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1.
乳牛布鲁氏菌病PCR诊断试剂盒的实验室评估 总被引：1，自引：0，他引：1
对前期研制的布鲁氏菌omp25基因-PCR试剂盒的保存期、特异性和可重复性进行了测定，并应用该试剂盒对采自宁夏、甘肃、内蒙古、山西、黑龙江、新疆省（区）的98头血清凝集试验（SAT）阳性乳牛的6批98份乳样和350头SAT阴性乳牛的2批350份乳样进行了检测。检测结果显示，PCR试剂盒与SAT的阳性符合率为100％（98／98），阴性符合率为97．71％（342／350）；从SAT阴性乳牛的乳样中。用PCR试剂盒检出8份阳性，表明其敏感性高于SAT；对2株田间野毒Brgs和Br-nmg株进行了克隆与测序，二者与标准菌株序列的同源性分别为99．8％和100％。试验结果证实，本试剂盒的可重复性良好，特异性较高，-20℃下的有效保存期为5个月。 相似文献
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《动物医学进展》2021,(8)
为调查新疆某地区牛、羊布鲁氏菌感染情况,收集该地区3个牧场共3 223份样本,其中牛血液样本1 404份、羊血液样本1 590份、牛流产胎儿样本66份、羊流产胎儿样本75份、牛生鲜乳样本65份及羊生鲜乳样本23份。血液样本经血清分离后进行虎红平板凝集试验(RBPT),流产胎儿样本的部分脏器及生鲜乳样经DNA提取后进行聚合酶链反应(PCR),将PCR结果为阳性的样本进一步进行PCR扩增及系统进化树分析。RBPT结果显示,3个牧场RBPT平均阳性率为牛6.8%,羊9.5%;其中牧场A阳性率为牛7.1%,羊9.1%;牧场B阳性率为牛11.7%,羊10.8%;牧场C阳性率为牛4.2%,羊9.1%。经PCR共鉴定出54份布鲁氏菌阳性样本,其中包括牛流产胎儿22份、羊流产胎儿30份、羊生鲜乳1份及牛生鲜乳1份,其余均为阴性。从上述PCR阳性样本中共鉴定出38份为羊种布鲁氏菌,其中包括牛流产胎儿16份、羊流产胎儿20份、牛生鲜乳1份及羊生鲜乳1份。系统进化树分析表明,鉴定出的羊种布鲁氏菌与内蒙古地区、挪威及印度等国分离的羊种布鲁氏菌生物3型菌株亲缘关系非常接近。综上所述,羊种布鲁氏菌是引起该地区牛、羊布鲁氏菌病的主要病原菌。研究结果为新疆地区控制和预防布鲁氏菌的感染提供了流行病学依据。 相似文献
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本试验以布鲁氏菌致病力因子VirB7下游至VirB9上游基因序列为目的扩增片段,设计上、下游引物,优化血样、奶样中布鲁氏菌基因组DNA的提取方法,建立布鲁氏菌内参PCR(IR-PCR)检测方法,用于血液、奶液样本中布鲁氏菌的检测。结果显示,内参PCR法有效地降低了PCR法诊断布鲁氏菌的假阴性率,且检测结果与常规的布鲁氏菌的诊断方法(细菌培养分离鉴定、iELASA)一致,该方法不仅提高了常规布鲁氏菌诊断方法的效率及灵敏度,而且降低了其假阴性和假阳性率。对血样、奶样的检出量分别为35CFU/mL、350 CFU/mL,适合于血样、奶样中布鲁氏菌的检测。 相似文献
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布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。 相似文献
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为了诊断引起内蒙古羊场怀孕母羊流产的病原因素，通过对流产母羊血清、流产胎儿和胎衣等样本进行抗体检测、病理剖检、PCR扩增、核苷酸序列比对、同源性分析和构建系统进化树等方法进行检测分析。结果布鲁氏菌检出率最高(34.28%),流产衣原体次之(28.57%),伯氏柯克氏体与布鲁氏菌的混合感染和3种病原体的混合感染检出率最低(2.86%)。说明检测羊场中均存在流产衣原体、伯氏柯克氏体和布鲁氏菌单独感染或混合感染的情况，且3种病原体保守性较高，为检测羊场及周边其他羊场疫病防控提供了科学依据。 相似文献
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目的探索适合青海省海西州地区牛、羊布鲁氏菌病的监测方案,净化布鲁氏菌病.利用琥红平板凝集试验(RBPT)、全乳环状试验(MRT)和试管凝集试验(SAT)对1200份牛血清中376份奶牛血清、677份羊血清,以及376份牛奶进行检测.结果RBPT检测1200份牛血清中9份可疑,3份阳性;376份奶牛血清中3份可疑,1份阳性;其他牛6份可疑,2份阳性;677份羊血清中3份可疑.MRT检测376份奶样中5份可疑,1份阳性.SAT重复检测的20份血清中2份为阳性,RBPT与MRT结果的符合率为100%.结论三种检测方法的联合使用适合大样本的进行布鲁氏菌病的监测,为基层布鲁氏菌病的监测方案的研究提供了理论依据. 相似文献
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本文对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛乳中流产布鲁氏茵抗体一法进行了评价。从血清学阳性或阴性的奶牛采取乳样,测定其吸收值的分布,据此可将牛乳区别为 ELISA 阳性或阴性。在22头乳样和血清样品 ELISA 为阳性的奶牛中,有10头(45%)的乳样分离到流产布鲁氏茵。认为 ELISA 试验是检测牛乳中流产布鲁氏茵抗体的一个较为适用的方法 相似文献
