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1.
《经济林研究》2014,(2)
为了研究不同提取方法对芒果总DNA提取质量的影响,以‘紫花芒’等11个芒果品种的叶片为材料,采用SDS法、CTAB法、改良CTAB法提取芒果叶片总DNA,并对提取的总DNA浓度、OD260/280、OD260/230、琼脂糖电泳结果、ISSR扩增产物进行了比较分析。结果表明,改良CTAB法能较好地去除芒果叶片中的多酚、多糖、单宁和色素等杂质。提取的总DNA浓度高达387 ng/μL,OD260/280在1.81~1.87之间,OD260/230在2.01~2.09之间。SDS法、CTAB法提取总DNA的ISSR扩增产物条带少,改良CTAB法提取的总DNA的扩增效果图谱清晰,多态性高。3种提取方法的结果比较而言,以改良CTAB法提取总DNA的效果最好,可用于后续实验的研究。 相似文献
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为了探究不同提取方法对菠萝叶片组织总RNA提取质量的影响,以‘台农16号’菠萝品种的叶片为材料,采用改良Tirs-硼酸法、改良SDS法、试剂盒法提取菠萝叶片组织总RNA,并对提取的总RNA浓度、OD260/OD230、OD260/OD280、琼脂糖电泳结果进行了比较分析。结果表明:改良Tris-硼酸法和试剂盒法能较好地去除菠萝叶片组织的多糖、皂苷元、蛋白质以及纤维等次生代谢物质,OD260/OD230大于2.000,OD260/OD280在1.900~2.100之间。改良SDS法提取总RNA产率最高,达到290.9μg/m L。试剂盒法提取总RNA产率为30.1μg/m L,远小于其它2种提取方法所得总RNA产率。改良Tris-硼酸法所得电泳图谱条带完整度最好。比较分析3种提取总RNA方法的结果,以改良Tris-硼酸法提取总RNA的效果较理想,可满足后续研究工作的需要。 相似文献
3.
为获得适用于转录组测序的枣花、结果枝和果实的总RNA提取方法,以中秋酥脆枣为材料,比较分析了Ambiogen和Autolab 2种总RNA提取试剂盒和基于Autolab试剂盒改良的CTAB法的总RNA的提取效果。结果表明:3种方法提取RNA的OD260/OD280差别不大,但用2种试剂盒提取的RNA有降解,其中Ambiogen试剂盒提取的花、结果枝和果实3个器官的RNA质量浓度分别为126、284和222 ng/μL;Autolab试剂盒提取的RNA质量浓度分别为307、402和266 ng/μL;基于Autolab试剂盒改良的CTAB法提取的RNA质量浓度分别为401、417和296 ng/μL。与2种试剂盒相比,基于Autolab试剂盒改良的CTAB法提取出来的RNA完整性好、纯度和浓度高,能够满足转录组测序的要求。 相似文献
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5.
为了筛选最适的菠萝蜜总RNA提取方法,采用Trizol提取法、Tris-硼酸提取法和试剂盒提取法提取菠萝蜜叶片和种子总RNA,通过紫外分光光度计检测、琼脂糖凝胶电泳、RT-PCR检测以及Agilent2100检测,对提取结果进行比较分析。结果表明:采用这3种方法均能从菠萝蜜叶片和种子中提取到总RNA,Tris-硼酸提取法较其他2种方法所提取的总RNA产率高,但杂质较多;采用Tris-硼酸提取法能提取完整性较好的总RNA,28S、18S和5S清晰可见,但提取质量较试剂盒提取法差;试剂盒提取法省时省力,有明显的28S和18S条带,A260/A280分布在1.92~1.98,A260/A230分布在2.04~2.09,叶片总RNA产率42.3ng/μL,种子总RNA产率15.6ng/μL。RT-PCR检测结果表明在约200bp处存在清晰整洁的电泳条带,Agilent2100检测结果显示杂峰极少,28S峰积分面积约是18S峰积分面积的2倍。经综合评定认为,试剂盒提取法是适合菠萝蜜叶片和种子总RNA提取的方法。 相似文献
6.
