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1.
将40只20日龄雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。给3个处理组小鼠分别连续2d腹腔按体质量注射醋酸铅10,20,40mg/kg,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24,72h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,研究卵巢组织结构及卵巢颗粒细胞凋亡的变化。结果显示,醋酸铅可使小鼠卵巢组织结构发生病变,加速卵巢颗粒细胞的凋亡,且凋亡率随着攻毒剂量的增加和时间的延长而升高,与对照组相比,差异极显著(P0.01);表明醋酸铅对小鼠卵巢具有毒性作用,可诱导卵巢颗粒细胞发生凋亡,并呈现一定的剂量-时间依赖关系。 相似文献
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旨在构建含免疫基序CpG-ODN片段的重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN,并研究其对小鼠颗粒细胞中相关凋亡基因mRNA表达水平的影响,以探讨免疫佐剂CpG-ODN对小鼠卵巢颗粒细胞的作用。采集21~23日龄雌性ICR小鼠卵巢颗粒细胞,试验分为3组:空载体组(pEGFP)、抑制素重组质粒组(pEGISI)和含CpG-ODN基序的重组抑制素质粒组(pEGISI-CpG-ODN)。采用普通PCR扩增目的片段CpG-ODN,荧光定量RT-PCR(qRTPCR)检测转染后细胞中CpG及死亡受体通路相关基因(Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Caspase8和Caspase3)mRNA的表达水平。结果表明:重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN构建成功;重组抑制素质粒(pEGISI-CpG-ODN)转染颗粒细胞后,CpG基因能在细胞中高表达;与pEGISI组相比,pEGISI-CpG-ODN组转染颗粒细胞后,能极显著降低细胞中促凋亡基因Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Caspase8和Caspase3mRNA的表达水平(P0.01)。综上表明,CpG-ODN可拮抗抑制素的作用,下调小鼠颗粒细胞中凋亡基因的表达,进而影响卵泡发育。 相似文献
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将40只未成年雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只。处理组小鼠分别连续2 d腹腔注射铅10、20、40 mg/kg（按体质量给药）,对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后24、72 h分离卵巢,用原位末端标记法（TUNEL）测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,同时用半定量RT-PCR方法检测凋亡基因p53、Bax、Bcl-2mRNA表达。结果表明,铅可促进颗粒细胞凋亡,且随剂量的增加和作用时间的延长,颗粒细胞中p53、Bax基因表达量逐渐增加,与对照组相比差异显著或极显著（P〈0.05或P〈0.01）;而Bcl-2基因表达量则逐渐减少（P〈0.05或P〈0.01）;表明铅可通过上调促细胞凋亡基因p53、Bax基因表达量,下调Bcl-2基因表达量,诱导卵巢颗粒细胞的凋亡。 相似文献
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将40只未成年雌性昆明系小鼠随机分成3个处理组和1个对照组,每组10只.处理组小鼠分别连续2 d腹腔注射铅10、20、40 mg/kg(按体质量给药),对照组小鼠注射等体积的生理盐水.于注射后24、72 h分离卵巢,用原位末端标记法(TUNEL)测定卵巢颗粒细胞的凋亡率,同时用半定量RT-PCR方法检测凋亡基因p53、Bax、Bc1-2mRNA表达.结果表明,铅可促进颗粒细胞凋亡,且随剂量的增加和作用时间的延长,颗粒细胞中p53、Bax基因表达量逐渐增加,与对照组相比差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01);而Bc1-2基因表达量则逐渐减少(P<0.05或P<0.01);表明铅可通过上调促细胞凋亡基因p53、Bax基因表达量,下调Bc1-2基因表达量,诱导卵巢颗粒细胞的凋亡. 相似文献
5.
