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小菜蛾对抑太保的敏感性及其酰胺酶的活力 总被引：1，自引：1，他引：1
不同虫龄小菜蛾对抑太保的敏感性差异较大 ,其中 4龄是 1龄的 1 1 .6倍 .不同温度下抑太保对 3龄幼虫的 LC50 随温度的升高而迅速下降 ,1 0℃时为 1 2 43 .94mg·L- 1 ,3 5℃时则下降到 5 .0 6mg·L- 1 .酰胺酶的米氏常数 (Km)为 3 .65× 1 0 - 5nmol,最大反应速度 (Vm ax)为 0 .1 465 nmol· mg- 1 ·min- 1 .4龄幼虫酰胺酶的比活力和总活力随温度的升高而增大 .4℃饲养 1 5 d、1 0℃饲养 1 0 d及 2 5℃饲养条件下 ,4龄幼虫酰胺酶的比活力差异不大 ;但 3 5℃饲养 2 d与前 3个饲养条件相比 ,4龄幼虫酰胺酶的比活力差异较大 .酰胺酶的比活力和总活力均随虫龄的增长而增大 ,4龄与 1 -3龄相比酰胺酶的比活力差异较大 ,不同虫龄酰胺酶的总活力差异显著 相似文献
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R-工程菌表达产物酯酶 B1的固定化及其降解特性 总被引：5，自引：1，他引：4
将抗性库蚊的解毒酶基因克隆到大肠杆菌中,得到R-工程菌,该工程菌的表达产物酯酶B1能高效降解有机磷、有机氯、氨基甲酸酯、菊酯等4大类农药。本研究将重组质粒pR L-B1转入大肠杆菌D H5α,以5%的接种量转接到LB液体培养基中,37℃振荡培养13h。超声波破碎工程菌,20%～80%的硫酸铵沉淀粗提后,采用海藻酸钙将R-工程菌表达产物酯酶B1进行固定化,并测定了固定化酶对其特异性底物α-乙酸萘酯的降解特性。结果表明,酶的最佳固定化浓度为0.15g·L-1,最佳固定化时间为12h,固定化酶最佳反应pH为7.0～7.5,最适温度为40℃,固定化酶显示出很高的热稳定性和重复使用稳定性,在常温下其半衰期为12d,利用双倒数法确定固定化酶的Km为1.8×10-3m m ol·L-1,Vm ax为1.45×104U·g-1,固定化酶的K m是液态酶(1.35×10-3m m ol·L-1)的1.33倍,V m ax只有液态酶(2.7×104U·m L-1)的近1/2。利用气相色谱测得其对有机磷农药对硫磷(1605)的降解率在30m in内达53.8%。 相似文献
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对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性.结果表明:构建的重组质粒经EcoR I和Xhol I双酶切后,可切下目的条带.重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性.SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0.5 mmol/L、温度37℃、诱导时间5 h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1.29μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24.13 μmol;它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21.01%、25.51%,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34.99%、35.49%. 相似文献
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对5株鸡福氏志贺菌产SHV-12型ESBLs基因进行重组表达并优化表达条件,观察了表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶特性。结果表明：构建的重组质粒经EcoRI和XholI双酶切后,可切下目的条带。重组质粒转化BL21后所表达的重组蛋白有超广谱β－内酰胺酶活性。SHV-12原核表达的最佳条件是IPTG浓度为0．5mmol／L、温度37℃、诱导时间5h;SHV-12型ESBLs亲和力最强的底物是头孢噻呋钠,Km值为1．29／μmol,较难水解的底物是头孢曲松钠,Km值为24．13μmol它唑巴坦、舒巴坦对头孢曲松钠的抑酶保护率分别为21．01％、25．51％,对头孢噻呋钠的抑酶保护率分别为34．99％、35．49％。 相似文献
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海刺猬消化腺褐藻胶裂解酶的制备及其酶学性质的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以海刺猬Glyptocidaris crenularis为原料,利用丙酮沉淀法制备褐藻胶裂解酶,并对其酶学性质进行分析。结果表明:最佳提取条件为原酶液与丙酮体积比为1∶1.4;酶反应的最适温度和pH为30℃和8.5。酶促反应结果表明:此酶的热稳定性及耐酸碱性较强,受多种金属离子的影响;EDTA对酶活力的影响较小。酶促动力学曲线表明,vm ax=5.928 U/mL,Km=9.001 mg/mL。 相似文献
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阴沟肠杆菌W-1粗酶液对氯氟氰菊酯的降解效果及其作用机理 总被引：2，自引：0，他引：2
阴沟肠杆菌w-1中提取的粗酶液,具有氯氟氰菊酯水解功能,研究了其对氯氟氰菊酯的降解特性和作用机理。研究结果表明,在35℃、pH值7.5时对氯氟氰菊酯显示最大的降解活性,对20 mg/L氯氟氰菊酯的降解率为83%。经实验测定,氯氟氰菊酯水解最大降解速率Vm ax为163.93 nmol/(m l.m in),米氏常数Km为1 167.80 nmol/m l。氯氟氰菊酯在粗酶液作用下,水解产物为α-氰基-3-苯氧基苄醇和2,2-二甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸。 相似文献
8.