为了研究不同提取方法对金柑总DNA提取质量的影响,以融安金柑等3个金柑品种的叶片和果实为材料,采用SDS提取法、CTAB提取法、试剂盒法提取金柑总DNA,并对所提取DNA的总浓度、A_(260/280)、A_(260/230)、凝胶电泳结果、SCo T扩增产物进行比较分析。结果表明:CTAB提取法和试剂盒提取法能较好地去除金柑叶片和果实中的蛋白质、RNA、多酚、多糖、单宁、色素等大分子物质以及盐类等小分子杂质。提取的总DNA浓度最高达178 ng/μL,A_(260/280)在1.82~1.94之间,A_(260/230)在1.89~2.04之间。SDS提取法、CTAB提取法和试剂盒提取法所提取的金柑叶片和果实总DNA的扩增效果图谱清晰,多态性高。3种提取方法中,CTAB提取法所提取总DNA浓度较高,纯度最好,可用于后续相关研究。 相似文献
7.
PCR技术广泛用于分子标记、基因工程等领域,是植物系统发育及种群遗传结构等研究的基础。通过对影响PCR体系扩增的主要因子进行单因素试验,得出南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)叶绿体DNA(cpDNA)最优体系(30μL)为3μL 10×PCR buffer,1μLDNA模板(60 ng),4.2μL MgCl_2(3.5 m M),8.4μLdNTPs(0.7 m M),0.9μL引物(0.3μM),0.8μL Taq DNA聚合酶(2 U),10.8μL去离子水。利用该体系筛选出叶绿体DNA非编码区通用引物4对,分别为atp I-atp H、psb J-pet A、trn H-psb A和trn L-trn F。 相似文献
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高质量丝栗栲基因组DNA的提取方法 总被引：1，自引：0，他引：1
为了促进丝栗栲分子生物学的研究,采用尿素法、柠檬酸钠法、改良CTAB法和SDS法4种方法提取丝栗栲叶片基因组DNA,并对提取效果进行了比较和分析。结果表明,改良CTAB法较适合丝栗栲基因组DNA提取,其提取的DNA产率高,凝胶检测条带整齐清晰,杂质少、无明显降解,OD260/OD280比值在1.8左右;而尿素法难以提取基因组DNA,SDS法提取的DNA得率较低,柠檬酸钠法有蛋白质、多糖等杂质污染均不太适用丝栗栲基因组DNA提取。采用改良CTAB法提取得到丝栗栲幼叶、老叶、嫩芽和幼茎基因组DNA,产率分别为177.3、167.1、242.0和156.7μg/g。酶切分析也证明,改良CTAB法提取的不同组织DNA适用于进行后续分子生物学研究。 相似文献
9.
《中南林业科技大学学报(自然科学版)》2019,(8)
以云南金花茶为试验材料,利用试剂盒法、SDS法及CTAB法3种方法提取其DNA,并对3种方法的提取结果进行比较;经初筛合成云南金花茶EST-SSR引物,并对影响SSR-PCR体系的Mg~(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物及模板DNA这5个因素进行L_(16)(45~)正交实验,以期建立较为稳定的云南金花茶SSR-PCR体系。试验结果表明:试剂盒法提取得到的云南金花茶DNA质量最好且符合SSR分子标记试验。各因素对PCR扩增效果的影响程度为:Mg2+引物 Taq DNA聚合酶 dNTP模板DNA。试验最终确定的金花茶SSR-PCR最佳反应体系(20μL)为:2.0μL Taq Buffer、1.5μL Mg2+(25 mmol/L)、0.3μL dNTP(10 mmol/L)、0.2μL Taq DNA聚合酶(5 U/μL)、前后引物各0.4μL(10μmol/L)、0.5μL模板DNA(50 ng/μL)、14.7μL ddH_2O。建立和优化云南金花茶SSR反应体系,可为云南金花茶不同种群的遗传变异研究提供基础。 相似文献
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《河北林果研究》2015,(4)
