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柑橘褪绿矮化相关病毒LAMP检测体系的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank登录的柑橘褪绿矮化相关病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)的移动蛋白(MP)基因序列设计了一组特异性引物,经体系优化,建立了CCDaV的环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示该方法能特异扩增CCDaV,与其他5种柑橘病原物(柑橘衰退病毒、柑橘碎叶病毒、柑橘裂皮病类病毒、温州蜜柑萎缩病毒和柑橘黄龙病菌)不发生反应;灵敏度为PCR的100倍,与实时荧光PCR的灵敏度相同。用LAMP方法对50个田间样品进行检测,与PCR和实时荧光PCR的检测结果一致,证明该方法可用于田间样品的检测。该LAMP检测方法可特异、灵敏、快速地对CCDaV样品进行检测。 相似文献
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《中国南方果树》2015,(2)
为确定云南林科院普文林场葡萄柚试验园从美国佛罗里达州引种的葡萄柚品种是否感染黄龙病以及其病原类型,采集116个柑桔黄龙病疑似病样进行PCR检测、16SrDNA序列测定及系统进化分析。结果表明,116个样品中共有96个样品感染黄龙病,总感病率达到82.8%;在该试验园分离出的黄龙病菌16SrDNA的序列一致性达到100%,与NCBI中的柑桔黄龙病亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)、柑桔黄龙病非洲种(Candidatus Liberibacter africanus)和柑桔黄龙病美洲种(Candidatus Liberibacter americanus)序列的相似性分别为100%、97.6%~98.5%和96.0%~96.7%。该试验园葡萄柚上的柑桔黄龙病菌属于亚洲种。 相似文献
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定量分析柑桔黄龙病菌在沙糖桔中的分布 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国南方果树》2016,(6)
在广东清远感染柑桔黄龙病的沙糖桔园采带果枝条,分部位取样提取总DNA,并通过实时荧光PCR检测"Candidatus Liberibacter asiaticus"浓度。结果表明,不同部位的黄龙病菌浓度存在较大差异。其中,果实桔络的黄龙病菌含量最高,且黄龙病菌在果实中呈现富集状态。 相似文献
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《果树学报》2016,(3)
【目的】建立葡萄炭疽病LAMP检测方法。【方法】在葡萄炭疽病菌ITS序列片段设计LAMP特异性引物,优化反应条件,建立葡萄炭疽病LAMP检测体系,并利用荧光显色剂(0.05 mmol·L-1钙黄绿素和0.5 mmol·L-1氯化锰混合液)实现检测结果的可视化;同时对该体系进行特异性和灵敏度的验证,对采集自5个地区的田间样品进行实测。【结果】除染病的待检样品有特异性反应,观察到亮绿色荧光信号外,其他供试菌株均无特异性扩增反应;对葡萄发病组织总DNA的检测灵敏分别是定量PCR和常规PCR的1/10和100倍,检测限达到了5×10-4mg·L-1;对来自福建等5个地区的样品进行实测,结果表明待检样品中有81.5%感染葡萄炭疽病菌,该检测结果与定量PCR的检测结果完全一致。【结论】本研究建立了一种基于荧光显色的可视化LAMP检测体系,该体系可用于葡萄炭疽病的田间样品检测。 相似文献
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2017年11月在广东省仁化县4个感染柑桔黄龙病的贡柑园中采叶片样品,进行常规PCR和实时荧光定量PCR检测,从不同病症叶片、典型症状叶片不同部位、初期感病树不同部位(正常和显症)叶片等3个方面分析了贡柑叶片中黄龙病菌"Candidatus Liberibacter asiaticus"(CLas)的分布情况。结果表明,叶片斑驳黄化症和均匀黄化症是与黄龙病最相关的症状,CLas含量很高;缺锌黄化症,具有黄龙病阳性与阴性两类样品;无明显黄化但呈革质化的叶片,CLas含量高。在斑驳黄化与均匀黄化叶片中,CLas的含量从叶尖到叶柄、从叶片到主叶脉呈现递增趋势,即以主叶脉与叶柄的含量更高。初期感病树未显症的部位也会检出黄龙病菌。 相似文献
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《中国南方果树》2016,(6)
