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两种酶快速检测有机磷农药残留条件优化研究 总被引：4，自引：0，他引：4
比较了快速测定蔬菜中有机磷农药残留的两种酶抑制法,即胆碱酯酶抑制法和植物酯酶抑制法,通过正交试验优化了两种酶抑制法的测定条件。结果表明:动物酯酶中的苍蝇酶、蝇蛆酶与植物酯酶中的小麦酯酶活力和被农药抑制程度相近;玉米酯酶的活力远低于小麦酯酶的活力,不适于用来检测残留农药;动物酯酶在pH值7.0时活力最高,小麦酯酶在pH值6.0时最高。 相似文献
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河北邢台和江苏南京地区棉蚜对丁硫克百威和吡虫啉的抗性 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】对河北邢台和江苏南京地区棉蚜（Aphis gossypii Glover）进行抗性监测,了解棉蚜对丁硫克百威和吡虫啉的抗性发展情况,为抗性治理提供理论依据。【方法】以用药水平最低的新疆南疆种群作为相对敏感种群,通过室内毒力测定、离体酶活力测定、相对表达量分析,研究新疆南疆、河北邢台及江苏南京3个地区棉蚜对丁硫克百威和吡虫啉潜在的代谢抗性机制。【结果】河北邢台和江苏南京地区的棉蚜对丁硫克百威仍处于敏感阶段;但对吡虫啉的抗性已有所发展,抗性水平分别为4.87和8.72倍,为低水平抗性阶段。解毒代谢酶活力对比研究发现,3个地区田间种群之间多功能氧化酶、酯酶及谷胱甘肽转移酶的活力均存在显著差异,江苏南京种群的酯酶活力显著高于新疆南疆种群。定量PCR分析表明,河北邢台地区棉蚜的羧酸酯酶表达量较高,是新疆种群棉蚜的3.28倍。【结论】田间棉蚜已对吡虫啉产生了低水平的抗性,酯酶活力升高在棉蚜对吡虫啉低水平抗性形成中发挥作用。 相似文献
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【目的】构建表达家蚕乙酰胆碱酯酶（BmAChE）的毕赤酵母菌株,实现BmAChE在毕赤酵母中分泌表达并对其活性进行分析。【方法】从家蚕头部提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,通过PCR扩增出家蚕乙酰胆碱酯酶基因bmace并进行序列测定。采用PCR及重叠延伸PCR去除原bmace中的信号肽和疏水肽,并对序列中存在的2个A+T富含区进行同义密码子替换的改造。将改造后的bmace与表达载体pPIC9K连接,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白,以Ellman法测定酶活力,毒扁豆碱和有机磷及氨基甲酸酯类农药抑制试验分析重组BmAChE（rBmAChE）的生物活性。【结果】改造后的bmace经重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为70 kD的蛋白,具有AChE活性,酶比活力约为1 187 U•mg-1。抑制试验显示,该rBmAChE能够被毒扁豆碱强烈抑制,并且可被皮蝇磷等10种有机磷农药和克百威等5种氨基甲酸酯类农药抑制,最低抑制浓度IC50值可达2.78×10-10 mol•L-1。【结论】成功构建分泌表达BmAChE的毕赤酵母菌株,其表达了具有良好活性的rBmAChE,可用于进一步制备有机磷及氨基甲酸酯类农药快速检测分析制剂。 相似文献
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酶抑制法测定多种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的试验 总被引：1，自引：0，他引：1
《浙江农业科学》2015,(6)
采用酶抑制法测定50种有机磷和10种氨基甲酸酯类农药的检出限,并进行酶活性减退试验。结果表明,有机磷中敌敌畏和对氧磷的检出限较低,速灭磷、二溴磷、喹硫磷、敌百虫、辛硫磷、除线磷、甲胺磷和甲基毒死蜱的检出限相对较高,其他40种有机磷农药的检出限更高;氨基甲酸酯中,涕灭威亚砜的检出限较低,速灭威、灭多威、异丙威、涕灭威、甲萘威、涕灭威砜、仲丁威的检出限相对较高,克百威和3-羟基克百威的检出限更高;配制好的酶在9℃的冰箱中保存,其活性并不随着时间的推移而降低,但每天测试的酶活性都有一定差别;用酶抑制法测定农药残留重现性不佳;与酶、显色剂和底物反应的提取液的浓度也影响酶抑制法测定农残的结果。 相似文献