为探明榆属植物基因组DNA的有效提取方法,以春榆无性系、白榆无性系、金叶榆无性系1号和2号的不同成熟度叶片为材料,并对其做不同预处理,然后采用CTAB法提取榆树基因组DNA,结果表明:嫩叶提取的DNA得率是老叶的1.4~3.0倍,嫩叶的A260/A280值在1.82~1.87之间,老叶的A260/A280值大于1.90;鲜叶片提取的DNA得率是干叶片的1.0~2.0倍,鲜叶片的A260/A280值在1.86~1.94之间,干叶片的A260/A280值在1.90~1.98之间;用低浓度的乙醇(50%~75%)浸泡新鲜嫩叶12~24h可以有效减少DNA的降解,得率在498.62~1 295.97ng/μL,A260/A280值在1.84~1.94之间;预处理液中加入3g的PVP具有较好除酚去多糖的效果,所提取的DNA得率在862.51~1 791.44ng/μL,A260/A280值在1.92~1.98之间。 相似文献
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以华山松（Pinus armandi）种子胚乳为实验材料,分别采取经典CTAB法、简易CTAB法和SDS法微量法提取华山松基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计分析、标准差和标准误、卡方检验和SPSS软件显著性分析,将它们在DNA产量、质量和方法稳定性等方面的优缺点进行总结。得出结论：通过对数据进行卡方检验,所有数据都是差异是由方法所引起的,不是偶然误差所引起的;相比于经典CTAB法,SDS微量法和简易CTAB法的（OD260-OD320）/（OD280-OD320）标准差和标准误相差不大,数据相对精确,结果相对精确;通过SPSS软件分析分析,简易CTAB法和其他2种方法相比存在显著差异性,SDS微量法与经典CTAB法的P〉0.05,差异不显著,提取效果相差不大。综上所述：相比于简易CTAB法,SDS微量法与经典CTAB法的（OD260-OD320）/（OD280-OD320）都接近2.0,可能存在RNA污染污染,DNA的浓度也相对较低,SDS微量法与经典CTAB法不适合华山松胚乳DNA提取。简易CTAB法的（OD260-OD320）/（OD280-OD320）比率很接近1.80,不存在蛋白质和RNA污染,DNA纯度也最好,DNA浓度最高,比较适合华山松胚乳DNA提取。 相似文献
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几种提取杜仲RNA方法的比较 总被引：3，自引：0，他引：3
杜仲富含酚类、多糖、蛋白、杜仲胶等代谢物质,用普通方法提取杜仲RNA时很难将其去除,比较研究了Trizol、CTAB和热硼酸盐3种方法,发现改进的CTAB法和热硼酸盐法均能从杜仲中提取纯度较高的RNA,热硼盐法分离效果最好,凝胶电泳显示条带清晰完整,分光光度计检测OD260/OD280=1.92.用该方法提取的杜仲RNA可以进行RT-PCR、Northern-blot、RACE等分子生物研究. 相似文献
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大叶栎总DNA两种提取方法的比较 总被引：2，自引：0，他引：2
对大叶栎的总DNA两种提取方法进行对比试验,从外观、浓度、A260/A280、A260/A230、电泳检查和ISSR扩增对所提取到的DNA进行对比,结果显示用改良CTAB法提取的DNA在各方面都达到ISSR扩增的要求,是大叶栎总DNA提取的较好方法。 相似文献
16.
山茱萸叶片DNA提取方法及ISSR反应体系构建 总被引：1，自引：0，他引：1
山茱萸成熟叶片中多糖及多酚类物质含量较高,传统CTAB法提取其叶片DNA效果较差,该研究在传统的CTAB提取法的基础上进行了改良,经DNA原液电泳检测及PCR产物的电泳检测表明,该法适用于提取硅胶快速干燥保存的山茱萸叶片的DNA。在此基础上,对山茱萸ISSR反应体系中的退火温度、引物浓度及模板用量进行了筛选,结果表明,在25μL的反应体系中,引物UBC847的最佳退火温度为55.2℃,引物最佳浓度为0.8μmol/L,模板最佳用量为70 ng,初步构建了山茱萸ISSR反应体系。 相似文献
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叶绿体超微结构是叶绿体形态和功能的重要内容之一。叶绿体除在光合作用中具有重要的功能外,在高等植物细胞质遗传中,作为细胞器也具有重要的作用。据估计,叶绿体DNA的信息量足以编码分子量为40000道尔顿的多肽约150—300个。不同种的叶绿体蛋白质存在差异。不同品种的叶绿体显微结构也存在明显差异。前文已发现油桐属和石栗属在叶片的核酸、蛋白质以及叶绿素含量上存在明显差异。本文试图对该两属的叶绿体超微结构及核酸和蛋白质含量进行比较研究,以提供进一步依据。 相似文献