提取酵母菌中的碱性磷酸酶,并对其性质做出分析.结果显示酶促反应最适pH值为10.3,初速度 V0=0.01367μmol/L·min,以对硝基苯磷酸二钠(pNPP)为底物测得Km=0.535mmol/L、Vm=0.01429μmol/L.较低浓度的Mg2 对酶有较强的促进作用,2mmol/L时达到641%,磷酸氢二钠对碱性磷酸酶有竞争性抑制作用. 相似文献
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对不同乳酸菌菌种中提取出的亚油酸异构酶进行了酶学性质的比较。结果表明,嗜酸乳杆菌CGMCC1.1854亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为30℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为18.99mmo L·L-1,Vmax为1.58μg·m L-1·min-1;植物乳杆菌CGMCC 1.557亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为45℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为14.83 mmo L·L-1,Vmax为1.75μg·m L-1·min-1;植物乳杆菌3-9亚油酸异构酶的最适p H为6.5,最适温度为45℃,以亚油酸为底物时酶的米氏常数Km为14.26 mmo L·L-1,Vmax为1.94μg·m L-1·min-1。 相似文献
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德氏乳杆菌亚油酸异构酶酶学性质 总被引：2，自引：1，他引：1
对从德氏乳杆菌保加利亚亚种中提取出来的亚油酸异构酶进行酶学性质研究。结果表明,该酶最适pH为6.0;最适温度为40℃,此时酶活力最高;金属离子Mg2+、Na+、Zn2+可使酶活力有所提高,Fe2+和Mn2+离子对酶促反应有明显的抑制作用;以Lineweaver-Burk双倒数作图法求得亚油酸异构酶的Km为0.0285 mol.L-1,Vm为2.31 mg.mL-1.h-1。 相似文献
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为了研究复合菌系分解纤维素的分解特性,将从复合菌系中分离的一株厌氧细菌WSC-B(Clostridium sp.)与另外2株好氧细菌(Bacillus sp.和Clostridiaceae sp.)重新组合为一个新的复合菌系F1,通过减重法分析F1纤维素分解能力,利用3,5-二硝基水杨酸显色法(DNS法)分析F1产生的几种纤维素酶的活性。结果表明:复合菌系在接种后10 d可使水稻秸秆和滤纸分别减重73.9%和70.6%。WSC-B、WSC-A、WSC-5比例为3∶2∶1时,降解效果最佳。复合菌系F1的纤维素滤纸酶活、外切酶、内切酶、β-葡萄糖苷酶的最大值分别为16.26 U·m L-1、56.25 U·m L-1、30.67 U·m L-1和10.81 U·m L-1。 相似文献
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河田鸡和艾维茵肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54.84 U.mg-1,纯化倍数为8.86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)制剂.艾维茵肉鸡睾丸NAGase经Sephacry S-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171.50 U.mg-1,纯化倍数为19.8倍的NAGase制剂.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:河田鸡和艾维茵肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5.6、5.7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3.0-9.2、4.0-9.2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数(Km)分别为0.223、0.319 mmol.L-1,最大反应速度(Vm)分别为9.438、6.238μmol.L-1.m in-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85.74、73.47 kJ.mol-1. 相似文献