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为检测内蒙古地区某牛场患乳房炎的奶牛乳样中是否存在牛支原体,同时建立直接提取乳样中牛支原体DNA进行PCR检测的方法,本研究无菌采集乳房炎乳样,通过支原体的分离培养、形态学观察和生化试验,初步鉴定分离株为牛支原体,然后提取液体培养基菌体DNA进行牛支原体特异性PCR鉴定,同时,采用Chelex-100法直接提取原乳样中菌体DNA进行PCR鉴定,并测序分析扩增片段序列。液体培养物提取DNA与Chlex-100法直接提取原乳样菌体DNA进行特异性PCR均扩增出目的条带,该片段序列与GenBank中牛支原体oppD/oppF基因的同源性达到99.8%,证实分离株为牛支原体。说明Chlex-100法可直接提取乳样中牛支原体DNA进行快速PCR鉴定。 相似文献
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为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分析。结果显示,以Chelex-100法提取乳样中细菌DNA进行PCR扩增具有较高的敏感性,所检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最小浓度分别为103、102、102 CFU/mL;而使用苯酚—氯仿法提取乳样中各细菌DNA的PCR敏感性均为104 CFU/mL。综上所述,Chelex-100法提取乳样细菌DNA的PCR敏感性可以满足临床检测奶牛乳房炎的需要,显现了简单快速、经济、无污染的优点,为从乳样中直接提取细菌DNA提供了新的思路,对PCR快速检测乳房炎致病菌具有重要意义。 相似文献
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为查明甘肃省永靖县奶牛布鲁氏菌病流行情况、感染菌种和类型,2013—2017年对永靖县8月龄以上奶牛进行了布鲁氏菌病监测,对2016年检出的3份疑似感染布鲁氏菌奶牛的脾脏进行了病原分离与鉴定。结果显示:2013—2014年检测奶牛444头,未检出阳性;2015—2016年检测奶牛706头,检出阳性63头,个体阳性率为8.92%;3份脾脏样本均为布鲁氏菌PCR检测阳性,细菌分离培养15 d,只有1份生长菌落;将分离菌株用AMOS-PCR进行检测,获得流产布鲁氏菌特征的扩增条带,且分离菌株的omp25基因测序结果与流产布鲁氏菌高度吻合。本监测和细菌分离鉴定结果为该地布鲁氏菌病防控提供了技术支撑。 相似文献
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用设计的1对特异性引物对流产布鲁氏菌2型CVCC70502株总DNA进行外膜蛋白基因omp25的PCR扩增，得到了1条完整的基因，大小为642bp；测序分析证明，它与国外报道的流产布鲁氏菌omp25基因的核苷酸序列完全一致。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中，经酶切、PCR扩增和测序分析，表明重组表达载体构建成功。将此重组质粒转化至宿主菌BL21（DE3）中，用IPTG进行诱导。结果证实，该基因可以在大肠杆菌中表达，表达产物为分子质量约50ku的融合蛋白，与理论推测的蛋白分子质量一致；Western—blotting试验证明，表达蛋白OMP25可被流产布鲁氏菌阳性血清所识别。 相似文献
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为建立适合犬布鲁氏菌病临床检测的单重PCR方法,通过对比粗糙型（犬种）与光滑型（羊种、牛种和猪种）布鲁氏菌基因组DNA的序列差异,设计1对引物并优化反应条件,建立了可初步鉴别犬4种布鲁氏菌的PCR方法,然后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对20份犬布鲁氏菌血清学阳性的血液样品进行临床检测。结果显示,利用建立的PCR反应体系对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌均能扩增出717 bp的目的条带,对犬种布鲁氏菌能扩增出366 bp的目的条带;最低可检测到犬种、羊种、猪种和牛种布鲁氏菌基因组DNA浓度分别为5.07×10-2、6.20×10-2、7.80×10-3和5.50×10-2 ng/μL;20份血液样品中共检测到3份犬种布鲁氏菌阳性样品,与使用GB/T 18646—2018引物的PCR检测结果一致。结果表明,本试验建立的单重PCR方法简捷、特异、敏感,适合基层兽医实验室对犬布鲁氏菌病的检测与鉴定。 相似文献
