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【目的】探讨应用PLGA泡沫支架材料,在体外建造组织工程化心肌组织的可行性。【方法】采用顺序消化及差速贴壁法分离纯化乳鼠心肌细胞,将分离所得的心肌细胞接种于PLGA多孔支架材料上,观测复合体内心肌细胞的生长状况、超微结构、细胞代谢率及细胞组分的变化,并将其与正常心肌和二维培养的心肌细胞进行比较。【结果】复合体内的细胞具有心肌细胞的特殊超微结构,免疫组化显示其中的α-横纹肌肌动蛋白染色呈强阳性,与二维培养的细胞相比,细胞代谢更加旺盛。【结论】采用组织工程技术有可能在体外培育出组织工程化心肌组织。 相似文献
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《西南农业学报》2017,(2)
为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术。采用分批式培养方法,研究了PK-15细胞在微载体胰酶消化放大悬浮培养及猪圆环病毒2型(PCV2)增殖工艺。结果表明,5 g/L的微载体和高糖DMEM下,采用4.0×105cells/m L的初始接种密度及培养至第2天进行换液操作工艺可以获得最佳的PK-15细胞生长效能。胰酶消化转移将PK-15细胞从1 L反应器放大至3 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,培养3 d细胞密度可达34.3×105cells/m L。采用感染复数为0.1的接毒比例,细胞接毒后在微载体上传至第3代收获毒液可获得最高的PCV2增殖效价107.25TCID50/m L。为PCV2疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。 相似文献
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《江苏农业科学》2016,(2)
分析比较了3种不同微载体悬浮培养工艺——分批换液式、消化传代放大式、循环灌注培养式对Marc-145细胞微载体培养效能及生理代谢的特点及差异,并实现了从5 L至60 L反应器放大过程的PRRSV实际增殖应用。结果表明,在5 L动物细胞反应器中使用相同的微载体用量6 g/L,分批换液式培养和消化传代放大式培养仅获得27×105~28×105cells/m L的细胞密度,低于循环灌注培养式的培养能力(59.4×105cells/m L)。根据这3种不同培养工艺的特点,设计并实施了可应用于实际生产的工艺流程,即Marc-145种子细胞以循环灌注培养方式在5 L反应器中完成初级培养,经消化传代工艺,将种子细胞放大接种于60 L反应器中进行分批换液式的二级培养,用于PRRSV的大规模增殖,结果显示PRRSV增殖滴度可达到108.3TCID50/m L。该过程成功地模拟了Marc-145细胞在工业级水平上的放大培养操作工艺,其放大倍数达到1∶3的传代系数,具备实际应用价值。 相似文献
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动物细胞大规模培养技术研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
利用动物细胞大规模培养技术可生产多种生物制品,为提高细胞活力和细胞生长密度,采用有多种添加成分的无血清培养基培养细胞,选择既有利于细胞生长又可提高培养细胞密度的微载体和条件温和、易操作、气体交换速度快的生物反应器,在线监控细胞生存环境和生理活动,减少培养过程中培养基的抑制因素,从而给细胞提供更好的生存环境;另外通过向细胞中导入抗凋亡基因,可减缓细胞凋亡的发生,提高细胞活性和蛋白产量;此外,在动物细胞大规模培养过程中,利用多孔微载体能高效、大量地增殖细胞,具有良好的应用前景. 相似文献
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对采用组织块法分离培养的大鼠心肌细胞进行了鉴定及相关的生物学特性研究,以进一步用于心脏细胞工程、组织工程的种子细胞及其他方面的研究。结果显示,分离培养出的心肌细胞呈多种形态,整体形如铺路石样,生长中的心肌细胞常伸出伪足,形状为星形,培养至第4天的心肌细胞常可相互交织形成细胞簇,出现节律性的搏动;心肌细胞的PAS糖原染色呈阳性,胞浆内大量的糖原颗粒被染成品红色;细胞凋亡-Hoechst检测试剂盒荧光染色显示,心肌细胞核内荧光物质分布均匀一致,没有出现细胞凋亡时所特有的荧光致密浓染或碎块状致密浓染现象;对第1代和第6代心肌细胞生长曲线测定显示,心肌细胞生长曲线呈"S"型,2代心肌细胞生长曲线趋于一致;心肌细胞α-sarcomaricactin(α-SA)免疫组化鉴定显示,心肌细胞呈强阳性且具有较高纯度。上述结果表明,利用该方法培养的心肌细胞具有较高的增殖能力和纯度,可作为种子细胞用于心脏的细胞工程和组织工程及其他方面的研究。 相似文献
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《云南农业大学学报(自然科学版)》2018,(6)
坡耕地的水土流失和季节性干旱对地区生态环境和农业生产造成严重负面影响。近年来,一种通过改变田间微观地貌以实现集雨目的的新型整地方式,即土壤表面微形貌加工在国外得到快速发展,并成为解决这一问题的关键。本文针对土壤表面微形貌加工技术的作业原理、在国内外不同地区作业实现的作业效果、当前作业采用的主要机具进行了系统的描述和归纳,阐明该技术可有效控制坡耕地水土流失并提高水资源利用效率。结合南方丘陵山区坡耕地实际特点,对土壤表面微形貌加工技术的应用前景和潜在价值进行了探讨和展望,认为该技术可对云南省坡耕地降雨地表径流加以综合利用,以达到控制水土流失和缓解区域干旱缺水的双重目的。 相似文献
