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《食用菌学报》2019,(4)
依次采用离子交换层析(DEAE-Sepharose、CM-Sepharose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300)从白灵侧耳(Pleurotus tuoliensis)菌渣中分离纯化得到一种漆酶,该酶比活力为176.1 U/mg,纯化倍数为90.7;采用EDMAN降解法和HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到该漆酶的N端和3条肽段序列分别为LHGTHAAIGP和PGVLVQGNKGDN、ISMSCDPNFTFS、DSIQIFAGQRYSFVLNAN;对该漆酶的理化性质进行研究,结果表明:该酶相对分子质量为7.0×10~4,最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.0,具有较好的酸耐受性,在pH 2～4孵育1 h后能保持90%以上的活性。Cd~(2+)、Pb~(2+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)和Fe~(2+)在1.25～10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用。 相似文献
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锦橙叶片POD动力学研究 总被引：5，自引：2，他引：3
以锦橙成熟春梢叶片提取过氧化物酶 (POD) ,分别测定了该酶的最适pH、最适温度及酶促动力学参数Km值和Vmax值 ,比较分析了常见几种POD抑制剂的作用程度。结果表明 :以邻甲氧基酚为底物 ,叶片POD的最适pH为 5 .0 ,最适温度为 32℃ ,Km值为 2 8.0 4mmol/L ,Vmax值为 147.83unit/s·gFW。在所测的 6种抑制剂 (K+、Pb2 +、CN-、Vc、硫脲及L 半胱氨酸 )中 ,CN-,Pb2 +,硫脲和L 半胱氨酸对POD表现出较强的抑制作用 ,K+对POD活性起促进作用。在一定浓度范围内 ,各种抑制剂的作用程度与其浓度具有极显著的相关性 相似文献
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云芝漆酶的分离纯化和理化性质及抗增殖活性 总被引：1，自引：0，他引：1
采用DEAE-cellulose, CM-cellulose和 Q-Sepharose离子交换层析和Superdex 75 凝胶过滤层析,从云芝(Coriolus versicolor)发酵液中纯化得到了一种漆酶, SDS-PAGE 电泳检测其为单一蛋白,分子量为67 kDa,N-端部分氨基酸序列为GIGPVADLTITNAAV.该酶可以催化氧化多种底物,其中对ABTS[ 2,2,-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate)]的催化作用最强.最适反应条件为40 ℃, pH 5.0,其活性可以被Cu2+ 激活,被Fe3+、Hg2+、Fe2+抑制.该酶对HIV-1逆转录酶、乳腺癌MCF7细胞和肝癌HepG2细胞均具有抑制作用,其IC50 分别为 1.5 μmol/L、 2.3 μmol/L 和 4.4 μmol/L. 相似文献
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以漆酶活性为指标,利用不同果皮为基质对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)固态发酵产漆酶的条件进行优化并对所产漆酶进行纯化,研究纯化后漆酶的酶学性质。结果表明:以柚皮为培养基质(5g柚皮、25mL水、20μL吐温-80),30℃固态发酵10d,糙皮侧耳产漆酶的活性最高,比活力为21800U/g;在该条件下将糙皮侧耳所产漆酶的粗酶液用硫酸铵沉淀、透析、浓缩、DEAE-纤维离子交换柱层析得到漆酶蛋白单一条带,SDS-PAGE检测蛋白相对分子质量约66000;该漆酶命名为Lac h2,其最适反应温度为60℃,最适反应pH值为4.5;在30～50℃,pH 4.5～6.0范围内稳定;金属离子Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Mg~(2+)对纯化的漆酶Lac h2的酶活力有促进作用而Ca~(2+)、Ag~+和Fe~(2+)对Lac h2的酶活力有抑制作用。 相似文献
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红芝组成型漆酶酶学性质的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
