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两步多重RT-PCR快速检测苹果潜隐性病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】为建立检测3种苹果潜隐性病毒更为快速准确的方法,【方法】以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的成龄苹果树韧皮部为试材,根据基因库中苹果茎痘病毒(Apple stempitting virus,ASPV)的外壳蛋白基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别与合成的苹果茎沟病毒(ASGV)引物和苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的引物组合配伍,筛选出最佳的引物对组合。对cDNA的合成所用引物和总RNA模板进行遴选和量化,对PCR过程中cDNA的用量、引物对的终浓度、退火温度等主要影响因素进行优化。【结果】结果表明,反转录引物为Oligo(dT)18、总RNA 0.1～3.0μL时,可以得到较好的cDNA;ASPV-FR与ASGV-Pch、ACLSV-Pch引物组合优于ASPV-Pch,并且筛选出4组最佳的终浓度处理组合;cDNA用量为2.0~4.0μL、退火温度为50.0~52.9℃、循环数为35时,扩增效果较好。采用优化的多重RT-PCR体系对采自陕西和山东两省的样品进行检测,并用3种病毒的单重RT-PCR体系进行验证。【结论】结果呈现高度一致性,充分印证了该多重RT-PCR体系的准确性,适用于大量样品的快速检测。 相似文献
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3种苹果潜隐病毒多重RT-PCR检测体系的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
研究建立了能同时检测苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus, ASGV) 、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV) 和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus, ASPV) 的多重RT-PCR方法。以复合感染3种病毒的苹果‘望山红’组培苗为试材, 对影响多重PCR的反应条件进行了一系列的调整和优化。多重RT-PCR体系灵敏性测验显示, 最低能从RNA总量187.5 ng的样品中检测3种病毒的存在。多重RT-PCR产物的序列与报道的病毒序列有较高的同源性, 12个田间苹果样品的多重RT-PCR检测结果与单一PCR的结果一致, 初步证明了多重RT-PCR检测的准确性。 相似文献
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A蛋白酶联法检测苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒的研究 总被引：17，自引：0，他引：17
<正> 苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是苹果的两种主要潜隐病毒,严重影响苹果的产量和质量。检测苹果潜隐病毒的传统方法是木本指示植物二重芽接鉴定法,但这种方法耗工费时。由于两种病毒不稳定和在苹果树中含量低,用经典的血清学方法不能直接检测苹果植株粗汁液中的病毒。近几年国外采用酶联免疫吸附法(EL 相似文献
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高接病高接病是病毒病的一种,得病后树势衰弱,2～3年全树枯死。它是由带病毒的新品种作接穗进行高接所引起的。引起高接病的病毒有三种,即:褪绿叶斑病毒(CLSV)、茎沟槽病毒(SGV)、茎痘病毒(SPV)。这三种都是为害苹果的潜隐性病毒,在日本目前用的园叶海棠、三叶海棠、小叶三定子砧木均可被害。其病症的表现,决定于病毒与砧木的组合。褪绿叶斑病毒与园叶海棠、茎沟槽病毒和茎痘病毒与三叶海棠和 相似文献
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苹果褪绿叶斑病毒（简称ＣＬＳＶ）、茎沟病毒（简称ＳＧＶ）,是感染苹果的两种重要的潜隐性病毒,在苹果上通常引起慢性衰退症。当用感病材料嫁接时,往往导致衰退病急性暴发,给生产造成毁灭性损失。ＣＬＳＶ和ＳＧＶ均是通过嫁接传染,目前尚无有效的预防和治疗方法,而采用脱毒方法杜绝苗木带毒,把好育苗关,是防治病毒的根本出路。热处理是脱除苹果病毒的主要方法,这在国内已有较多的报道。但直接对试管苗进行热处理脱毒,尚未见报道。本试验系统研究了茎尖培养的试管苗,在光照培养箱内直接进行热处理的方法及优点,并采用酶联免疫… 相似文献