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新生大鼠心肌细胞的分离和培养 总被引：3，自引：0，他引：3
为获得高纯度和高存活率的心肌细胞,探索心肌细胞大量培养的条件,并为进一步研究心肌细胞的细胞生物学特性奠定基础,同时为生理学和药理学研究提供细胞来源,试验采用胰蛋白酶顺序消化法及差速贴壁法,从1～2d龄新生大鼠的心肌组织中分离心肌细胞,观测心肌细胞的形态、结构、搏动状态和反映心肌细胞代谢状况的生化参数。结果表明,分离所得的心肌细胞纯度高,培养第3天就开始自发搏动,后连接成片,进而同步收缩;心肌细胞的亚显微结构包括肌丝、Z线、线粒体和大量糖原颗粒,葡萄糖比消耗率为7.44nmol/(个·d),乳酸比产率为3.83nmol/(个·d),乳酸转化率为51%,细胞代谢非常旺盛,说明试验培养条件有利于心肌细胞的气体交换和营养物质的摄取,从而有利于心肌细胞的生长。 相似文献
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小鼠心肌细胞的体外培养 总被引：5，自引：0，他引：5
对采用组织块法和酶消化法体外培养小鼠心肌细胞的结果进行了比较,并对体外培养心肌细胞的生理活性进行了初步测定。结果表明,用组织块法分离培养胎、乳鼠心肌可得到自主节律性搏动的心肌细胞;分别用1g/L胶原酶+10g/LBSA,0.5g/L胰酶+1g/L胶原酶,1g/L胰酶分离培养胎、乳鼠心肌,均可得到大量心肌细胞,且细胞活力较好,能自主博动20d以上;用上述2种方法分离培养成年鼠心肌,结果均不理想;在载有自主节律性搏动的小鼠心肌功能性细胞团的培养皿中加入Ca2+和肾上腺素后,细胞团搏动速度加快,搏动力加强;加入K+后则细胞团搏动速度减缓,搏动力减弱,其对钾、钙、肾上腺素的反应与在体内基本一致,表明体外培养的小鼠心肌细胞具有与在体心肌细胞相似的功能。 相似文献
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The culture of mammalian cells is closely related to the development of biotechnology, which has been used extensively in the research and application fields of biology and medical science. In this article, various factors affecting cell cultivation and the application of microcarrier and bioreactor on large-scale culture of mammalian ceils were reviewed. 相似文献
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本文研究了在Cephodex微载体悬浮培养系统中规模化培养鲫脑组织细胞(Gi CB)和鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2)的工艺。结果表明,Cephodex微载体适合GiCB细胞的贴壁培养,细胞贴壁期培养基中血清浓度为10%,微载体浓度为6 g/L;细胞初始接种密度为2.5×10~5cells/m L时,以转速35 r/min,每静置30 min搅拌2 min的间歇搅拌条件贴壁率最佳,8 h后贴壁率可达90%以上;增殖期以45 r/min的连续搅拌速度可获得最佳的细胞生长效能。采用优化的工艺条件,以感染复数为0.2的CyHV-2病毒接种规模化培养的GiCB细胞5 d后,出现典型的细胞病变效应,病毒滴度(TCID_(50)/m L)可达10~(6.50±0.30)。本项研究为鲫造血器官坏死症疫苗的规模化制备技术研究奠定了前期基础。 相似文献
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SD大鼠睾丸支持细胞的分离、培养、纯化及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为进一步简化、优化SD大鼠睾丸支持细胞的体外培养条件及鉴定方法,采用三酶两步消化法和差异贴壁法分离、培养、纯化SD大鼠支持细胞,并用HE染色、油红染色、Feulgen染色及透射电镜扫描其超微结构予以鉴定。结果表明：平均0．10g睾丸组织可获得2．5×10^6个支持细胞,细胞存活率90％以上,体外培养5h后开始贴壁,96h后细胞生长速率下降,其对数生长期为3—7d,整个体外生长周期约为10～15d。对获得的纯化细胞进行鉴定,发现其形态结构及超微结构与支持细胞的形态特征一致。可见,采用三酶两步消化法和差异贴壁法,可达到分离、培养、纯化SD大鼠支持细胞的目的。 相似文献
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[目的]建立牦牛子宫内膜腺上皮细胞体外分离培养方法。[方法]分别采用组织块培养法和消化培养法分离、纯化牦牛子宫内膜腺上皮细胞。[结果]组织块培养约8d细胞可汇合成片,经胰蛋白酶分次消化,可得到纯化的子宫内膜上皮细胞;使用2g／L的胶原酶Ⅱ消化2．5h,更换新鲜消化液继续消化2．5h,消化悬液经74斗“滤网过滤,400r／rain离心5min,收集沉淀,重悬后自然沉降,可得到纯净的腺细胞团。免疫细胞化学显示所得细胞角蛋白染色阳性,阳性率达到95％以上。[结论]2种方法均可得到纯净的牦牛子宫内膜上皮细胞。 相似文献