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<正>1禁止使用残留高持效期长的高毒品种这些农药品种有:有机磷杀虫剂中的甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、久效磷及乐果等。氨基甲酸酯类中的克百威;除虫菊酯类中的杀灭菊酯等含氟化合物品种及杀虫脒等。推广一批高效、低毒、持效期短、无残留的农药品种,如杀虫剂中的瑞泽秋杀、1.8%阿维菌素、Bt乳剂、绿宝威、苦 相似文献
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测定了中国常用的21种农药对意大利蜜蜂头部和云南小白鼠肝脏两种不同生物来源的乙酰胆碱酯酶的抑制作用,并以蜜蜂头部胆碱酯酶为酶原,探讨酶抑制法农药残留快速测定的样品前处理方法。结果表明:农药对不同胆碱酯酶的抑制活性有很大差异,意大利蜜蜂头部酯酶对供试的氨基甲酸酯类农药非常敏感,但对部分有机磷类农药的敏感性较差,而小白鼠肝脏胆碱酯酶对丙溴磷、二嗪农、敌敌畏等农药较敏感。在4种不同提取剂对蔬菜样品的提取效果试验中,根据农药的溶解特性,采用甲醇和含Tween-80的磷酸缓冲液提取法,其残留农药的回收率和检测灵敏度较高。 相似文献
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植物酯酶检测有机磷农药残留影响因素的研究 总被引：2，自引：1，他引：1
分析了固定方式、pH值、温度、农药浓度和显色剂类型对植物酯酶检测有机磷农药残留的影响,比较了两种固定方式检测农残的灵敏度,结果表明:离子交换法比微乳板法敏感性略高;固化酯酶的最适合pH值约为5.6,游离酯酶的最适合pH值约为4.8;固化酯酶与游离酯酶的最适温度相同,但固化酶活力对温度响应的峰型较游离酶略陡,不同农药对植物酯酶的抑制效果差异较大,其中敌敌畏最灵敏,对硫磷的灵敏度最差,且随着农药稀释浓度的增加,检测灵敏度逐渐下降。实验还发现,液体显色剂在室温40 min后显色能力显著下降,因此固体显色剂更适用于农残的快速检测。 相似文献
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《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2019,(3)
乙酰胆碱酯酶是用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的关键用酶,本研究利用毕赤酵母表达系统分泌表达人乙酰胆碱酯酶,并评估其对8种农药的敏感性,为工业化大规模生产高敏感性酶源奠定基础。根据GenBank上已发表的人乙酰胆碱酯酶(human acetylcholinesterase, hAChE)基因核酸序列设计引物,从pReceiverM02-h AChE-ORF质粒中扩增出hAChE的开放阅读框(open reading frame, ORF)片段,接着利用SnaBⅠ和AvrⅡ双酶切将其克隆至载体pPIC9K中,构建pPIC9K-hAChE表达载体,然后将SalⅠ线性化的pPIC9K-hAChE电转化至毕赤酵母GS115中,在含4.00 mg/mL G418抗性平板上筛选获得阳性克隆,最后经0.5%甲醇诱导分泌表达144 h,发现其发酵上清液的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱在65 kDa处有一条明显的蛋白条带,大小与预期的hAChE蛋白一致。利用Q-Sepharose FF柱层析法对其总蛋白进行纯化,获得了较纯的人乙酰胆碱酯酶。用Bradford法测得发酵上清液中hAChE蛋白质量浓度为1.330 mg/mL,占总蛋白的5.58%,纯化后比酶活达到1 080nmol/(min·mL)。通过初步计算比对重组工程菌发酵上清液对8种常见农药的半抑制浓度,得出敌百虫敌敌畏克百威马拉硫磷乐果甲胺磷甲萘威毒死蜱,即人乙酰胆碱酯酶对毒死蜱最敏感。 相似文献
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为了确保食品安全,中国国家标准化管理委员会(SAC)近日依据《中国人民共和国农药管理条例》,分别制定了《叶菜类蔬菜中氯氰菊酯、氟氯氰菊酯、甲氰菊酯和联苯菊酯最大残留限量》《叶菜类蔬菜中杀螟丹、丁硫克百威、残杀威和异丙威最大残留限量》和《叶菜类蔬菜中甲基毒死蜱最大残留限量》. 相似文献
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由于农药品种和用量的不断增加,人们不断研究更新、更快捷准确、实用的对农残进行检测的分析方法。结合实际,探析有机农药在蔬菜中残留的检测方法,包括乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶、植物胆碱酯酶等,以期提高蔬菜农残检测效果。 相似文献