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【目的】检测致病性大肠埃希氏菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型,初步研究β-内酰胺酶抑制剂(BLI)-他唑巴坦的抑酶保护作用。【方法】对产生ESBLs的5株致病性大肠埃希氏菌,设计并合成TEM-1和是SHV-12对引物,用PCR方法进行了ESBLs的DNA扩增、测序和基因型分析;用试管二倍稀释法测定头孢噻呋与BLI-他唑巴坦钠以不同配比对产生ESBLs大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度。【结果】从产生ESBLs细菌中均扩增出了TEM型ESBLs产物,但未扩增出SHV型ESBLs产物;头孢噻呋与BLI-他唑巴坦钠(质量比1∶1～8∶1)联合使用,对产生ESBLs的大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度较头孢噻呋单独使用基本降低,最高可降低16倍。【结论】国内畜禽产生ESBLs的大肠埃希氏菌未通过质粒进行细菌间耐药基因的交换,ESBLs的产生与生物种属没有关系,BLI-他唑巴坦有较强的抑制ESBLs作用。 相似文献
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木霉T21和T22原生质体制备和再生研究初报 总被引：4，自引：0，他引：4
采用不同菌龄、酶液配比、缓冲液-稳定剂系统、酶解时间等条件对木霉T21、T22原生质体制备和再生影响的试验表明,木霉T21和T22原生质体制备和再生的最适条件为:以纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5.0:2.5:2.5(g·L-1)的酶液配比,0.2mol·L-1磷酸缓冲液(phosphatebuffersolution,PBS),pH值5.8和0.6mol·L-1蔗糖组成的缓冲液稳定剂系统,将培养了20h的菌丝体在30℃下,酶解3h,最后获得原生质体数量平均约为2.7×1010个·L-1。 相似文献
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羧酸酯酶与棉铃虫对有机磷杀虫剂抗性的关系 总被引：6，自引：0，他引：6
以对有机磷杀虫剂敏感的品系(SS) 和抗性的品系(R2) 为试虫材料, 利用生测和生化分析两种方法研究了羧酸酯酶在棉铃虫对有机磷杀虫剂抗性形成中的作用。结果表明: TPP对久效磷、辛硫磷的增效比在R2品系中分别为2.76 和2.46倍, 在SS品系中分别为1.85 和1.48 倍; 两品系羧酸酯酶的Km 和Vm ax之间存在显著的差异, R2 和SS品系羧酸酯酶的米氏常数Km 、Vm ax分别为76.74 μm ol/L、56.29 nm ol/ (m in·m g) 和107.39 μm ol/L、44.40 nm ol/ (m in·m g); 两品系的羧酸酯酶对TPP、久效磷和辛硫磷的抑制反应也不同,三种化合物对SS品系的抑制中量I50分别为39.21,68.80 和0.25 μg/m L, 对R2 品系的I50分别为62.95, 91.05 和0.41 μg/m L。由此认为: 羧酸酯酶解毒代谢活性的增加是棉铃虫对有机磷杀虫剂产生抗性的机理之一。 相似文献
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山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较 总被引：3，自引：3，他引：0
山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)比活力为85.30 U.mg-1,纯化倍数为10.48.睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537.00 U.mg-1,纯化倍数为59.20.睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点pI为5.05.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5.70和5.60,酶在pH为3.00-8.43时较稳定,而pH>8.43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活.睾丸NAGase在40℃下处理30 min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30 min,酶活力保持稳定,酶催化pNP-NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的Km分别为0.17和0.21 mmol.L-1,Vm分别为8.82和7.25μmol.L-1.min-1,活化能分别为57.57和79.47 kJ.mol-1. 相似文献
