四倍体菘蓝ISSR-PCR反应体系优化与遗传差异分析     

段英姿 《江苏农业科学》2012,40(9):36-39

采用单因子试验,研究引物、dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶及退火温度对PCR扩增的影响,用其建立优化四倍体菘蓝的ISSR-PCR反应体系,分析不同四倍体菘蓝株系的遗传差异性.结果发现ISSR-PCR最佳反应体系为:在25 μL的反应体系中,引物浓度为0.76 μmol/L,dNTPs浓度为190 μmol/L,MgCl2浓度为200 μmol/L,Taq DNA 聚合酶用量为1.5U,模板DNA浓度为20 ng/μL;确定了不同引物最佳退火温度;菘蓝株系间具有中等偏高的遗传差异性,多态性条带达58.22％.表明采用单因子试验可以快速建立ISSR-PCR反应体系,可用于菘蓝遗传差异性分析.  相似文献   

山核桃SSR反应体系优化   总被引：2，自引：0，他引：2  

洪丹丹  王正加  黄坚钦 《西南林学院学报》2007,27(1):51-54

优化SSR反应体系是山核桃SSR遗传图谱构建的基础.通过对PCR反应中Taq聚合酶用量、dNTP浓度、引物浓度、Mg2 浓度和模板DNA量的组合试验,确定了山核桃SSR的最佳反应体系,即在30μL反应体系中,含600 ng模板DNA,1×PCR Buffer,2.0UTaq聚合酶,0.22mmol/L dNTP,1.0 mmol/L Mg2 ,0.13μmol/L引物.  相似文献   

花生MITE反应体系优化及其遗传多样性分析     

徐彪  王佰众  李玉发  杨翔宇  王伟  牛海龙  李伟堂  刘红欣  吴松权  何中国 《山东农业科学》2022,54(1):1-6

为了建立适宜不同来源花生种质遗传差异分析的MITE反应体系,本研究从反应体系总量、Taq PCR Mix用量、引物浓度、模板DNA浓度及退火温度、循环次数方面对反应体系进行优化,得到的最佳反应体系为:反应总体积10μL,模板DNA 20 ng,引物(15μmol/L)2μL,Taq PCR Mix 5μL.反应程序为9...  相似文献   

大花君子兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化   总被引：4，自引：0，他引：4  

庞赫  郭太君  胡志军  潘肃 《吉林农业大学学报》2010,32(2):167-171

以大花君子兰为材料研究了PCR反应体系的主要成分及退火温度对君子兰ISSR扩增结果的影响,并对影响PCR反应体系的主要成分及退火温度进行筛选和优化,确立了适合君子兰ISSR-PCR分析的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Mg2+为2.0 mmol/L,模板DNA用量为50 ng/μL,Taq酶0.4 U,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.4 mmol/L。筛选出了13个适宜君子兰遗传分析的ISSR引物,确定最适宜退火温度为52~56℃。  相似文献   

椰子SSR反应体系的建立和优化   总被引：6，自引：0，他引：6  

柳晓磊  汤华  李东栋  王茜  周蓉  林艳青 《华中农业大学学报》2007,26(5):676-679

为摸索适宜椰子的SSR反应体系,分析了PCR反应体系中的Mg2 浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度对扩增结果的影响,建立了适合椰子的SSR反应体系。研究结果表明:在20μL反应体系中,Mg2 、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5 mmol/L、0.3μmol/L、0.2 mmol/L;TaqDNA聚合酶的最佳使用量为1 U,模板DNA应加入50 ng,引物最佳退火温度比Tm值较小者低2~3℃。在参数优化的基础上,应用标记分析该反应体系对24个海南不同地区高种椰子样品进行SSR分析,不同样品间DNA谱带多态性丰富,本研究建立的分析体系将为今后椰子资源的SSR分析奠定良好的研究基础。  相似文献   