研究了温度、pH值、金属离子和抑制剂对红芝漆酶活性和稳定性的影响,测定该漆酶的Km值和Vmax。结果表明:红芝漆酶最适反应温度为60℃,低于50℃时较稳定;最适pH值为3.0,在pH 2.5~4.0的范围表现出较强的稳定性;Cu2+、Mn2+、Mg2+对酶活有促进作用,而Cr3+、Hg2+、Fe2+和抑制剂EDTA、DMSO、SDS对酶活有抑制作用;以愈创木酚为底物时Km值为0.13 mmol/L,最大反应速率Vmax为234 nmol.mL-1.min-1。 相似文献
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为了研究云芝(Trametes versicolor)发酵液中α-半乳糖苷酶的生理生化性质,并筛选提高该酶稳定性的共溶剂,将α-半乳糖苷酶在不同p H缓冲液、不同反应温度、不同金属离子溶液以及不同保护剂中孵育一定的时间,并测定酶活。结果表明,α-半乳糖苷酶的最适反应p H为3.0,最适反应温度为60℃;金属离子Pb2+和Fe3+对酶活性有较强的抑制作用,并随着浓度的升高抑制作用有所增强,Cd~(2+)、Cu2+和Hg2+致使α-半乳糖苷酶的活性降低20%~50%,Ca2+、Mg2+、Zn2+和Fe2+等离子对该酶的活性影响不明显;保护剂筛选结果显示,2 mmol·L-1甘露醇对该酶热稳定性的保护效果最好,其次是海藻糖、蜜二糖、棉籽糖、L-半胱氨酸、甘油和黄原胶等。 相似文献
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从兰州百合（Lilium davidii var. unicolor）鳞茎中分离纯化淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase,SP）并研究其酶学性质。结果表明：选用30% ~ 60%硫酸铵分级沉淀,SP 纯化倍数为14.78,回收率为23%,纯化的SP 亚基分子量约62.5 kD;SP 的最适反应体系缓冲液为pH 5.0 的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,最适反应温度为30 ℃,且体系中不适合加入酚类抑制剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）;SP 不耐强酸,在中性和弱碱性条件下活性稳定,pH < 5 时活性较弱;在合成方向上,SP 对葡萄糖–1–磷酸（G-1-P）的Km值为2.84 mmol · L-1;1 mmol · L-1 Mg2+、Ca2+对SP 活性有极显著的促进作用,K+、Zn2+也有一定的促进作用;大部分离子在高浓度（> 10 mmol · L-1）下抑制SP 活性,但Na+随着浓度的升高,对SP 活性的促进作用增强;10 mmol · L-1 的抗坏血酸可将SP 活性提高30%。 相似文献
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番茄EST-SSR标记PCR反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
应用L16 (44)正交实验优化番茄EST-SSR标记PCR反应体系.结果表明:20 μL体系中各反应物最适浓度为:DNA模板45 ng/20μL,引物0.75 μmol/L,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs0.4 mmol/L,Taq DNA酶0.5 U/20μL,且Mg2+对该标记反应体系影响最大.利用5对EST-SSR引物及P1、P2基因组DNA验证优化体系的可靠性,为该标记在番茄基因组分子标记辅助育种提供了试验依据. 相似文献
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黄斑病是严重影响糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)产量和品质的一种细菌性病害。本研究从山西省糙皮侧耳生产区采集的黄斑病样品中分离到病原菌菌株HB-1,对其进行了形态观察、分子鉴定与生理生化指标测定并研究了醋酸杆菌菌株BA15发酵液对该病原菌的防治作用。结果表明:该病原菌与公认的糙皮侧耳病原菌托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii)不同,为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);醋酸杆菌BA15发酵液对HB-1具有显著的抑制作用。本研究结果为糙皮侧耳黄斑病病原菌的鉴定及生物防治提供了参考。 相似文献
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高温胁迫下糙皮侧耳胞内钙离子对热激蛋白基因表达的调控 总被引：1，自引：0，他引：1
以糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株CCMSSC00389为材料,研究高温胁迫(40℃、120min)下钙离子的响应及其对热激蛋白的调控。在高温胁迫条件下,在培养基中添加胞内钙离子螯合剂、胞外钙离子螯合剂、钙调蛋白抑制剂、质膜钙通道抑制剂、三磷酸肌醇受体拮抗剂,利用钙离子特异性荧光探针检测菌丝体胞内钙离子含量,采用荧光定量PCR检测热激蛋白的基因表达量。结果表明,高温胁迫促进胞内钙离子浓度升高,增加Hsp60、Grp78、Hsp90、Hsp104等4种热激蛋白的基因表达量;培养基中添加钙离子螯合剂或抑制剂会降低胞内钙离子浓度,抑制这些热激蛋白的基因表达。研究结果表明高温胁迫会诱导糙皮侧耳胞内钙离子浓度升高,参与信号转导,从而调控热激蛋白的表达来缓解高温胁迫引起的伤害。 相似文献
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长期以来,平欧杂种榛苗木的繁育主要依靠结果母树根蘖嫩枝直立压条方法,此方法出苗数量少、一级苗率低。为了提高育苗数量和质量,对该技术进行改进,即建立平欧杂种榛专门育苗圃,母株采用品种纯正,基径为0.6 cm以上,高度在20 cm以上,无病虫,无机械损伤的大多二级苗及部分三级苗,使等级较低的苗木得到有效的利用。定植当年母株在距地面10～15 cm处重短截,萌发枝不育苗,当高度达30 cm时及时摘心,培育壮枝。第2年及以后实施育苗的发育枝均是从壮枝基部所萌发,加之贴近母株营养充足,发育枝质量较高,粗度和高度较好,第5年可形成育苗带。改进后的方法繁育苗木1级苗率均可达85%以上,育苗量提高50%以上,是平欧杂种榛应用嫩枝直立压条繁育良种苗木,具有较高的经济效益,可推动平欧杂种榛良种的规模化发展。 相似文献
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为研究包装和温度对桔红心大白菜销售过程品质的影响,本文以天正桔红62号大白菜为试验材料,采用4℃加PE收缩膜包装、4℃不加PE收缩膜包装、20℃加PE收缩膜包装和20℃不加PE收缩膜包装四种方式进行销售试验的比较,定期测定不同处理方式下的失重率、可溶性固形物、VC含量、还原糖含量、可溶性蛋白含量以及进行感官评价,分析处理方式对桔红心大白菜主要品质指标的影响。结果表明,4℃+PE收缩膜包装最佳,其感官评价最高,失重率和营养成分损失最少,适合于销售时间较长的情况,销售时间在3d以内可选择20℃温度加PE收缩膜的方法。 相似文献
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为探索有机磷农药在不同品种蔬菜中的降解速率和安全间隔期,本试验结合大田农药喷施试验和实验室农药残留定量检测两种手段,研究了敌敌畏和辛硫磷农药在不同品种高原夏菜中的残留量变化情况。结果表明,不同农药在不同蔬菜中的降解速率不同,推荐剂量下,敌敌畏在喷药1d后的降解速率分别为甘蓝43.65%、芹菜50.05%、菜花29.34%、白菜54.01%;辛硫磷在喷药1d后的降解速率分别为甘蓝71.36%、芹菜54.84%、菜花44.78%、白菜51.65%。不同有机磷类农药在不同品种蔬菜中的安全间隔期不同,敌敌畏在不同品种蔬菜中的安全间隔期分别为甘蓝3~5d,芹菜3~5d,菜花5~7d,白菜5~7d。辛硫磷在不同品种蔬菜中的安全间隔期分别为甘蓝5~7d,芹菜14~21d,菜花7~14d,白菜7~14d。 相似文献
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NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一,主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法,筛选■(Prunus salicina var. cordata)叶片全长均一化cDNA文库,分离■叶片NPR1同源基因的全长cDNA;用不同浓度的水杨酸喷施一年生■嫁接苗嫩叶,采用荧光定量PCR技术检测所获得的NPR1同源基因的表达量差异。试验结果表明,共获得了4个NPR1同源基因的全长cDNA,分别命名为PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3,其长度分别为2 442、1 827、2 244和2 615 bp,其ORF长度分别为1 788、1 770、1 767和1 782 bp,分别编码596、590、589和594个氨基酸的蛋白质;氨基酸序列比对结果表明,■这4个NPR1同源基因的编码区均含有BTB/POZ和ANK两个保守域及核定位信号(NLS);PsNPR1与拟南芥的AtNPR1和At NPR2聚为一簇,PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3与拟南芥的AtNPR3和At NPR4聚为另一簇。PsNPR1在喷施1.0 mmol·L-1水杨酸的叶片中表达量最高;PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2在响应1.0 mmol·L-1水杨酸诱导过程中表达量持续上升,30h表达量最高,之后呈下降趋势,因此,水杨酸诱导抗病基因高表达的最佳处理浓度为1.0 mmol·L-1,最佳响应时间为30 h。 相似文献
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