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为建立同时检测布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体的双重PCR方法,本研究据GenBank上已发表的具有属间特异性的布鲁氏菌bp26基因和鹦鹉热衣原体23S rRNA基因,利用 Primer Premier 5.0软件各设计1对特异性引物,扩增的目的片段长度分别为219和356 bp。通过优化反应条件,建立了能同时检测布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体的双重PCR方法。该方法具有较好的特异性和可重复性,对2种基因单重PCR检测敏感性均达到3.1×102拷贝/反应,双重检测的灵敏度为3.1×103拷贝/反应。利用该双重PCR方法对流产牛抗凝全血、血清、流产胎儿及奶液共172份临床疑似布鲁氏菌感染的样品进行检测,检测到布鲁氏菌阳性样品53份,鹦鹉热衣原体阳性样品2份,以上这2种病原的阳性检出率分别为30.8%和1.2%,且检测到2种病原混合感染的阳性样品2份,阳性检出率为1.2%。临床应用结果表明,该方法可用来对布鲁氏菌和鹦鹉热衣原体进行同步、快速、灵敏的检测。 相似文献
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为查明甘肃省永靖县奶牛感染布鲁氏菌病的菌种和类型,为该地区布病科学防控提供技术支撑,2016年9月,对永靖县3份疑似感染布鲁氏菌病奶牛脾脏进行了病原的分离与鉴定。结果表明:PCR从3份样本均检测出布鲁氏菌;细菌分离培养,15 d内,3份样本中只有1份样本生长菌落,其余2份样本培养无细菌菌落出现;分离的1份菌株用AMOS-PCR获得流产布鲁氏菌特征的扩增条带;分离菌株的opm25基因测序结果与流产布鲁氏菌高度吻合。 相似文献
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王永康 《上海畜牧兽医通讯》1982,(3)
从3个大学和8个协作乳牛场的1000多头乳牛采集乳样。在配种后21天和24天采集的乳样应用放射免疫法分析孕酮。按乳中孕酮量的高、中、低而诊断为妊娠、可疑和非妊娠。此外自配种起至再次发情,每周两次从大学的乳牛场乳牛采集乳样或行直肠检查以决定乳中孕酮诊断不准确的原因。配种后21天乳中乳孕酮的乳牛妊娠诊断与再次发情与否或直肠检查诊断的吻 相似文献
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采集疑似布鲁氏菌病感染的牛奶和血清各82份,应用哈萨克斯坦共和国的布鲁氏菌病诊断复合抗原和国产抗原,分别对血清和奶样进行虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)和乳环凝集试验(MRT),用西班牙IELISA奶样检测试剂盒对奶样进行检测,并对所有阳性奶样进行细菌分离与PCR鉴定。结果显示,国产抗原和复合抗原的RBT结果与奶样IELISA总体符合率分别为65.85%和92.68%,SAT结果与奶样IELISA总体符合率分别为79.52%和90.24%,MRT结果与奶样IELISA总体符合率分别为79.27%和80.49%。PCR和AMOS-PCR检测结果显示分离菌株为羊种布鲁氏菌。结果表明,两种MRT抗原在血清和奶样检测中都存在漏检现象;从牛乳中分离到布鲁氏菌羊种3型,说明出现了跨种传播,应引起重视。 相似文献
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从不同地区采集奶样,将OIE诊断试验中用于牛布病诊断的全乳iELISA与国标中的MRT进行比对。在检测的526份样品中,全乳iELISA检出93份阳性,国内MRT抗原检出31份阳性,英国卫桥的MRT抗原检出44份阳性(检测数为264份);对其中一个地区的31份奶品,除了抗体的检测外,同时进行了奶样的细菌分离、奶样提取DNA的检测,全乳iELISA与乳样DNA提取均检出21份阳性,且一一对应,国内MRT抗原只检出10份阳性。结果表明全乳iELISA敏感性好,操作方便快捷,具有血清学检测所不具备的许多突出优点。 相似文献
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牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用 总被引：12，自引：0，他引：12
根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列，设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物，建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段；对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测，结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性，阳性符合率为90％（9／10）；而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性，阴性符合率为100％（10／10）。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 相似文献