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[目的]从海洋中分离并筛选具有杀松材线虫活性的细菌。[方法]采用稀释涂布平板法对采自青岛近海海域的样品进行细菌分离,采用浸渍法测定菌株的杀线虫活性,并对筛选菌株的形态学、生理生化特性和16S r DNA序列进行测定,通过单因素试验筛选产生杀线虫活性物质的最适培养条件。[结果]共分离到36株海洋细菌,根据杀线虫活性筛选出1株具有高杀线虫活性的细菌HT-11。该菌株分离自牡蛎,其培养滤液处理松材线虫24 h的校正死亡率高达92.41%。根据形态学、生理生化特性和16S r DNA序列测定及其系统发育分析结果,将菌株HT-11鉴定为考克氏菌属(Kocuria)。单因素试验结果表明,该菌株在营养肉汤(NB)培养基中产生杀线虫活性物质的最适培养条件为:海水浓度100%,初始p H 7.0,培养温度25℃,培养时间3 d。[结论]该研究可为海洋微生物资源的开发及其杀松材线虫天然活性物质的利用提供理论依据。 相似文献
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蔓马缨丹是我国华南地区常见的园林绿化灌木。为分析和鉴定蔓马缨丹挥发油的化学组成及其抗菌和杀线虫活性,本文采用水蒸汽蒸馏法提取蔓马缨丹枝叶的挥发油,通过GC-MS分析其化学组成,并分别测定其抗细菌和抗线虫活性。结果表明：蔓马缨丹枝叶挥发油的含量0.075%(以鲜重为基础),通过气相色谱与质谱联用技术共分析并鉴定出39种化学成分。进而采用峰面积归一化法推算得到各化合物的相对含量,其中含量最高的成分为β-Cubebene(19.94%)和β-Elemene(19.61%)。抗细菌活性结果表明,蔓马缨丹挥发油对桉树青枯病菌、番茄疮痂病菌以及黄瓜角斑病菌均表现出一定程度的抑制活性,其中对番茄疮痂病菌的生长抑制效果相对最好,其抑菌圈直径为30.40 ± 2.78 mm。另外,蔓马缨丹挥发油对南方根结线虫表现出了一定的致死活性,在24小时内的致死中浓度为33.07 ± 2.12 mg/mL。本研究结果为蔓马缨丹资源的综合开发与利用提供思路,为植物源农药的开发奠定了理论依据。 相似文献
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在室内条件下,测定了3株淡紫拟青霉菌(Paecilomyces lilacinus)和4株厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)发酵液及7种不同溶剂萃取物对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的毒杀活性,并通过柱层析和气质联用对活性菌株的高效萃取物进行了分离和分析。结果表明:淡紫拟青霉PT1菌株的发酵液对松材线虫的毒杀作用最强,处理72 h后松材线虫的校正死亡率高达88.37%。从7种有机溶剂萃取物中筛选出乙酸乙酯是PT1菌株活性成分较合适的萃取溶剂,浸渍法测定结果表明PT1菌株乙酸乙酯萃取物处理松材线虫24 h和48 h的LC_(50)分别为36.001μg/mL和25.317μg/mL。乙酸乙酯萃取物经柱层析后,得到活性组分YZ-4。用GC-MS分析YZ-4组分,共鉴定出4种化合物,分别为假石榴皮碱、棕榈酸、邻苯二甲酸苯基丁基酯和油酸。推测活性菌株PT1发酵产物有望研发出新型微生物源杀虫剂。 相似文献
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28种植物提取物对松材线虫的毒杀作用 总被引：7，自引：0，他引：7
测定了采自广东、湖南、云南和新疆的骆驼蓬等15科28种植物提取物对松材线虫的生物活性。骆驼蓬、黄文江鱼藤、紫花山毛豆、厚果鸡血藤、雷公藤、了哥王、博落回等7种植物甲醇索氏提取物杀线虫活性强烈,以1000μg／mL处理后72h,校正死亡率均在88％以上。乙醇是骆驼蓬杀线虫活性成分较合适的提取溶剂。浸渍法测定结果表明,骆驼蓬种子乙醇提取物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物对松材线虫毒杀活性顺序强弱依次为：正丁醇〉氯仿〉水〉石油醚萃取物,其中正丁醇萃取物处理后24h和48h,LC50分别为33．98μg／mL和10．18μg／mL。松枝水培试验结果表明,骆驼蓬种子正丁醇萃取物能明显延缓松材线虫引致的松树萎蔫病的发展,以250μg／mL处理后12d病情指数仅0．17,显著低于“清水＋虫”处理的病情指数0．75。 相似文献
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黄皮种子中杀松材线虫成分分离及活性测定 总被引：3，自引：0，他引：3