选取健康麻鸭进行同种异体卵巢移植，移植后测定45日龄、75日龄、105日龄、开产日龄、开产后30日龄和开产后60日龄时血浆促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇㈤水平；并且在产蛋期内不同的时间获取各个级别卵泡的颗粒细胞，检测其凋亡率。结果显示，移植后FSH、LH、E2的分泌均高于对照组，在开产30日龄时差异显著，表明移植成功并且卵巢发育良好，卵巢功能正常；移植后各级卵巢颗粒细胞凋亡率显著低于对照组，并且随着卵泡直径的增加，颗粒细胞的凋亡率呈现下降的趋势，表明卵巢移植可以降低卵泡颗粒细胞凋亡率。结论：同种异体卵巢移植卵巢发育良好，具用正常的分泌功能，可以降低卵泡颗粒细胞的凋亡率。 相似文献
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为了探讨热应激对小鼠卵巢组织抗氧化物活性及颗粒细胞凋亡的影响,试验选取经38,40,42℃处理4 h及室温(20±2)℃条件下的雌鼠双侧卵巢组织,将组织匀浆并测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC);再取正常小鼠卵巢颗粒细胞,分别在38,40,42℃的5%CO2培养箱中处理4 h,利用Annexin-V-FITC/PI法结合流式细胞仪检测热应激后颗粒细胞的凋亡情况。结果表明:热应激致使小鼠卵巢组织中GSH-Px活性及T-AOC显著降低,试验组与对照组相比差异均显著(P<0.05);40℃、42℃的热应激处理能显著影响颗粒细胞凋亡(P<0.05)。说明热应激可降低卵巢组织中抗氧化物酶活力,并诱导颗粒细胞发生凋亡。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2017,(9)
肿瘤转移抑制因子(Kisspeptin)在颗粒细胞上有表达,但其对颗粒细胞凋亡的作用尚不清楚,本试验旨在利用流式细胞术和荧光定量PCR的技术研究Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响。向DMEM-F12培养液中分别添加0、100 nmol/L的Kp-10培养牛颗粒细胞,24 h后收集细胞,用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期,用荧光定量PCR技术检测Caspase-3、Bcl-2、Fas和Fasl的m RNA表达。结果表明:Kisspeptin可显著促进牛颗粒细胞凋亡,且伴随着Caspase-3、Fas和Fasl m RNA表达上调及Bcl-2 m RNA表达下调(P0.01);流式细胞分析表明,Kisspeptin可使牛颗粒细胞在G1期增加、S期下降(P0.05)。研究结果说明,Kisspeptin可促进牛颗粒细胞凋亡,这一作用可能通过上调促凋亡基因Caspase-3、Fas、Fasl和下调抗凋亡基因Bcl-2的m RNA表达实现。 相似文献
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p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated potein kinase,MAPK)家族成员,是细胞内重要的信号转导系统之一,对细胞的生长、分化、凋亡具有重要影响及作用。为探究p38MAPK信号对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制,研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,在培养液中分别添加浓度为0、1、10、20μmol/L的p38MAPK特异性抑制剂SB202190。以免疫细胞化学染色法鉴定体外培养猪卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测其增殖活性,应用Annwxin V-FITC/PI及细胞周期试剂盒染色检测细胞凋亡及细胞周期状况,以实时定量PCR检测猪卵巢颗粒细胞中凋亡、周期相关基因的相对表达水平。结果表明,添加p38APK信号抑制剂SB202190可抑制体外培养猪卵巢颗粒细胞的增殖活性,20μmol/L处理组与其他组相比呈显著性差异(P0.05);20μmol/L SB202190添加处理未显著影响颗粒细胞的凋亡水平,而该浓度SB202190可将大部分细胞阻滞在G1/G0期,与对照组相比差异显著(P0.05);基因相对表达水平检测显示SB202190添加可抑制Fas、FasL、CDK-4的表达,而同时促进Bcl-2、Bax、P27的表达(P0.05),对Caspase-3的表达没显著影响(P0.05)。综上所述,SB202190通过调控猪卵巢颗粒细胞的周期来影响其增殖作用,但对其凋亡没有影响。 相似文献
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微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类内源性非编码RNA,具有广泛的基因表达调控作用,可以在转录后水平通过影响靶基因来调控相应蛋白质的表达,进而调节细胞的生命活动。miRNA在哺乳动物卵泡颗粒细胞中表达,并调控颗粒细胞的凋亡。颗粒细胞作为卵巢卵泡中数量最多的细胞群,在卵泡发育过程中起着至关重要的作用,不仅为卵母细胞提供营养物质,还调控其发育和成熟。颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因,影响卵泡的数量和质量从而影响雌性动物的繁殖性能。颗粒细胞凋亡过程受多种因素的调控。文章简述了miRNA对卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用及其机制,其中包括miRNA通过调控激素分泌和细胞凋亡相关因子的表达进而调节颗粒细胞的凋亡,miRNA对颗粒细胞凋亡相关信号通路的影响,miRNA调控颗粒细胞凋亡导致的卵巢相关疾病,并总结了对颗粒细胞凋亡有调控作用的miRNA,以及miRNA在疾病诊断和治疗中的潜在作用,以期为后续相关卵巢疾病的发病机制和治疗方案研究,以及提高雌性哺乳动物生殖性能提供指导和参考。 相似文献
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本试验旨在通过氯丙嗪对颗粒细胞凋亡影响的研究,探讨氯丙嗪对雌性大鼠性腺毒性的作用机制。对未成熟的Wistar大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,用不同浓度的氯丙嗪(0、0.1、1、10 μmol/L)染毒细胞,细胞培养24 h。染毒结束后采用MTT法检测细胞相对活力,荧光染料Hoechest 33258检测颗粒细胞的凋亡变化,RT-PCR检测凋亡调控基因Bax、Bcl-2和P53 mRNA的表达。在本试验所设置的剂量范围内,与对照组比较,氯丙嗪能极显著促进颗粒细胞凋亡(P＜0.01),呈浓度依赖关系;RT-PCR检测则显示氯丙嗪能引起Bcl-2、Bax、P53 mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA值升高,除低剂量组的Bax mRNA表达水平和Bax mRNA/Bcl-2 mRNA值无明显改变外,其余各组与对照组相比均差异极显著(P＜0.01)。氯丙嗪可显著抑制大鼠卵巢颗粒细胞活力,诱导颗粒细胞凋亡。 相似文献
