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河田鸡和艾维菌肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54．84U·rag～,纯化倍数为8．86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）制剂．艾维菌肉鸡睾丸NAGase经SephacryS-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171．50U·mg-1,纯化倍数为19．8倍的NAGase制剂．以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学．结果表明：河田鸡和艾维菌肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5．6、5．7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3．0—9．2、4．0-9．2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数（k）分别为0．223、0．319mmol·L-1,最大反应速度（k）分别为9．438、6．238μmol·L-1·min-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85．74、73．47kJ·mol-1． 相似文献
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山麻鸭睾丸和肝脏中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离提取及其性质的比较 总被引：3，自引：3，他引：0
山麻鸭的睾丸和肝脏经硫酸铵分级沉淀分离、DEAE-32离子交换柱层析,获得的肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.2.1.52)比活力为85.30 U.mg-1,纯化倍数为10.48.睾丸NAGase再进一步通过Sephacryl S-300凝胶过滤纯化,获得的NAGase比活力为5537.00 U.mg-1,纯化倍数为59.20.睾丸NAGase经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳,出现单一蛋白带,测定等电点pI为5.05.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:山麻鸭睾丸和肝脏NAGase的最适pH分别为5.70和5.60,酶在pH为3.00-8.43时较稳定,而pH>8.43时很快失活;酶的最适温度分别为45和60℃,当温度为80℃时酶完全失活.睾丸NAGase在40℃下处理30 min,酶活力保持稳定;而肝脏NAGase在30℃下处理30 min,酶活力保持稳定,酶催化pNP-NAG水解反应遵循米氏方程,睾丸和肝脏NAGase水解pNP-NAG的Km分别为0.17和0.21 mmol.L-1,Vm分别为8.82和7.25μmol.L-1.min-1,活化能分别为57.57和79.47 kJ.mol-1. 相似文献
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河田鸡和艾维茵肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54.84 U.mg-1,纯化倍数为8.86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)制剂.艾维茵肉鸡睾丸NAGase经Sephacry S-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171.50 U.mg-1,纯化倍数为19.8倍的NAGase制剂.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:河田鸡和艾维茵肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5.6、5.7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3.0-9.2、4.0-9.2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数(Km)分别为0.223、0.319 mmol.L-1,最大反应速度(Vm)分别为9.438、6.238μmol.L-1.m in-1;NAGase催化pNP-NAG反应的活化能分别为85.74、73.47 kJ.mol-1. 相似文献
4.
以D-果糖、葡萄糖、D-甘露糖和N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)为效应物,研究它们对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase,EC3.3.1.52)活力的影响及抑制机理.结果表明:在特定浓度范围内,低浓度的葡萄糖对NAGase活力表现为激活作用,而D-果糖、D-甘露糖和NAG对酶活力均表现为抑制作用,抑制程度从高到低依次为D-甘露糖、NAG、D-果糖;D-甘露糖表现为可逆的竞争型抑制,抑制常数KI为18.36 mmol·L-1;NAG表现为可逆的混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为16.98和55.26 mmol·L-1. 相似文献
5.
将筛选的5株R/r大于3，酶活力200-300U·mL^-1，氨态氮产生量大于100mg·L^-1，且适宜在起始pH5．0-6．0、35℃下生长的厌氧蛋白质氨化细菌应用于pH5．5的酸化液。其中产低温酸性蛋白酶的k3837和产低温偏酸性蛋白酶的m1B94菌株，生物量为0．315和0．643时产酶活性达到302．2、271．7U·mL^-1；使酸化液氨态氮含量分别提高了373．47、302．89mg·L^-1，从而将酸化液pH调至7．29、7．03，为产甲烷菌创造适宜生长、产气条件。 相似文献
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猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的纯化与酶学性质研究 总被引：6，自引：0，他引：6
【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定;采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17 606.15 U•mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖（pNP-NAG）水解的最适pH为5.5,最适温度为50℃。该酶在pH 3.0～8.9区域较稳定;在45℃以下处理30 min,酶活力保持稳定。酶分子中亚基的分子量为58.03 kD,等电点为9.42。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为1.94 mmol•L-1,最大反应速度Vm为27.53 µmol•L-1•min-1。酶催化pNP-NAG反应的活化能为88.73 kJ•mol-1。【结论】本试验选用的分离纯化的方法是可行的。 相似文献
7.
以甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛和戊二醛为效应物，研究它们对中华绒螯蟹N·乙酰·归国·氨基葡萄糖苷酶（NAGase）活力的影响．结果表明：戊二醛对NAGase活力影响不大；低浓度的甲醇和乙醇对NAGase有激活作用；高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇和甲醛对NAGase的作用为可逆抑制．甲醇、乙醇、异丙醇对NAGase表现出竞争性抑制，抑制常数（K）分别为3．663、0．360和0．480mol·L^-1；甲醛表现为非竞争性抑制类型，其K1为0．288mol·L^-1． 相似文献
8.
为制备免疫原以测量个体生长和繁殖过程中所释放的几丁质酶,从大型潘（Daphniamagna）体内提纯了N．乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3．2．1．52）,经硫酸铵沉淀分级分离、DEAESephadex A-25阴离子交换柱层析和SephadexG-150分子筛柱层析纯化等步骤,酶的纯化倍数为20．09。纯酶比活力为2243380U·mg^-1。酶分子中各亚基的分子量分别为128,99和71Ku。根据测试,酶促反应的米氏常数为0．300mmol·L～,最大反应速度为0．072um01．mg^-1·min^-1。酶催化底物分解的最适pH为7．0,最适反应温度为45℃;酶在值4．2-7．8的范围内活性处于高位;在不高于35℃的温度下处理30min,酶活性下降不明显。至于从大型潘培养液中获得的NAGase,其催化底物分解的最适pH值为7．4,最适反应温度为40℃,该酶在pH值4．6-7．8的范围内活性处于高位,在不高于40℃下处理30min,酶活性下降不明显。这显示被提纯的酶和培养液中分离的酶在温度、pH以及热稳定性和酸碱稳定性方面均具有较高程度的相似性,有可能属于相同分子型。 相似文献
9.
从山东滨海盐碱地种植菊芋的根际土壤中分离得到能产菊粉酶的菌株46株,经过进一步的摇瓶复筛,获得了产菊粉酶能力较高的1株菌株,经初步鉴定为青霉Penicillium sp.B01.在对其发酵条件优化后,确立了Penicillium sp.B01最适宜的产酶条件为(g·L-1):菊芋提取液(EJA)120、酵母膏(YE)25、NH4H2PO4 2.5、NaCl 5.0、FeSO4·7H2O 0.1、ZnSO4·7H2O 0.1,初始pH 7,接种2.5×106 mL-1的孢子悬浮液3.75%, 250 mL的三角瓶中装40 mL的发酵培养基,在30 ℃、170 r·min-1下发酵3 d后菊粉酶活性最高可达25.78 U·mL-1.此酶主要为外切酶. 相似文献
10.
醇、醛类有机物对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响 总被引：1，自引：1，他引：1
以甲醇、乙醇、异丙醇、甲醛和戊二醛为效应物,研究它们对中华绒螯蟹N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响.结果表明:戊二醛对NAGase活力影响不大;低浓度的甲醇和乙醇对NAGase有激活作用;高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇和甲醛对NAGase的作用为可逆抑制.甲醇、乙醇、异丙醇对NAGase表现出竞争性抑制,抑制常数(KI)分别为3.663、0.360和0.480 mol.L-1;甲醛表现为非竞争性抑制类型,其KI为0.288 mol.L-1. 相似文献
11.
通过对黄曲霉和黑曲霉发酵麻疯树废弃饼粕所产蛋白酶的酶学性质进行初步研究,确定黄曲霉所产蛋白酶最适催化温度为45℃;最适pH值为6．0;Vmax=3333．33μg·min^-1,Km=31．25mg·mL^-1;Fe^3＋能对其活力产生强烈的抑制作用;适量有机溶剂对蛋白酶活力有一定促进作用。黑曲霉所产蛋白酶最适催化温度为50％;最适pH值为4．0;Vmax=18．05μg·min^-1,Km=2．23mg·mL^-1;有机溶剂对蛋白酶活力有一定促进作用;Na^＋和Hg^2＋对蛋白酶活力则有十分强烈的抑制作用。 相似文献
12.
对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)在全氟己酸中水解pNP-NAG活力的影响进行了研究.结果表明,全氟己酸对NAGase具有可逆抑制,IC_(50)为0.29 mg·mL~(-1).应用Lineweaver-Burk双倒数法可知,全氟己酸对NAGase的抑制类型为竞争型抑制,与自由酶结合的抑制平衡常数(K_I)为0.18 mg·mL~(-1).采用底物反应的动力学方法建立全氟己酸对NAGase的抑制动力学模型,其微观速度常数可以在全氟己酸对NAGase的底物反应中求出. 相似文献
13.
从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性.当湿菌体与10 g·L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30 ℃和120 r·min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol·L-1.通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析.B.megaterium EJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50 ℃和5.6.低于40 ℃,GAD在pH 5～6范围内较稳定.2.5 mmol·L-1 Mg2+对GAD活力具有显著的促进作用,活力提高了13.85%. 相似文献
14.
