柑橘原生质体总RNA提取方法研究     

《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2016,(2)

以悬浮培养的椪柑愈伤组织为材料,通过酶解分离原生质体;采用Trizol法、改良Trizol法、改良CTAB法和TaKaRa RNA提取试剂盒等4种方法提取原生质体的总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RT-PCR检测其质量和产量。结果表明:4种方法皆能提取出总RNA,其中Trizol法提取的总RNA有降解现象,其他方法所提取的总RNA完整性较好,且D260nm/D280nm和D260nm/D230nm值都在正常范围内;在产量方面,改良Trizol法提取的总RNA产量最高,106个原生质体达43.06μg,分别是改良CTAB法和TaKaRa RNA提取试剂盒的7.74和4.31倍;RT-PCR验证表明,以改良Trizol法提取的RNA为模板所扩增出的目的条带最清晰明亮,且与目的片段大小一致。因此,改良Trizol法是柑橘原生质体总RNA提取的最佳方法。  相似文献   

不同提取方法对检测单头白背飞虱携带SRBSDV灵敏度的影响     

崔丽贤  李战彪  谢慧婷  秦碧霞  蔡健和 《贵州农业科学》2019,47(10)

为找到较好的白背飞虱RNA提取方法用于大规模带毒率检测、SRBSDV的早期监测及科学防控提供参考,采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA,进行检测比较其提取速率和稳定性。结果表明:采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA浓度分别为113.08ng/μL、222.43ng/μL、57.68ng/μL、102.16ng/μL和31.06ng/μL,改良Trizol法和改良CTAB-LiCl法提取的RNA纯度较高。5种方法提取的RNA均能用于SRBSDV的检测,其中改良Trizol法RT-PCR扩增的灵敏度最高,稀释梯度为10-4,NaOH粗提法灵敏度最差,稀释梯度仅为10-1,其余3种均能达到10-3。改良Trizol法提取的虫体RNA较完整且扩增效果稳定,但试剂价格较昂贵,不适合做大量样品提取;NaOH粗提法的灵敏度虽相对较低,但由于操作简便,经济快速,更适合用于大量样品的检测。  相似文献   

菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较   总被引：2，自引：0，他引：2  

袁晓丽  王蔚  孙光明  杜丽清  张秀梅 《广东农业科学》2011,38(10):132-134

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。  相似文献   

番茄果实RNA提取方法比较   总被引：1，自引：0，他引：1  

马敬  纪鸿飞  李培 《现代农业科技》2011,(3):16+19

从富含多糖、多酚的番茄果实中提取高质量的总RNA,对进行下一步分子生物学研究至关重要。采用CTAB-LiCl法和Trizol法分别对番茄果实的总RNA进行提取和分析。结果表明,CTAB-LiCl法提取的总RNA产量低,而且有基因组DNA的污染;Trizol方法提取的RNA产量相对较高,很少有基因组DNA污染。  相似文献   

一种有效的可口革囊星虫体壁总RNA提取方法          下载免费PDF全文

薛茜  郑婷婷  李惠珍  王芳 《农学学报》2020,36(8):151-154

[目的]为从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。[方法]采用Trizol法、改良Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。[结果]改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。[结论]传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。  相似文献   

三色堇花瓣总RNA 3种提取方法的比较     

李琴  王健  赵钟鑫  尚啸 《江苏农业科学》2013,41(5)

分别采用TransZol plant法、改良Trizol法和改良CTAB法提取三色堇花瓣的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对其提取效果进行检测.结果表明,TransZol plant法提取的总RNA浓度低,且杂质较多;改良Trizol法和改良CTAB法提取的总RNA纯度较高.3种总RNA提取方法中,以改良Trizol法提取的总RNA浓度和纯度最高,D260nm/D280nm在1.83 ～2.03之间.以改良Trizol法提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的基因片段,说明改良Trizol法提取的总RNA质量高,可用于后续的分子生物学试验.  相似文献   

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究          下载免费PDF全文

崔院院  于晓艳 《农学学报》2015,5(10):93-96

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB 法、Trizol 法以及EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明：改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol 法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S 条带亮度是18S 条带亮度的2 倍,将其反转录获得的cDNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述：EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。  相似文献   

番茄叶片总RNA提取方法的比较   总被引：9，自引：1，他引：8  

谭丽丽  燕正民  徐亚英  杨继峰  王勇 《东北农业大学学报》2010,41(4)

番茄叶片富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,用普通方法提取番茄叶片总RNA时很难将其去除,试验比较研究了RNA plant Reagent、UNIQ-10柱总RNA抽提试剂盒和改进Trizol三种方法的提取效果。结果表明,改进的Trizol法能从番茄叶片中提取纯度较高的RNA,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测A260/A280比值为1.88。用该方法提取的番茄叶片总RNA可以用于逆转录、RT-PCR、Northern blot等分子生物学研究。  相似文献   

成熟葡萄果实高质量总RNA提取方法的建立     

闫冬梅  薛美昭  仪慧兰  郝丽宏  乔嘉欣 《山西农业科学》2022,50(1):9-14

成熟葡萄果实中富含多酚多糖类物质,对提取组织RNA造成了很大的干扰.研究分别采用3种试剂盒法和改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,以成熟的葡萄果实为材料,提取总RNA并检验其产量和质量,其中,改良CTAB法是在提取缓冲液中加入了聚乙烯吡咯烷酮、亚精胺、β-巯基乙醇及高浓度的氯化钠.对各组RNA产物进行质量检测,发现3种试剂盒法均没有得到可用的RNA,只有改良的CTAB法能够从新鲜采摘和贮藏的葡萄果实组织中提取出高质量的总RNA,基本无降解和污染,且得率可达到85μg/g以上.进一步研究表明,改良的CTAB法提取得到的RNA可用于后续的RT-PCR、qRT-PCR和CDS扩增试验.改良CTAB法适用于成熟葡萄果实RNA的提取,所得RNA质量良好,满足后续分子试验的需求.  相似文献   