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In MRL mice aged more than 1 year, but not in C57BL/6 mice, ovaries had grossly visible cysts presenting unilaterally or bilaterally. Postnatally, all MRL mice developed ovarian cysts by 8 months of age. Observations by light microscopy, including lectin histochemistry, indicated that the cysts sometimes included papillomatous tissues located at the hilar region and were similar to the rete ovarii system, but not to follicles. Two types of epithelial cells, ciliated and non-ciliated, were arranged on the cysts, in which both cell types had many microvilli projecting in various directions and random ramifications in the cystic lumen. These characteristics suggest that ovarian cysts developing in MRL mice originate mostly from the rete ovarii. Cysts derived from the rete ovarii at 8 months of age were histologically detected in all C3H mice as well as MRL mice, with variable incidence in ICR, AKR, CBA/N and ddY, and none in C57L/6, DBA/2, BALB and A/J mice. However, measurement of the maximum diameters of the ovarian cysts indicated that MRL mice regularly possessed the largest cysts visible to the naked eye. This is the first report of ovarian cysts in this inbred strain, suggesting that ovarian cysts in MRL mice appear with stable incidence and development. 相似文献
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YAN Sheng-fei ZHANG Xiu-fang HUANG Yue-meng ZHENG Hai-ying YANG Chun-yan QIN Guang-sheng HUANG Jia-xiang SHANG Jiang-hua 《中国畜牧兽医》2017,44(8):2369-2377
This study was aimed to elucidate the molecular mecbanisms of Smad4 gene on granulose cells proliferation and embryonic development in buffalo. The Smad4 gene was amplified by RT-PCR, analyzed by bioinformatics, studied with eukaryotic vector construction, and used liposome transfection skill to transfect into the buffalo granulose cells. The results showed that Smad4 gene was cloned, the coding region was 1 662 bp, and encoded 553 amino acids. BLAST analysis showed that the buffalo Smad4 gene shared 99% of similar nucleotide sequence with Bos taurus, and shared 98%, 96%, 96% and 95% of similar nucleotide sequence with Ovis aries, Sus scrofa, Equues caballus and Homo sapiens, respectively. Phylogenetic tree analysis showed that Smad4 gene was highly conserved in different species. The buffalo pEGFP-N1-Smad4 eukaryotic expression vector was successfully constructed, and transferred into the buffalo granulose cells, and the Smad4-EGFP fusion protein was detected in the cells. The results suggested that the success cloning and construction vector of buffalo Smad4 gene laid the foundation for the research of Smad4 gene on embryo development. 相似文献
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鹅卵泡颗粒细胞凋亡及其与生殖激素间的关系 总被引：1，自引：0，他引：1
采用正处于产蛋期的扬州鹅10只，取其卵泡分离颗粒层细胞，用70％乙醇固定后，应用流式细胞术分析颗粒细胞凋亡情况。同时，用连续采血的方法，每3h采血一次，分离血浆，用放射免疫分析法测定血浆促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌激素（Ez）水平，用以分析激素水平与凋亡间的关系。结果表明：（1）无论是健康卵泡还是闭锁卵泡，颗粒细胞90％以上均处于G1期，2％～6％处于G2期，S期比例最小；（2）闭锁卵泡颗粒细胞凋亡率极显著高于健康卵泡（P〈0．01）；（3）随着健康卵泡直径的增加，颗粒细胞的凋亡呈降低趋势；（4）健康组鹅的FSH、E2水平要高于闭锁组，而LH水平要低于闭锁组。 相似文献
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为了阐明Smad4基因在水牛卵巢颗粒细胞增殖及胚胎发育中的分子机制,试验采用RT-PCR扩增并克隆水牛Smad4基因,对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,构建Smad4基因的真核表达载体,通过脂质体转染法转染体外培养的牛卵巢颗粒细胞。结果表明,试验克隆得到水牛Smad4基因编码序列,编码区全长为1 662 bp,编码553个氨基酸。通过BLAST对水牛Smad4基因的核苷酸序列进行同源性比对,结果显示,水牛Smad4基因与牛的同源性为99%,与绵羊、猪、马、人的同源性分别为98%、96%、96%和95%。系统进化树分析表明,Smad4基因在不同物种的进化过程中具有高度的保守性。试验成功构建了水牛Smad4基因的真核表达载体pEGFP-N1-Smad4,并在水牛卵巢颗粒细胞中表达出较强的绿色荧光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功构建了Smad4基因的真核表达载体,为进一步研究Smad4基因在水牛胚胎发育过程中的分子机制奠定基础。 相似文献