黏膜乳杆菌原生质体的制备与再生最佳条件的确定     

刘国文  朱连勤  李鹏  王哲  龙淼 《黑龙江畜牧兽医》2011,(2):89-90

为了对从瘤胃中分离并鉴定的黏膜乳杆菌原生质体的制备与再生的最佳条件进行确定,为黏膜乳杆菌的基因操作和原生质体融合做准备,试验从影响原生质体形成与再生的菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度的四因素三水平上进行L9(34)正交试验.结果表明:黏膜乳杆菌原生质体制备与再生的最佳条件为菌体培养10 h,溶菌酶浓度为100μg/mL...  相似文献   

表达Omp1和Omp2的猪大肠埃希菌融合菌株R2的构建     

张丹琳  王文豪  张显浩  陈瑞爱  苏丹萍  贺东生 《动物医学进展》2013,34(10)

为了构建猪大肠埃希菌融合菌株,在药敏试验和MIC试验的基础上,对猪大肠埃希菌HY2株(O101,Omp1)和GXA1株(O107,Omp2)进行交叉耐药培育.以HY2(O101,Omp1,Amir,Czls)和GXA1(O107,Omp2,Czlr,Amis)为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备两亲本菌株原生质体,通过聚乙二醇(PEG)助融,进行原生质体融合,得到3株双耐药融合菌株.结果表明,猪大肠埃希菌原生质体制备和再生的最适条件是:溶菌酶浓度为200 U/mL,作用时间为25 min.筛选得到3株融合菌株R1、R2、R3,均可凝集两亲本的O抗原,其中,R2凝集性更好更稳定.进一步结合SDS-PAGE分析,显示融合菌株R2能较好的表达两亲本菌株形状,经多次传代仍能够稳定遗传.  相似文献   

捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体的快速制备与再生     

李军燕  ;杨晓野  ;王瑞  ;杨莲茹  ;张伟  ;罗晓平  ;范永生 《兽医大学学报》2014,(7):1089-1093

为快速获得大量捕食性真菌Duddingtonia flagrans原生质体并使其再生,本试验研究了酶质量浓度、酶解温度、菌龄、酶解时间对D.flagrans原生质体产生的影响,以确定D.flagrans原生质体最佳快速制备条件。结果表明,在溶壁酶2mL/L、蜗牛酶8g/L、纤维素酶8g/L时,35℃恒温条件下,酶解菌龄为2d的菌丝7h,捕食性真菌D.flagrans产生原生质体数量最多且能够再生。这为下一步转化并标记和克隆捕食性相关基因奠定了重要基础。  相似文献   

蛹虫草菌株原生质体的制备方法试验研究     

胡秀彩  吕爱军 《中兽医学杂志》2014,(5)

蛹虫草具有与冬虫夏草极相似的药理作用,可作为冬虫夏草代替品.本试验以蛹虫草菌株CM-1为出发菌株,结果表明蛹虫草菌原生质体制备的快速简便方法为:菌体液体培养96h,用0.6 mol/L甘露醇溶液作为渗透压稳定剂,取1g菌丝体以1∶20比例加入复合酶液,在pH6.8、28℃条件下酶解2.5h,获得原生质体数最多,达到5.08 × 108个/mL;原生质体再生培养基为含0.6 mol/L甘露醇PDA培养基,原生质体再生率最高为4.69％.  相似文献   

鸭疫里默氏杆菌原生质体的制备研究     

王勇  马跃  赵秦  王秋菊  万向 《现代畜牧兽医》2009,(1)

鸭疫里默氏秆菌是一种非常难以转化的细菌,国内外未见关于其质粒转化的报道,试验以鸭疫里默氏杆菌OD600为0.7时为受体菌,在高渗缓冲液中,经溶菌酶5 mg/ml于37℃作用50 min,制备的原生质体再生于再生双层固体培养基,原生质体成功再生.研究为鸭疫里默氏杆菌的质粒转化提供了一条新途径.  相似文献   

产植酸酶黑曲霉Px原生质体的制备与再生     

张卫兵  甘伯中  李帆  郭爱莲 《中国饲料》2010,(18)

本文对产植酸酶黑曲霉Px原生质体的制备和再生条件进行了研究。结果表明:在液体培养条件下培养18h的菌丝,经过0.3%β-巯基乙醇与酶液同时处理,采用pH5.0的混合酶(蜗牛酶:纤维素酶=7:3)在34℃酶解2.5h,选用0.7mol/L的氯化钠为渗透压稳定剂时,原生质体形成数和再生率均达到最高,分别为9.7×105个/mL和28.2%。  相似文献   