改良Trizol法提取香蕉叶片总RNA   总被引：9，自引：0，他引：9  

孙德权  郭启高  胡玉林  谢江辉 《广东农业科学》2009,(5):162-164

针对香蕉组织中多糖、多酚等次生物质含量高的特点,采用改良Trizol法,成功地从香蕉叶片中提取了总RNA.所提取的总RNA A260/A280和A260/A230值分别为1.91和2.10.电泳检测显示28 s、18 s条带完整清晰,以此RNA为模板进行RT-PCR,结果成功得到目标特异条带.试验结果表明:改良Trizol法具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,对具有香蕉叶片类似成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义.  相似文献   

番茄叶片小RNA提取方法的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈华  昌伟  杨瑞  王绍辉 《北京农学院学报》2012,27(3):4-6

以番茄叶片为材料提取小RNA,比较分析UNlQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒+LiCl法,常规Tr-izol+LiCl法和改进的Trizol法+LiCl法的提取效果。结果表明,改进的Trizol+LiCl法能从番茄叶片中提取高质量的小RNA,总RNA琼脂糖凝胶电泳条带完整清晰,核酸蛋白测定仪显示RNA的浓度为1 026.8ng/μL,A260/A280比值为2.00;A260/A230比值为2.31。15%聚丙烯酰胺-7mol/L尿素凝胶电泳显示小RNA带型区域清晰。用该方法提取的高质量的番茄叶片小RNA符合RT-PCR,Northern blot等分子生物学试验的标准。  相似文献   

猪肝脏总RNA快速提取方法   总被引：1，自引：0，他引：1  

喻晓丹 《湖北农业科学》2012,(3):621-623

采用CTAB法和改良的Trizol法提取贵州从江香猪(Sus scrofa domestica)新鲜肝脏的总RNA,通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测RNA质量。结果表明,改良的Trizol法提取的总RNA的纯度高,完整性好,优于CTAB法。且改良的Trizol法提取的猪肝脏总RNA可用于RT-PCR等后续分子生物学操作。  相似文献   

玉米花粉总RNA提取方法的比较和分析   总被引：8，自引：2，他引：6  

黄雪梅  张守涛  杨超  王芳 《河南农业科学》2009,(4)

以玉米花粉为材料,借鉴其他植物RNA的提取方法,比较了利用Trizol法、酸性酚—异硫氰酸胍法和CTAB改进法提取玉米花粉RNA的效果,利用普通琼脂糖凝胶代替甲醛变性胶电泳分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度。结果表明,CTAB改进法为其中最好的方法。  相似文献   

适合于全长cDNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA提取方法比较     

李杨  李海娜  夏颖  刘忻壑  李艳茹  许广波 《安徽农业科学》2018,46(2):63-65,77

[目的]筛选出适合于c DNA文库构建的猪苓菌核及菌丝体总RNA的提取方法。[方法]采用Trizol改良法和EASY Spin植物快速提取试剂盒法(简称试剂盒法)对猪苓菌丝及菌核的总RNA进行提取。[结果]经紫外分光光度计对所得总RNA的均一性及1%琼脂糖凝胶电泳对所得总RNA的完整性检测后发现,2种方法均可提出完整的总RNA,试剂盒法相较于Trizol改良法其所提取的总RNA质量和纯度都较好,但Trizol改良法所提取的总RNA产率比较高。[结论]LD-PCR成功合成了猪苓菌核和菌丝体的c DNA产物,呈弥散状分布在1 0005 000 bp和7502 500 bp,满足c DNA建库的要求。  相似文献   

血液总RNA提取方法的比较     

孟浩  彭贞  王闯  刘瑞兰  高庆华 《塔里木大学学报》2014,(1):46-49

为获得一个快速简洁、经济实用的提取全血总RNA的方法。我们以羊血液为试材,通过经典Trizol法比较直接从全血中提取总RNA和裂解红细胞后提取RNA的结果,采用琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和完整性,分光光度计检测浓度及含量。红细胞裂解液处理后,Trizol法提取的总RNA质量高,电泳条带整齐、清晰,测得A260/A280值在1.8~2.0,为分子生物学后续实验实用性和普遍推广奠定了基础。  相似文献   

3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究     

董姻然  陈湘宁  常希光  黄健 《安徽农业科学》2014,(8):2273-2275,2314

[目的]为了获得质量较好的芹菜茎的总RNA,为后续分子生物学试验提供基础。[方法]试验对1种RNA提取方法(Trizol法)和2种RNA提取试剂盒(RNA prep Pure Plant Kit法、RNA simple Total RNA Kit法)方法进行比较研究。[结果]RNA prepPure Plant Kit方法得率低,且OD260/OD280值低于1.8,Trizol法OD260/OD230高于2.0,且得率低于RNA simple Total RNA kit法。只有RNA simple Total RNA kit法提取的RNA质量最好,得率最高。[结论]与Trizol法和RNA prep Pure Plant Kit法相比,RNA simple Total RNA Kit法提取的芹菜茎总RNA得率高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,可以满足半定量RT-PCR的试验需要。  相似文献