ApNPV侵染对柞蚕蛹体内保护酶活性的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为研究柞蚕核型多角体病毒（Antheraec pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV）侵染后病毒与宿主间的拮抗关系,测定ApNPV侵染后柞蚕蛹体内SOD、CAT和PO活性变化。结果表明：ApNPV侵染使柞蚕蛹体内SOD活性呈先下降再上升后又下降的变化趋势,接种后48h和96h是酶活性变化的两个转折点,48h是酶活性差值低谷,雌、雄平均较对照低622U·mL^-1;96h是酶活性差值高峰．雌、雄平均较对照高850．5U·mL^-1。CAT活性变化呈先上升后下降的趋势,接种后48h是酶活性变化的转折点,雌、雄平均较对照高309．5U·mL^-1;72h后酶活性变化趋于平稳。PO活性亦呈先上升后下降的变化趋势,接种后48h是酶活性变化转折点,雌、雄平均较对照高2173．5U·mL^-1。雌、雄蛹间酶系活性变化趋势相似但程度不同,雌蛹酶活性变化幅度大于雄蛹。 相似文献
15.
I类乙醇脱氢酶（ADH）在乙醇的肝代谢中发挥重要作用，由ADHl，ADH2和ADH3组成。根据序列数据设计一对引物，利用RT—PCR同时克隆乙醇脱氢酶I类基因全长eDNA。测序后的eDNA被克隆在表达载体pTYBll上并在大肠杆菌中稳定表达。纯化获得的酶通过其在340nm处吸光值的变化进行酶活性测定。经检测重组ADHl，ADH2和ADH3的酶活力分别为2．0±0．3，0．8±0．2，1．5±0．2U·mg^-1。 相似文献
16.
《福建农林大学学报(自然科学版)》2020,(3)
探究PUGNAc对罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的抑制作用.通过建立PUGNAc对NAGase的抑制动力学模型,表明PUGNAc对NAGase的抑制是一种缓慢的、可逆的反应,IC_(50)为0.18μmol·L~(-1),抑制类型为混合性;与自由酶结合的抑制平衡常数K_I为0.110μmol·L~(-1),K_(IS)为0.827μmol·L~(-1);微观速率常数k_(+0)大于k′_(+0),表明游离酶分子比抑制剂存在下的酶—底物复合物更脆弱,从而推测底物的存在对PUGNAc抑制下的NAGase起着保护作用. 相似文献
17.
采用正交试验设计方法,建立了粗毛淫羊藿ISSR分析的优化反应体系：即20μL反应体系中含有10×buffer、2．0mmol·L^-1Mg^2＋、0．10mmol·L^-1 dNTP、1．5UTaq酶、40ng模板DNA和0．6μmol·L^-1引物;PCR反应程序为：95℃5min;94℃30s,52℃45s,72℃2min,共35个循环;72℃10min,4℃保存。 相似文献
18.
《福建农业学报》2015,(12)
以中国明对虾体壁N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)为研究对象,探讨10种有机溶剂对酶活力的影响。结果表明:甲醇、乙醇、正丙醇、乙二醇、丙三醇、二甲亚砜、二氧六环和丙酮对NAGase的作用均表现为低体积分数时有一定的激活作用,高体积分数时转化为抑制作用;而正丁醇在0%~55%范围对NAGase表现为激活作用;甲醛对NAGase的抑制作用则呈现明显的浓度效应。进一步研究甲醛和丙酮对NAGase的作用机理,结果显示:甲醛对NAGase的抑制作用是一个可逆过程,而低体积分数丙酮对NAGase的激活作用和高体积分数丙酮对NAGase的抑制作用均属于可逆过程。说明不同有机溶剂对NAGase活力有不同的影响,NAGase在不同体积分数有机溶剂中的催化作用存在差异性。 相似文献
19.
对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化.结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量.嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g·L-1,蔗糖5 g·L-1,NaCl 2.5 g·L-1,K2HPO4 2.0 g·L-1,Tween-80 1 g·L-1,初始pH为7.5,28 ℃培养48 h. 相似文献
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为确定盐析分离猪胃蛋白酶的最佳分离工艺条件,以猪胃粘膜为原料,经盐酸浸提,通过乙醇辅助盐析对照试验、透析冷冻干燥得猪胃蛋白酶比活力为102927.5U·g^-1,酶经fSephadex-G75洗脱得到单一蛋白峰,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,表现为单一蛋白,酶的亚基相对分子质量约为35ku。 相似文献