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将岩青、轮叶棘豆等3种藏药材按一定比例配成复方,采用乙醇提取法进行提取,将浓缩药液用细胞维持液配制成1g／L的药液,并根据对兔肾细睁（PRK）安全浓度的测定结果,稀释成不同梯度浓度,分别与脓疱皮炎病毒（ORFV）加入到已培养24h的单层PRK中,通过M1TI’法测定OD值,分析其对ORFV病毒增殖的影响。经回归分析,复方药液在7．81—62·5mg／mL浓度范围内,药物浓度与活细胞存在线性关系,对病毒增势有显著的抑制作用（P〈0·05）。表明藏药材复方药液具有抗脓疱皮炎病毒感染的作用。 相似文献
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为了研究靛玉红对羊传染性脓疱病毒(Ovine contagious pustular dermatitis virus, ORFV)感染淋巴细胞的增殖、细胞因子质量浓度及CD分子表达量的影响，在靛玉红对ORFV感染淋巴细胞增殖的影响试验中，分为对照组、ORFV感染组、靛玉红(0.2μg/mL)+ORFV组、靛玉红(0.2μg/mL)组，采用CCK-8法检测靛玉红对ORFV感染淋巴细胞增殖的影响。另外，在靛玉红对ORFV感染细胞上清液中细胞因子质量浓度及CD分子表达量的影响试验中，分为高浓度靛玉红(0.2μg/mL)+ORFV组、中浓度靛玉红(0.1μg/mL)+ORFV组、低浓度靛玉红(0.05μg/mL)+ORFV组，于96孔培养板中，每孔加入淋巴细胞悬液100μL,之后加ORFV病毒悬液100μL,吸附2 h,弃病毒液，分别加入终浓度为0.2,0.1,0.05μg/mL的靛玉红溶液100μL,作用0,2,4,8,12 h,另设ORFV感染组(只加ORFV病毒悬液和RDMI-1640完全培养基)、对照组(只加RPMI-1640完全培养基),采用ELISA方法检测细胞上清液中IFN-γ... 相似文献
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《动物医学进展》2020,(4)
为建立检测细胞培养物和组织切片中羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)的间接免疫荧光(IFA)方法,用已知滴度的ORFV感染牛睾丸上皮细胞,羊口疮病毒单克隆抗体(anti-ORFV mAb)为一抗,荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立细胞培养物ORFV的IFA检测方法,并制备ORFV感染的山羊唇部组织冰冻切片,对组织中病毒进行检测。结果显示,用牛睾丸上皮细胞增殖的羊口疮病毒TCID_(50)达到10~(-6.29)/0.1 mL,ORFV适宜的接种滴度和培养条件为10~(3.70) TCID_(50) ORFV接种细胞,37℃、体积分数为5%的CO_2恒温箱培养42 h,荧光素标记羊抗小鼠二抗适宜工作浓度为1∶400稀释,此时羊口疮病毒单抗应用于IFA检测的特异性和灵敏度最佳,且可应用于病料组织中ORFV的定位检测。表明成功建立了羊口疮病毒单抗检测牛睾丸上皮细胞和组织切片中ORFV的间接免疫荧光方法,有助于ORFV感染的实验室诊断及其在感染细胞中的定位和动态分布研究。 相似文献
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《中国兽医学报》2016,(5):852-858
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol kinase 3-kinase,PI3Ks)蛋白家族参与对细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞功能的调节。课题组前期利用Illumina/Solexa高通量测序技术对羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染OFTu细胞前后mRNA表达谱进行比较分析发现,PI3K在感染后宿主细胞中显著上调表达。为进一步验证,利用荧光定量PCR、Western blot方法分别从基因转录水平和蛋白表达水平对羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染不同时间段(0、3、6、12、24、48、72h)Hela细胞中PI3K的表达变化规律进行分析,与未接毒细胞相比,PI3K在感染后不同时间段均呈上升趋势,且随着感染时间延长而增加,该结果与表达谱分析结果一致。为进一步明确PI3K对ORFV侵染复制的影响,利用PI3K特异性抑制剂LY294002对PI3K进行抑制处理后接种ORFV,收集感染后不同时间段(12、24、48、72h)细胞进行定量PCR检测和TCID50测定,结果显示,加入LY294002处理的Hela细胞,其病毒滴度低于未处理细胞中的病毒滴度,由此可见阻断PI3K对ORFV的入侵具有抑制作用。上述研究结果表明,PI3K对ORFV在宿主细胞中的复制增殖具有明显的促进作用。该研究结果不仅有助于对参与ORFV侵染过程相关信号通路的研究,而且将为深入揭示ORFV致病分子机制奠定基础。 相似文献
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为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF+胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响。结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P<0.05)。囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P<0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P<0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率。所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点。由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养。 相似文献