为找出较优的单头柑桔木虱黄龙病菌核酸提取方法,以饲养于温室内感染柑桔黄龙病的甜橙树上的柑桔木虱为试材,采用3种方法提取单头柑桔木虱的总核酸,对提取的核酸样品进行质量检测,并利用柑桔黄龙病菌特异性引物OI1/OI2c以及r-rplLAs/f-rplLAs分别进行了常规PCR和qPCR检测。结果表明,3种方法均可以成功提取到单头柑桔木虱总核酸且均能检测到黄龙病菌。3种方法各有优缺点:李菁的方法步骤简单、历时短,提取的核酸浓度较高,但核酸质量较低;氯仿-异戊醇法步骤较多、历时长,提取核酸浓度较低,但核酸质量较高;动物组织直接PCR试剂盒法简便快速,提取的核酸浓度高,核酸质量一般,成本较高。 相似文献
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采用直接组织免疫印迹(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)和常规PCR技术,对采自广东梅州新建‘Cocktail’葡萄柚园内表现疑似黄龙病症状的样品进行检测。DTBIA检测发现疑似样品的韧皮部存在特征性紫红色反应,与黄龙病阳性对照反应一致。PCR检测发现枝条、叶片和果实样品中均检测出了黄龙病菌特异性条带,其中果蒂、中柱和种皮内病菌含量较高。进一步测序分析发现,来自‘Cocktail’葡萄柚病样的16Sr DNA和ef Tu基因与NCBI中的柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)对应基因的序列相似性均为100%,证实‘Cocktail’葡萄柚感染了柑橘黄龙病菌亚洲菌株。 相似文献
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苹果锈果类病毒实时荧光PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】建立苹果锈果类病毒(ASSVd)检测灵敏的方法。【方法】根据Gen Bank中ASSVd的RNA序列设计特异性引物ASSVd-F和ASSVd-R,利用实时荧光PCR方法对其进行检测,并对体系的特异性、灵敏性及适用性进行验证。【结果】实时荧光PCR体系能检测至1×10-6的模板浓度,而常规RT-PCR只能检测至1×10-4,由此可知,实时荧光PCR体系灵敏度高于常规RT-PCR 100倍;引物特异性强,能特异检测ASSVd,对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果茎痘病毒(ASPV)均不能检出;适用性广,可检测出植物不同部位的ASSVd。【结论】所建立的方法能够灵敏检测ASSVd,特异性强,适用性广。 相似文献
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杂柑‘W·默科特’黄龙病菌分子鉴定和遗传多样性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
《园艺学报》2019,(6)
2017年12月在云南红河新引种的‘W·默科特’杂柑植株上发现疑似黄龙病的叶片斑驳及"红鼻子果"症状。采集疑似的叶片和果实,分别提取其叶片中脉和橘络的DNA,利用黄龙病菌的特异引物对其16S rRNA基因和β–操纵子基因进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序分析。研究结果表明,采自云南的‘W·默科特’样品中PCR能够扩增出黄龙病菌的特异条带,通过上述基因进行系统发育分析,发现该病菌归属于黄龙病菌亚洲种;为了进一步探明这些黄龙病菌的遗传多样性,利用3种类型的原噬菌体特异性引物对样品进行扩增分析,结果表明采自云南的‘W·默科特’植株上的黄龙病菌遗传多样性较为丰富。 相似文献
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以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst)的致病相关基因HrpZ为靶序列,设计了特异性引物Pst3F/Pst3R,能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段。建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍。利用实时荧光定量PCR检测体系,检测模拟带菌种子中Pst的带菌量,检测下限为4.21 cfu·g-1;检测人工接种叶片组织中Pst的带菌量,检测到1级发病叶片带菌量为4.15×102 cfu·g-1。对田间采集的63个番茄细菌性斑点病明显症状和疑似症状样本,分别进行了实时荧光定量PCR、普通PCR和病原菌分离检测,检测到54个样本中含有Pst,3种方法检测结果一致。结果表明,建立的Pst实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测番茄种子和发病组织中Pst的含量,为番茄细菌性斑点病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。 相似文献