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为了提高发酵基质中LGG的活菌数及L-乳酸产率,以豆渣和黄浆水为培养基质,选用生长条件粗放、仅产L-乳酸的鼠李糖乳杆菌为发酵菌株,添加促生因子以提高L-乳酸产率.通过单因素试验设计,以L-乳酸含量为特征指标,筛选能够促进鼠李糖乳杆菌生长、提高L-乳酸含量的促生因子及豆渣与黄浆水的最佳比例.采用响应面设计优化鼠李糖乳杆菌发酵豆渣和黄浆水产L-乳酸工艺条件.结果表明,在豆渣与黄浆水以1∶4.80为基础培养基,添加0.06％烟酸、1％精氨酸和蛋氨酸(m精氨酸∶m蛋氨酸=2.21∶1)、6％葡萄糖和低聚果糖(m葡萄糖∶m低聚果糖=1.57∶1),接种量3％,pH6.2,37℃,发酵72 h的条件下L-乳酸含量为2.35％. 相似文献
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复方制剂中黄芩甙成分在奶牛血浆和乳中药动学的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
文章以高效液相色谱 (HPL C)法为定量手段 ,研究复方制剂中黄芩甙经子宫内灌注给药后在奶牛血浆和乳汁中药物代谢动力学特征。采用 MCPKP药代动力学程序处理药时数据 ,分析黄芩甙在血浆和乳中的药动学参数。结果表明 ,黄芩甙在血浆、乳中的药动学特征均符合一级吸收一室开放模型。黄芩甙在血浆中的主要药动学参数为 :C0=0 .37︼g· m L- 1 、Ka=1.73· h- 1 、K =0 .2 5· h- 1 、t1/ 2 Ka=0 .70 h、t1/ 2β=2 .93h、Cm ax=0 .2 4︼g· m L- 1 、Tmax=2 .2 3h、AU C=1.5 2 m g· (L h) - 1 、Tlag=0 .5 0 h。黄芩甙在乳汁中的主要药动学参数为 :C0 =0 .76︼g· m L- 1 、Ka=0 .88· h- 1 ,K=0 .38h- 1、t1/ 2 Ka=0 .79h、t1/ 2 β=1.82 h、Cm ax=0 .31︼g· m L- 1、Tmax=3.2 7h、AU C=2 .0 0mg· (L h) - 1、Tlag=1.6 0 h。 相似文献
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采用Ni-NTA亲和层析法对基因重组菌中的羟基阿特拉津脱乙胺基水解酶(AtzB)进行分离纯化,并对该酶的典型酶学性质进行研究.纯化处理后,AtzB的纯度提高15倍,酶活回收率高达15.2％.酶学性质研究表明,AtzB的最适反应温度为40℃;最适反应pH为9.0.在最适反应条件下,AtzB对底物最大反应速率Vmax为3.17μmol·L-1·min-1,米氏常数Km为0.45 mmol·L-1.反应缓冲液中Cu(Ⅱ)对酶活力有相对较强的抑制作用(P＜0.05),Zn(Ⅱ)对酶活力影响相对较小(P＜0.05),而Co(Ⅱ)、Cr(Ⅲ)、Ca(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)则对酶活力基本没有影响.盐度对AtzB活力影响较大,当缓冲液中NaCl浓度达到1 mol·L-1时,AtzB完全失活. 相似文献
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采用Ni-NTA亲和层析法对基因重组菌中的羟基阿特拉津脱乙胺基水解酶(AtzB)进行分离纯化,并对该酶的典型酶学性质进行研究。纯化处理后,AtzB的纯度提高15倍,酶活回收率高达15.2%。酶学性质研究表明,AtzB的最适反应温度为40℃;最适反应pH为9.0。在最适反应条件下,AtzB对底物最大反应速率Vmax为3.17μmol.L-1.min-1,米氏常数Km为0.45 mmol.L-1。反应缓冲液中Cu(Ⅱ)对酶活力有相对较强的抑制作用(P<0.05),Zn(Ⅱ)对酶活力影响相对较小(P<0.05),而Co(Ⅱ)、Cr(Ⅲ)、Ca(Ⅱ)和Ni(Ⅱ)则对酶活力基本没有影响。盐度对AtzB活力影响较大,当缓冲液中NaCl浓度达到1 mol.L-1时,AtzB完全失活。 相似文献