番茄ISSR-PCR反应体系的优化与验证          下载免费PDF全文

李永平  康建坂  林珲 《农学学报》2016,6(3):46-50

研究番茄ISSR-PCR反应体系中主要因子TaqDNA聚合酶、dNTP、引物和DNA模板的浓度及各引物的退火温度对扩增结果的影响,建立番茄ISSR- PCR反应的优化体系,为ISSR 技术在番茄分子辅助育种应用提供参考。实验确定番茄ISSR-PCR 20 μL反应体系为：2.0 μL 10×PCR缓冲液,0.3 μmol/L引物,50 ng模板DNA,0.5 mmol/LdNTP,2 U TaqDNA聚合酶,各引物最佳退火温度有所不同。  相似文献   

槭属树种ISSR-PCR反应体系的确立   总被引：1，自引：0，他引：1  

张冬梅  魏华丽  苏金乐  钱又宇 《上海农业学报》2008,24(1):51-54

采用改良CTAB法提取槭属树种总DNA,分析了Taq聚合酶、样本浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度以及引物浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响,用四因素三水平正交法确定了Taq酶浓度、引物浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度的最佳组合,并优化模板浓度,建立了稳定、可重复的槭属树种ISSR-PCR最佳反应体系及PCR扩增参数.ISSR-PCR的最佳反应体系为:在10 μL的反应体系内,Taq聚合酶宜加入0.25 U,dNTP最适浓度为0.3mmol/L,模板最适浓度为4 ng/μL,引物最适浓度均为0.5 μmol/L,不同的引物有其各自合适的Mg2 浓度.槭属树种ISSR-PCR引物筛选及反应体系的建立,为利用ISSR标记技术开展槭属树种的系统进化和亲缘关系研究提供一个强有力的工具.  相似文献   

香菇反转录转座子间扩增多态性（IRAP）PCR反应体系的研究     

肖扬 《勤云标准版测试》2009,29(7)

为了开发香菇反转录转座子间扩增多态性标记(IRAP),建立稳定的IRAP-PCR反应体系,对影响IRAP-PCR的主要因素进行了优化筛选.确定了最佳反应体系为:20μl反应体系中,包含30ng模板DNA,0.30μmol/L引物,0.3mmol/L dNTPs,2.0 mmol/L Mg2+及0.75UTaq酶.梯度PCR试验筛选得到的最佳退火温度为56.1℃.采用上述最佳反应体系和引物LTR1L-MarY1L对香菇18个菌株进行了IRAP-PCR扩增,验证了该体系的可靠性.  相似文献   

澳洲坚果SSR体系的建立及F_1代的鉴定     

李玉宏  倪书邦  贺熙勇  马静 《热带农业科学》2016,(9):30-34

为了探索澳洲坚果SSR-PCR的可行性,采用单因素分析法对影响PCR的各个因素进行分析,建立SSR-最佳反应体系。结果表明:在25μL PCR反应体系中,当Mg~(2+)浓度、d NTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为2.50 mmol/L、0.10 mmol/L、0.40μmol/L、1.25 U时,PCR扩增效果最好。筛选到19对可得到扩增结果的SSR引物,其中有2对在以900为母本、294为父本的组合中PCR扩增结果存在差异,可以应用于900×294组合的F1代鉴定。  相似文献   

人类微卫星多重PCR扩增体系的建立     

范晶 《湖北农业科学》2011,(18):3869-3870,3874

采用碘化钾法从血液中提取基因组DNA,根据GenBank数据库中基因序列设计引物,分析不同引物组合内部可能出现的引物潜在配对作用,针对多重PCR反应体系中的引物、反应缓冲液和镁离子浓度设计实验组合。结果表明,25μL反应体系中包含1.4×PCR buffer,2.5 mmol/L MgCl2,0.6μmol/L的各引物对浓度时,3对引物都能扩增得到条带清晰,亮度均一的目标产物。  相似文献