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Acquisition by innervated cardiac myocytes of a pertussis toxin-specific regulatory protein linked to the alpha 1-receptor 总被引：4，自引：0，他引：4
S F Steinberg E D Drugge J P Bilezikian R B Robinson 《Science (New York, N.Y.)》1985,230(4722):186-188
During development, the chronotropic response of rat ventricular myocardium to alpha 1-adrenergic stimulation changes from positive to negative. The alpha 1-agonist phenylephrine increases the rate of contraction of neonatal rat myocytes cultured alone but decreases the rate of contraction when the myocytes are cultured with functional sympathetic neurons. The developmental induction of the inhibitory myocardial response to alpha 1-adrenergic stimulation in intact ventricle and in cultured myocytes was shown to coincide with the functional acquisition of a substrate for pertussis toxin. A 41-kilodalton protein from myocytes cultured with sympathetic neurons and from adult rat myocardium showed, respectively, 2.2- and 16-fold increases in pertussis toxin-associated ADP-ribosylation (ADP, adenosine diphosphate) as compared to controls. In nerve-muscle cultures, inhibition of the actions of this protein by pertussis toxin-specific ADP-ribosylation reversed the mature inhibitory alpha 1-adrenergic response to an immature stimulatory pattern. The results suggest that innervation is associated with the appearance of a functional pertussis toxin substrate by which the alpha 1-adrenergic response becomes linked to a decrease in automaticity. 相似文献
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[目的]寻求适合昆明白小鼠EG细胞的培养系统和传代方法。[方法]常规方法从昆明白小鼠原始生殖细胞中分离EG细胞,用不同培养系统(EG细胞基础培养液,RH-CM,EG细胞基础培养液+MEF)及不同传代方法(机械法,酶消化法,连同饲养层消化法),研究对昆明白小鼠EG细胞分离克隆的影响。[结果]以RH-CM作为培养基效果最好,RH-CM能够更好地促进EG细胞贴壁增殖和集落的形成,有效地维持EG细胞未分化状态;酶消化法和连同饲养层消化法均能获得较高的克隆形成率。[结论]RH-CM和连同饲养层消化法可分别作为昆明白小鼠EG细胞的培养系统和传代方法。 相似文献
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采用大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESC)进行分离、传代培养,研究大鼠心肌细胞条件培养基对兔ESC分离培养效果的影响。结果显示,用SD大鼠心肌细胞条件培养基培养的兔ESC集落呈岛屿状生长,碱性磷酸酶染色呈强阳性,体外分化可形成类胚体状结构,贴壁的类胚体周边会出现许多分化的上皮样细胞或单个散在的细胞;常规冻存后再传代的兔ESC集落具有较为一致的生长特征,并呈现胚胎干细胞集落所特有的岛屿状生长形态;传至第5代的兔ESC集落核型正常率>75％。表明SD大鼠心肌细胞条件培养基可用于兔胚胎干细胞分离培养。 相似文献
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体外培养雄性新生仔猪生殖细胞,并检测其碱性磷酸酶活性及O ct-4蛋白,探讨用雄性新生仔猪生殖细胞建立干细胞系的可行性及检测方法。结果表明,雄性新生仔猪生殖细胞在BRL细胞饲养层上培养2 d,大部分生殖细胞呈碱性磷酸酶阳性(AP+),而全部呈O ct-4蛋白阴性(O ct-4-);培养1周后,生殖细胞及细胞克隆均为AP-和O ct-4-。雄性新生仔猪生殖细胞体外培养时出现2类细胞克隆,一类体积较小,数量众多,形成1周后又开始分化,仅能传至第2代;另一类细胞克隆的形态与猪原生殖细胞来源的胚胎生殖细胞(EGC)克隆相似,细胞克隆与周围细胞分界明显,而克隆中细胞相互间界限不清,这类细胞克隆易于分化,可以传至第3代;2类细胞克隆均为AP-和O ct-4-。雄性新生仔猪生殖细胞可作为干细胞系的建系材料,AP和O ct-4蛋白均不适宜用来检测体外培养的雄性新生仔猪生殖细胞及其来源的细胞克隆。 相似文献
