枯草芽孢杆菌JNB001蛋白酶特性的研究     

余全法  吴劲松  竺礼斌  王海霞  曲道峰  韩剑众 《中国畜牧兽医》2015,42(12):3261-3267

为了解枯草芽孢杆菌JNB001发酵所产蛋白酶的特性,试验以蛋白酶活力为指标,研究了pH、温度等因素对酶促反应的影响,并通过水解度考察了粗酶液对各种动物蛋白的酶解效果。结果表明,酶反应最适pH为8.0,温度为45 ℃;粗酶液在pH 5.5~9.0的范围内较稳定,过碱则不利于酶液的保存。在45 ℃下热稳定性良好,超过50 ℃保温10 min后残余酶活已不足60%;金属离子Ca²⁺和Mg²⁺、还原剂DTT、表面活性剂Tween-80等能大幅度提高酶活力。而Fe²⁺、Cu²⁺、金属螯合剂EDTA、变性剂SDS等物质则会抑制蛋白酶活性;酶促反应的K_m为6.43 mg/mL,V_max为47.39 μg/min;针对不同蛋白底物,酶促反应较适pH为 7.0~9.0,温度为40~50 ℃。该粗酶液具有水解猪毛、猪蹄甲、脱毛牛皮、明胶等硬蛋白类物质的能力。上述试验结果可为枯草芽孢杆菌JNB001在病死畜禽无害化生物处理体系等方面的工业应用提供参考。  相似文献   

高产中性蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学性质研究     

贾仲昕  赵佳男  季芳  王雪  李刚  王承民  秦建华 《黑龙江畜牧兽医》2023,(1):106-112+132

为了获得高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株，试验从不同环境样本中分离细菌并进行16S rDNA序列鉴定，利用酪蛋白琼脂培养基对产蛋白酶菌株进行初筛、福林酚法检测中性蛋白酶活性，结合形态学和分子生物学鉴定对高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株进行分类鉴定，通过对培养时间、温度和pH值的调节，研究该菌株的酶学性质。结果表明：成功筛选出1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)A1,该菌株具有较强产中性蛋白酶能力，中性蛋白酶活性为31.40 U/mL,所产中性蛋白酶的最适反应温度为50℃、最适pH值为7,在pH值=6～8时稳定性较好，对碱性环境有一定的耐受性，5.0 mmol/L的Ca²⁺和Mn²⁺对中性蛋白酶活性有显著促进作用(P<0.05),Zn²⁺和Fe²⁺对中性蛋白酶活性有抑制作用(P<0.05),Mg²⁺无明显作用。说明贝莱斯芽孢杆菌A1可以作为生产中性蛋白酶的备选菌株。  相似文献   

米曲霉ZW-06中性蛋白酶的粗分离及酶学性质研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

李艳丽  许少春  许尧兴  李孝辉 《中国饲料》2007,(7)

从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZW-06发酵干曲中对中性蛋白酶进行粗分离,并对其酶学性质进行研究。结果表明:用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达264443U/g;该酶的最适反应温度为45℃,最适作用pH为6.5和9.0;该酶在常温及pH6～10的环境下比较稳定;Mg2+、Mn2+和Ca2+对蛋白酶有强烈的激活作用,Fe2+和Cu2+则对其表现出强烈的抑制作用。动力学研究表明,该中性蛋白酶在pH 6.5和45℃条件下,Km为3.82mg/mL,Vmax为541U/mg·min。  相似文献   

米曲霉ZW-06中性蛋白酶白粗分离及酶学性质研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

李艳丽  许少春  许尧兴  李孝辉 《中国饲料》2007,(7):17-20

从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZW-06发酵干曲中对中性蛋白酶进行粗分离,并对其酶学性质进行研究.结果表明用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达264443 U/g;该酶的最适反应温度为45℃,最适作用pH为6.5和9.0;该酶在常温及pH 6～10的环境下比较稳定;Mg2+、Mn2+和Ca2+对蛋白酶有强烈的激活作用,Fe2+和Cu2+则对其表现出强烈的抑制作用.动力学研究表明,该中性蛋白酶在pH 6.5和45℃条件下,Km为3.82 mg/mL,Vmax为541 U/mg·min.  相似文献   