采用药液浸渍法测定了黄皮Clausena lansium不同部位甲醇提取物对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的生物活性,在活性跟踪的基础上,通过萃取、柱层析、薄层制备、重结晶、核磁共振等方法对其有效成分进行了分离和结构鉴定.结果表明,黄皮不同部位甲醇提取物中种子提取物对松材线虫的毒杀活性最高,在1 mg/mL水溶液中处理72 h的校正死亡率为100%.各萃取相中石油醚相的活性最高,从石油醚相中分离、纯化获得一黄色晶体,经核磁共振检测分析为Lansiumamide B(N-甲基-N-顺-苯乙烯-肉桂酰胺).该化合物处理松材线虫24、48、72 h的LC50值分别为8.38、6.36、5.38 mg/L,表明该化合物是黄皮种子中主要杀松材线虫活性成分. 相似文献
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用乙醇超声提取法提取茅苍术根茎物质,并进行杀蚊有效活性成分分离,采用幼虫浸渍法测定其对敏感型淡色库蚊、野生型地下家蚊和白纹伊蚊3龄幼虫的活性。结果发现:乙醇粗提物对淡色库蚊、地下家蚊和白纹伊蚊的24h LC_(50)值分别为22.71、36.30、23.51μg/mL。不同溶剂萃取物对白纹伊蚊生物活性测定结果表明,活性成分主要在正己烷相中,其LC_(50)为16.87μg/mL;而乙酸乙酯相和水相成分基本无活性。进一步对正己烷萃取物以硅胶柱层析分离的不同成分进行生物活性测定,活性成分主要为H2和H6;白纹伊蚊3龄幼虫在其25μg/mL质量浓度下24h死亡率均达100%。结果表明茅苍术的杀虫活性成分对敏感型淡色库蚊、野生型地下家蚊和白纹伊蚊的幼虫均具有较强生物活性,具有新型杀蚊剂开发潜力。 相似文献
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松材线虫是一种毁灭性的松林病害,发现有效的松材线虫杀虫剂是一项长期而艰巨的任务。测定了鱼藤酮及六种哒唑、咪唑类驱虫药对松材线虫的作用,发现鱼藤酮对松材线虫的杀灭效果远强于以乙酰胆碱酯酶为主要靶标的克线磷,鱼藤酮及阿苯哒唑、甲苯哒唑、氟苯哒唑、噢吩哒唑、磷酸左旋咪唑、盐酸左旋咪唑处理松材线虫120 h后的LC50分别为1.86μg/mL,2.11μg/mL,9.77μg/mL,5.38μg/mL,6.66μg/mL,1.14μg/mL和1.40μg/mL,其中线粒体呼吸链抑制剂鱼藤酮及呼吸代谢抑制剂阿苯哒唑、磷酸左旋咪唑、盐酸左旋咪唑对松材线虫表现出了出色的杀灭效果,松材线虫的呼吸代谢系统是松材线虫的敏感靶标。 相似文献
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筛选对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)有致死作用的内生真菌。从苦楝(Melia azedarach)健康组织(茎、叶、果实)中分离纯化内生真菌,菌株采用摇瓶培养,发酵液和菌丝体分别用乙酸乙酯萃取制备胞外和胞内代谢产物,采用浸渍法进行杀线虫活性筛选。共计分离纯化31株内生真菌,其中菌株J352-03的发酵液对松材线虫有显著的毒杀活性,在2 mg·mL-1质量浓度下处理48 h,菌株J352-03胞内、胞外的次生代谢产物对松材线虫校正死亡率均达到100%,LC50值分别为0.46 mg·mL-1、0.42 mg·mL-1;对松材线虫卵的孵化抑制率分别为66.54%、76.04%,松材线虫体内三磷酸腺苷酶(ATP酶)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著低于对照组。菌株J352-03经形态学与rDNA-ITS序列分析鉴定为间座壳属一未知种Diaporthe sp.。综上所述,菌株J352-03对松材线虫有良好的生防潜力,具有进一... 相似文献
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95%乙醇回流提取法及拌硅胶淋洗方法得到雪松的石油醚相,采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析雪松石油醚相的成分,应用色谱峰面积归一法分析各成分的质量分数.从挥发油检出36个峰,总含量99%以上,被确认为28种化合物,主要成分是维生素E(35.199%)、1,2-15,16-二环氧十六烷(6.349%)和γ-谷甾醇(10.63%).Alamar Blue法测定结果表明,雪松挥发物质对人非小细胞肺癌细胞株NCI-H460的抑制作用较大,浓度为100μg/mL时抑制率为(73.45±8.44)%.并用DPPH法测定了挥发性物质的抗氧化活性. 相似文献