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DU Min-qing HUANG Yue-qin LU Nai-Sheng SHU Gang ZHU Xiao-tong WANG Li-na GAO Ping XI Qian-yun ZHANG Yong-liang WANG Song-bo JIANG Qing-yan 《农业科学学报》2014,13(4):837-848
Bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs） could differentiate into various cell types including adipocytes and myocytes, which had important scientific significance not only in the field of tissue regeneration, but also in the field of agricultural science. In an attempt to exhibit the characterization and differentiation into adipocytes and myocytes of porcine BMSCs, we isolated and purified porcine BMSCs by red blood cell lysis method and percoll gradient centrifugation. The purified cells presented a stretched fibroblast-like phenotype when adhered to the culture plate. The results of flow cytometry analysis and immunofluorescence staining demonstrated that the isolated cells were positive for mesenchymal surface markers CD29, CD44 and negative for hematopoietic markers CD45 and the adhesion molecules CD31. Cells were induced to differentiate into adipocytes with adipogenic medium containing insulin, dexamethasone, oleate and octanoate. Oil Red O staining demonstrated that the porcine BMSCs successfully differentiated to adipocytes. Moreover, the findings of real-time PCR and Western blotting indicated that the induced cells expressed adipogenic marker genes （PPAR-y, C/EBP-c~, perilipin, aP2） mRNA or proteins （PPAR-3,, perilipin, aP2）. On the other hand, porcine BMSCs were induced into myoctyes with myogenic medium supplemented with 5-azacytidine, basic fibroblast growth factor, chick embryo extract and horse serum. Morphological observation by hochest 33342 staining showed that the induced cells presented as multi-nucleus muscular tube structure. And myogenic marker genes （Myf5, desmin） mRNA or proteins （MyfS, MyoD, myogenin, desmin） were found in the induced cells. In addition, the results of immunofluorescence staining revealed that myogenic marker （Myf5, MyoD, myogenin, desmin, S-MyHC） proteins was positive in the induced cells. Above all, these results suggested that the isolated porcine BMSCs were not only consistent with the characterization of mesenchymal stem cells, but also exhibited the multipotential capacity to form adipocytes and myocytes, which provided the basis to investigate the regulation mechanism involved in the selective differentiation of porcine BMSCs. 相似文献