产植酸酶菌株的筛选及酶学性质的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

张卫兵  甘伯中  李帆  郭爱莲 《中国饲料》2009,(9)

从100多个自然样品中,分离、筛选出一株高产植酸酶的曲霉(Aspergillus sp.)茵株.在30℃摇瓶发酵4 d时酶活达到6105.5 IU/mL,并对其粗酶液的性质作了研究:该酶作用的最适温度为45 ℃;最适pH为5;该酶在55℃、pH为3～7时,相对酶活大于80%;金属离子Zn2+"、Al3+、Mn2+,Cu2+等对该酶有较强的抑制作用,而Mg2+等则有一定的激活作用.  相似文献   

产蛋白酶菌株的筛选及酶学特性的研究     

张兰  廖波  秦亚宁  张腾月  王梦瑶  程鹏  曹慧  赵龙妹 《黑龙江畜牧兽医》2018,(21)

为了从自然界和动物消化道内筛选能产高效蛋白酶的有益菌株,试验采用酪蛋白平板法从鸡粪中筛选出一株产蛋白酶的菌株JF,根据形态学鉴定、16S r DNA核酸序列分析,并对该菌所产蛋白酶粗酶液的酶学特性进行分析。结果表明:筛选出的菌株属于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);该菌株的酶学特性,最适反应温度为60℃,最适pH值为9. 0,属于中温弱碱性蛋白酶; 30℃时仍能保持73. 0%的相对酶活性,具有一定低温酶的特性; Mn2+对此酶具有极显著促进作用(P0. 01),而Zn2+、乙二胺四乙酸(EDTA)对此酶具有极显著抑制作用(P0. 01)。  相似文献   

黑曲霉AS6034酸性β-甘露聚糖酶的性质研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

皮雄娥  费笛波  王龙英  冯观泉  袁超 《饲料研究》2006,(2):50-52

对黑曲霉AS6034菌株所产酸性β-甘露聚糖酶的重要酶学性质进行了研究,该酶最适pH为3.2、在pH3.8左右保存2h稳定性较好,最适温度为45℃,在50℃和60℃恒温水浴中存放160min后,酶活力无明显变化,最适底物浓度为1.0%,并对该粗酶液反应动力学进行了研究,得到了以角豆胶为底物的动力学参数V_m为2.85μmol/(g·min)、Km为2.21mg/mL。  相似文献   

黑曲霉FnD5-2产木聚糖酶液体发酵及酶学特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

王刚  郭明珠  韩冰莹  陈光 《中国畜牧杂志》2012,48(23):71-75

试验旨在研究黑曲霉FnD5-2产木聚糖酶液体发酵及酶学特性。选用黑曲霉FnD5-2为出发菌株,采用单因素、正交试验设计、盐析等试验方法,开展木聚糖酶发酵条件优化及酶学性质研究工作。结果表明:最适发酵条件为28℃、pH5.0、Tween80添加量1.5 mL、脱脂豆粉添加量4 g/100mL、培养基装液量50 mL。黑曲霉木聚糖酶最适温度为50℃;最适pH为5.0;在4～50℃及pH 4～6的条件下稳定性较好;Mg2+、Fe2+、K+、Ca2+对该酶有激活作用,Co2+、Cu2+、Na+、Mn2+对该酶有抑制作用,Mn2+的抑制作用最强,蔗糖对酶液的保护效果比较好。  相似文献   

黄色瘤胃球菌木聚糖酶基因xynB的异源表达与酶学性质研究     

毕海红  胡馨元  王玉洁  翟圣君  张竞月  孙丽萍  王琴  夏呈强 《现代畜牧科技》2024,(2):1-5

该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明,XynB理论大小为47 kDa,预测等电点为4.49,不含信号肽,含有1个糖苷水解酶11家族结构域和1个碳水化合物结合结构域。酶学性质研究结果表明,该酶的最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,金属离子Mg²⁺、Na⁺、K⁺和Ba²⁺对木聚糖酶XynB有较好的激活效果。综上可知,黄色瘤胃球菌木聚糖酶XynB属于GH11家族,最适pH值为5.0,最适温度为40℃,酶比活力为62.94 U/mg。  相似文献   