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采用触杀法研究了刺角瓜无水乙醇提取物对南方根结线虫2龄幼虫的毒杀活性。结果表明,不同浓度的刺角瓜无水乙醇根和茎叶提取物对南方根结线虫有不同程度的毒杀活性,其中,用1.00 mg/mL的刺角瓜根、茎叶乙醇提取物分别处理,24 h后南方根结线虫校正死亡率分别为98.95%、94.46%,48 h后南方根结线虫校正死亡率分别为100%、98.12%,与1.00 mg/mL阿维菌素的活性无明显差异。毒力测定结果表明,茎叶提取物处理24和48 h,对南方根结线虫的半致死浓度LD50分别为0.703 2和0.450 3 mg/mL;根提取物处理24和48 h,对南方根结线虫的半致死浓度LD50分别为0.493 5和0.484 2 mg/mL。此外,根提取物和茎叶提取物的杀线虫活性表现出明显差异。 相似文献
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以韶关地区8个取样点野生山苍子资源的新鲜果实为试材,分析其果实性状,同时蒸馏提取挥发油,GC/MS分析挥发油组分.结果:韶关地区野生山苍子资源果实横径为0.55-0.62cm,果实纵径为0.57-0.65cm,果实千粒重为103.89-141.48g;果实精油含量为6.53-9.67 mL· (100g)-1;挥发油主要成分柠檬醛的含量为62.08％-69.15％,柠檬烯的含量为10.17％-19.12％;柠檬醛的得率为4.16-6.68 mL/100g.结论:韶关地区野生山苍子资源在果实形态性状、挥发油性状上变幅较大,差异显著,具有一定的多样性. 相似文献
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为了探究芽孢杆菌(Bacillus sp.)糖基水解酶GH489的生物活性，通过设计特异性引物扩增得到目的基因gh489，采用大肠杆菌原核表达系统对重组GH489蛋白进行表达，利用组氨酸标签对目的蛋白进行分离纯化，并检测芽孢杆菌糖基水解酶GH489对二斑叶螨的杀螨活性。结果表明，由大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组GH489蛋白为可溶性蛋白质，其蛋白质分子质量约为57 kDa。纯化后的GH489重组蛋白显示出良好的杀螨活性，处理24 h后，二斑叶螨的半致死浓度(LC50)为30.296μg/mL，处理48 h后，二斑叶螨的半致死浓度(LC50)为21.212μg/mL。 相似文献
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[目的]研究海南西海岸真红树根际土壤细菌多样性及延缓衰老活性和杀线虫活性,挖掘更多潜在新物种和高效活性物质,为红树林微生物资源的开发应用提供参考依据.[方法]以海南西海岸4种真红树植物(红海榄、桐花树、白骨壤和红树)根际土壤为研究对象,采用9种分离培养基(AGG、M4、M5、M7、M9、M10、M11、P3和P7),以稀释涂布法和三线法从真红树根际土壤中分离细菌,通过菌株形态特征观察及16S rRNA序列分析,探讨真红树根际土壤细菌物种多样性;利用秀丽隐杆线虫活体模型对分离获得的细菌发酵产物粗提物进行延缓衰老活性筛选,并采用96孔板法测试细菌发酵产物粗提物的杀线虫活性.[结果]经排重合并及16S rRNA序列比对分析,从真红树根际土壤中分离得到23株根际细菌,隶属于10目11科12属,其中芽孢杆菌属(Bacillus sp.)11株,占分离细菌总数的47.83%,为优势菌属.有2株细菌(IMDGX 6099和IMDGX 6198)的16S rRNA序列与有效发表菌株的相似性低于98.65%,可能为潜在新种.秀丽隐杆线虫模型筛选发现3株细菌(IMDGX 6153、IMDGX 6098和IMDGX 6198)发酵液具有不同程度延缓线虫衰老的活性,有1株细菌(IMDGX 6094)的发酵液对秀丽隐杆线虫具有杀线虫活性,其半数致死浓度(LC50)为192.02μg/mL.[结论]海南西海岸真红树根际土壤细菌具有较高的物种多样性,蕴藏着丰富的细菌资源,且部分细菌菌株具有延缓衰老和杀线虫活性,在新菌种、生物活性物质的发现及研制新型抗衰老药物和高效生物杀虫剂方面均具有巨大潜力. 相似文献
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松材线虫内生细菌与病原细菌的互作关系分析 总被引：1，自引：1，他引：0
