因是2011年本实验室在我国棉花商品种子中发现的1种未经批准的转基因成分,本研究旨在通过整合结构解析,建立特异性检测方法,对市售棉种进行初测,明确该外源基因在我国棉种中的存在情况。【方法】通过Genome walking、长链PCR分离获得了转cry1Aa基因棉花转化体(定名为NN6转化体,简称NN6)的外源基因整合结构,同时基于插入位点基因组及外源DNA连接区,建立了NN6转化体特异性的定性聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法和实时荧光定量PCR方法。【结果】NN6整合结构主要包括cry1Aa、aad和Npt II基因,插入棉花基因组7号染色体37 169 450位,产生91 bp基因组缺失;所构建的定性PCR检测方法能特异、快速地对棉花单株和种子单粒中NN6转化体的纯/杂合状态进行鉴定,实时荧光定量PCR检测限为44拷贝,能满足国内外对转基因标识的需要;对含有cry1Aa基因的3个市售棉种进行检测,其纯合度分别为1.51%,5.21%和21.09%。【结论】本研究解析了NN6的整合结构,并建立特异性检测方法,为我国转基因棉花新品种选育及转基因安全管理提供技术手段。 相似文献
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为进一步提升转基因水稻的定量检测效率,推动转基因定量标识制度的实施,对转基因水稻品系‘Bt汕优63’成分进行微滴式数字PCR法定量检测研究。基于转基因水稻品系‘Bt汕优63’的外源插入片段和水稻蔗糖磷酸盐合成酶基因SPS,选择、设计和合成高效特异性的内外源基因引物探针,用于微滴式数字PCR法扩增‘Bt汕优63’的内源基因和品系特异序列。引物探针优化实验表明,SPS60-F/R/P和‘Bt汕优63’品系基因-F/R/P适用于dd PCR双通道法定量检测‘Bt汕优63’成分。准确度验证试验表明,测得值与标准值相近,偏差分别为0.03、0.15、0.15、0.03。测得值的SD介于0.08~0.48之间,RSD介于4.86%~15.10%之间,小于欧盟要求25%,准确度较好。本研究建立的转基因水稻品系‘Bt汕优63’微滴数字PCR定量检测方法简便高效、准确度高,可用于农产品和食品中转基因水稻‘Bt汕优63’成分的定量检测。 相似文献