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羊传染性脓疱皮炎(contagious pustular dermatitis),又称羊口疮,是由副痘病毒属的羊口疮病毒(orfvirus,ORFV)引起的一种病毒性人畜共患传染病,主要侵害绵羊和山羊,野生反刍兽和人也可感染。其特征是羊的口唇、舌、鼻、乳房等部位皮肤和黏膜出现红 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(7):1284-1290
羊胚胎鼻甲上皮细胞(OFTu)是羊口疮病毒(ORFV)高效感染和增殖的细胞,为分析ORFV感染对OFTu细胞干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达的影响及探讨IFITM3的表达状态对ORFV在OFTu细胞上增殖的作用,本研究对ORFV感染OFTu细胞后IFITM3基因的动态表达进行了分析,并通过构建IFITM3不同表达状态的感染细胞模型,探讨了IFITM3的不同表达状态对ORFV在OFTu细胞上增殖的作用。结果表明,ORFV感染可以诱导细胞IFITM3的表达,感染后2 h开始逐渐升高,感染后6～36 h与对照组相比差异极显著(P0.01)。过表达IFITM3的OFTu细胞会在感染后的24和36 h显著抑制(P0.05)ORFV的增殖,干扰表达IFITM3的OFTu细胞在ORFV感染后的前36 h促进了病毒的增殖,但差异不显著。研究结果进一步丰富了IFITM3的抗病毒谱,也为深入探索该蛋白的功能及作用提供了基础数据。 相似文献
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选取自剪切T2A和P2A肽,连接F1L和B2L基因,构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价,为羊口疮的疫苗研制提供依据。应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,构建重组腺病毒穿梭质粒,穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK-293细胞,包装出ORFV重组腺病毒。将重组腺病毒感染MDBK细胞,收集上清液免疫ICR小鼠,并进行间接ELISA、淋巴细胞增殖、ORFV攻毒试验等初步评价小鼠免疫效果。结果显示:成功获得pAV-CMV-F1L-T2A-B2L-P2A-EGFP重组腺病毒,其TCID_(50)为10~(-5.375)·mL~(-1),PCR和IFA检测证实目的基因在基因及蛋白水平上均有表达。ORFV重组腺病毒免疫小鼠后,其抗体水平迅速升高。ORFV重组腺病毒组对特异性抗原ORFV表现出明显的T淋巴细胞增殖能力,极显著高于PBS组(P0.01)。本文的研究结果表明:F1L和B2L基因重组腺病毒能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且未影响小鼠正常采食,保护效力较好。 相似文献
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Influence of Cysteamine on In Vitro Maturation, In Vitro and In Vivo Fertilization of Equine Oocytes
S Deleuze CS Dubois M Caillaud B Bruneau G Goudet G Duchamp 《Reproduction in domestic animals》2010,45(1):1-7
The effect of cysteamine on in vitro nuclear and cytoplasmic maturation of equine oocytes collected by transvaginal ultrasound guided follicular aspiration was assessed. Oocytes were matured in vitro with (cysteamine group) or without (control group) cysteamine. The nuclear stage after DNA Hoechst staining, penetration rates after two different in vitro fertilization (IVF) techniques (IVF media with ionophore and Hepes buffer with heparin) and the embryo yield following oocyte intra-oviductal transfer were used as a criterion for assessing nuclear and cytoplasmic maturation, respectively. Contrary to the data described in other domestic species, there was no effect of cysteamine on in vitro nuclear maturation, IVF or in vivo embryonic development under our conditions. Ovum pick up yields (52%) and maturation rates (control group: 47% and cysteamine group: 55%) were similar to those previously reported. From 57 oocytes transferred to the oviduct in each group, the number of embryos collected was 10 (17%) in the control group and five in the cysteamine group (9%). Those two percentages were not statistically different (p > 0.05). No effect of IVF technique was seen on the success rate (6%) in each group. 相似文献
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J. G. O'Donoghue 《Canadian journal of veterinary research》1954,18(4):141-147
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