桑树内生真菌Macrophomina phaseolina MOD-1原生质体制备条件的优化试验     

张淑君  牟志美  姚娟  赵凯  任春久  高绘菊 《蚕业科学》2012,38(2):216-223

为了应用原生质体技术改良桑树内生产油真菌Macrophomina phaseolina MOD-1的产油性能,对影响MOD-1原生质体制备的酶液组分、菌龄、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂种类等因素进行优化。通过正交试验得到最佳酶液组合为:20mg/mL纤维素酶+20 mg/mL溶菌酶+5 mg/mL蜗牛酶。在此基础上应用响应面分析法获得影响MOD-1原生质体产量的显著因素有菌龄和渗透压稳定剂浓度,且均产生负效应。以此作为中心点进一步优化原生质体制备条件为:培养44.58 h的MOD-1菌丝,用0.66 mol/L KCl作渗透压稳定剂,30℃条件下酶解4 h。在此优化条件下,获得的MOD-1菌株原生质体产量可达7.06×106个/mL,优化条件具有实用价值。  相似文献   

产苦马豆素疯草内生真菌Undifilum oxytropis原生质体的制备和再生     

张蕾蕾  何生虎  余永涛  赵清梅  葛松 《动物医学进展》2015,(2):53-58

以产苦马豆素内生真菌Undifilum oxytropis NX-FEL001为供试菌株,研究了培养方式、菌龄、酶解时间和酶解温度等,对U.oxytropis原生质体制备和再生的影响。结果表明,U.oxytropis菌丝在质量分数为10g/L纤维素酶+10g/L蜗牛酶+1g/L溶壁酶组成的复合酶溶液,35℃恒温,80r/min振荡孵育3h左右,原生质体释放量最高;原生质体在YCM培养基上,22℃培养9d可以再生形成菌落,培养15d其再生率可达8.5%;原生质体在YCM培养基上再生后其菌落颜色与野生型U.oxytropis不一致,呈现白色;菌丝形态与野生型U.oxytropis相一致,经检测再生后菌丝仍然能够产生苦马豆素。U.oxytropis原生质体的制备,将为进行疯草内生真菌的遗传转化和基因操作研究提供重要工具,为进一步开展疯草内生真菌合成苦马豆素的分子调控机制奠定了基础。  相似文献   

糙皮侧耳原生质体制备与再生条件的研究     

涂苑楠  荆蓉  刘西周  郭成金  范寰 《饲料研究》2013,(4)

以糙皮侧耳为材料,研究酶的组成、酶解时间、酶解温度、菌龄和渗透压稳定剂对糙皮侧耳原生质体制备率和再生率的影响.结果表明:静置培养7d的糙皮侧耳菌丝体,以0.6 mol/L甘露醇溶液为渗稳剂,2％溶壁酶+2％纤维素酶+1％蜗牛酶酶体系30℃酶解3h,原生质体制备率为415万个/mL；培养9d的菌丝体以0.6 mol/L硫酸镁溶液作为渗稳剂,2％溶壁酶+2％纤维素酶+2％蜗牛酶,28℃酶解4h,原生质体最佳再生率为2.86％.  相似文献   

紫花苜蓿不同栽培品种植株再生的研究   总被引：30，自引：8，他引：22  

马晖玲  卢欣石  曹致中  葛军 《草业学报》2004,13(6):99-105,F003

离体培养条件下对紫花苜蓿地方栽培品种--陇东苜蓿、和田苜蓿、准格尔苜蓿以及引进品种Rambler苜蓿植株不同部位的再生进行了研究,结果表明,不同的苜蓿品种、外植体、外源激素种类及其浓度等因素均影响着植株的再生.陇东苜蓿下胚轴愈伤组织出愈率和体细胞胚形成率最高可达91.04%和63.75%;和田苜蓿下胚轴愈伤组织出愈率最高可达92.05%,体细胞胚形成率最高为56.82%.这2个品种在紫花苜蓿的组织培养植株再生中是较理想的试验材料;紫花苜蓿下胚轴是理想的受体材料.苜蓿愈伤组织的诱导、体细胞胚的形成以2.0 mg/L 2,4-D处理2周为最佳;在2.0 mg/L 2,4-D 0.5～2.0 mg/L 6-BA的作用下,外植体产生愈伤组织以及进一步发育的趋势较强.对体细胞胚的发育和幼苗的形成则以2.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA的激素组合进行处理.适宜的生根培养基为1/2 MS 1.0 mg/L IBA 1%蔗糖 0.7%琼脂.  相似文献