采用16S rRNA基因文库和 illumina Miseq技术测序对松材线虫内生细菌群落的宏基因组进行初步分析,文库显示优势菌群为黄单胞菌科(22.41%)、鞘脂杆菌科(17.66%)、丛毛单胞菌科(14.71%)、根瘤菌科(10.17%)。采用稀释平板法,从松材线虫体内分离出5株内生细菌。利用形态学、生理学及16S rRNA 序列特征等对这些内生细菌进行了分类鉴定。研究发现这些内生细菌在体外均显示较强的杀线虫活性,其中克雷伯氏菌属sct5的杀虫活性最大,作用4 d松材线虫的死亡率即可达到100％。该细菌产生毒性蛋白酶并在体外快速形成生物膜。进一步研究发现,该内生细菌与杀线虫芽孢杆菌B16之间具有强亲和性,混合2个菌株sct5+B16作用1 d对松材线虫的防效为75％,明显好于单菌株sct5 (60％)和B16(40％)。而另一内生细菌肠杆菌属sct29与B16存在拮抗关系,两者不亲和,混合菌株sct29+B16作用1 d对松材线虫的防效仅为13％。本研究首次系统地报道了松材线虫可培养内生细菌的杀虫活性及其与杀线虫芽孢杆菌B16的亲和关系,对研制开发组合生防菌剂、提高生防菌株的稳定性等奠定理论基础,本研究从新的视角阐释了松材线虫内生细菌与病原细菌之间的互作关系。 相似文献
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蜡样芽胞杆菌NJSZ-13对松材线虫有较高的致死作用。为了明确蜡样芽孢杆菌NJSZ-13对松材线虫的致死因子，探讨了蜡样芽胞杆菌NJSZ-13对松材线虫的作用机制。首先将NJSZ-13菌悬液处理的松材线虫体表彻底消毒并研磨后涂含青霉素的抗性平板，并通过荧光显微镜观察线虫虫体上含gfp荧光质粒的NJSZ-13菌体以明确菌株在线虫虫体上的存在位置。然后测定菌株与松材线虫混合后上清液及其中胞外蛋白粗提物的杀线活性，并测定虫菌混合液的吸光度，观察菌体繁殖量的变化。结果表明：松材线虫体表彻底消毒研磨后涂布抗性平板未长出菌落，且在松材线虫体表观察到菌株NJSZ-13。菌株与松材线虫混合并静置48 h后，其上清液无显著杀线活性。菌株与松材线虫混合并摇培4 d后，上清液中胞外蛋白粗提物浓缩10倍后具有较高的杀线活性，处理松材线虫48 h后的松材线虫死亡率达到66.23%。粗提物经沸水浴30 min后处理松材线虫，线虫死亡率显著降低，处理48 h后松材线虫死亡率仅有23.88%。菌株与松材线虫混合并摇培1 d后，虫菌混合液的吸光度开始显著高于菌液的吸光度，此后两者吸光度下降明显，摇培2至10 d期间，虫... 相似文献
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苯磺隆对甘蓝型油菜的杀雄效果及对其靶标ALS活性的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
研究了叶面喷施杀雄剂苯磺隆对甘蓝型油菜品种宁油18号和096030的杀雄效果。结果表明:叶面喷施0.2μg/mL苯磺隆2次(每次8～10 mL/株)可诱导油菜100%的全不育株率,使整个花期不育,相对结实率仅约4%;经0.2μg/mL苯磺隆处理后,2种油菜中的乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthase,ALS)的活性均较对照显著降低,ALS相对酶活分别为40.63%和37.23%。因此,油菜中ALS活性的变化有可能作为快速鉴定和预测杀雄剂苯磺隆的喷药量是否达到合理范围的指标。 相似文献
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为进一步弄清细菌在松材线虫病中的作用,探明甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和抗生素联合应用防治松材线虫病的效果,从松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)携带的细菌中筛选出能显著促进松材线虫存活、繁殖和加重病害发生的菌株,通过药敏试验,在30种抗生素中筛选出对病害相关细菌有较强抑菌活性的高效抗生素,研究甲维盐(甲氨基阿维菌素苯甲酸盐)对松材线虫携带致病细菌的抑制作用,并将高效抗生素和甲维盐混合,采用浸渍法测定混合液对松材线虫的毒杀性以及采用灌根法测定混合液对6月生马尾松苗(Pinus massoniana)松材线虫病防治效果。结果显示,相比菌株AMA3-2和AMA3-3,菌株AMA3-1对松材线虫的存活、繁殖和病害发生方面具有更好的促进作用。环丙沙星和米诺环素对AMA3-1有较好的抑菌活性,而甲维盐对AMA3-1没有抑制作用。当混合液或甲维盐质量浓度为500 mg/L时,松材线虫的致死率可达80%以上。不同浓度的高效抗生素处理下,松材线虫的校正死亡率维持在较低水平(0.74%～2.43%)。当药剂质量浓度是500mg/L时,在混合接种松材线虫和菌株AMA3-1前2 d及当... 相似文献