多种碱性蛋白酶酶学性质的比较研究     

《现代畜牧兽医》2021,(9)

试验旨在探究不同碱性蛋白酶的酶学性质差异,评估多种碱性蛋白酶在不同条件下的酶活性。结果表明,酶D的最适反应温度为50℃,其余为60℃;酶D的耐热性最好;所有酶最适反应pH值均为10.5;酶活性均受到Cu2+的显著抑制,相对酶活低于30%;酶活受化学试剂影响较小;均对胰-胃蛋白酶耐受性较差,相对酶活低于14%;Km值在3.45～33.33之间,νmax值在0.05～1.75 g/min之间。研究表明,不同来源的碱性蛋白酶有不同的酶特性。  相似文献   

鸭疫里氏杆菌液体发酵培养工艺研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

杨灵芝  李本科  马景霞  李香云 《中国畜牧兽医》2011,38(12):232-234

本试验旨在利用液体发酵装置对鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)GN52株在改良酵母肉汤中的发酵培养情况进行研究。通过染色镜检、活菌计数、D_{450 nm}值测定、pH测定等方法对RA的生长规律进行摸索,确定培养方法、最佳收菌时间及最佳灭活条件。结果表明,RA在培养过程中,菌液pH基本不变;37 ℃液体发酵培养20 h活菌含量最高,可达320亿~350亿CFU/mL;0.3%甲醛37 ℃灭活18 h为最佳;D_{450 nm}值与活菌数之间存在一定的函数关系,可通过测定RA菌液的D_{450 nm}值推算其活菌数。  相似文献   

大麦芽阿魏酸酯酶的分离纯化及其部分酶学性质的测定   总被引：3，自引：1，他引：2  

刘莎莎  李华  石庆华  王希东  程发祥 《中国畜牧兽医》2010,37(1):28-31

本试验采用硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析对大麦芽中的阿魏酸酯酶(FAE)进行了分离纯化,并测定了其部分酶学性质。结果显示,分离纯化后获得了阿魏酸酯酶纯品,纯化倍数达34倍;经SDS-PAGE电泳显示为单一条带,并测定其相对分子质量约为29.3 ku;最适反应温度为50℃;最适pH为5.5,但阿魏酸酯酶在60℃以下,pH 4.5~7.5之间有较好的稳定性;Zn2+、Cu2+、Fe3+对酶活有很强的抑制作用,Na+和EDTA对酶有一定的激活作用。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒GD-ZQ变异株的分离及遗传变异分析   总被引：2，自引：2，他引：0  

高诗敏  王敏功  邓瑞林  姚晓辉  王林川 《中国畜牧兽医》2011,38(5):121-125

用RT-PCR方法从某猪场病猪体内分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),命名为PRRSV GD-ZQ株,可致Marc-145细胞病变。细胞分离培育病毒至增殖性能稳定后,分别扩增分离病毒的Nsp2、ORF3、ORF5基因并测序,绘制进化树比较分析遗传进化。结果显示分离毒株的Nsp2、ORF3、ORF5基因序列与美洲型VR-2332、CH-1a等毒株核苷酸序列相似性在89.0%~95.8%之间,与欧洲毒株LV的相似性在48.2%~49.3%之间,遗传进化分析显示该毒株与CH-1a株处于同一分支,分离毒株的Nsp2序列与以HEB1为代表的PRRSV变异株相似性在98.3%~99.4%之间。该病毒在细胞盲传5代能产生稳定规律细胞病变(CPE),且第5代病毒TCID₅₀达10^-5.6／0.1 mL。进化分析结果显示GD-ZQ分离株是PRRSV变异株,具有"高热病"PRRSV毒株的变异特点,为了解PRRSV在时间上和分子水平上的遗传变异规律、变异幅度和变异范围奠定基础。  相似文献   

Screening and Identification of Protease-producing Bacillus amyloliquefaciens from Pig's Intestines and the Preliminary Study of Its Enzymatic Properties     

NING Yu-chang  ZHANG Xiao-jing  QIAO Hong-xing 《中国畜牧兽医》2017,44(8):2398-2407

A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca²⁺ and Mn²⁺ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.  相似文献   

猪肠道中产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究     

宁豫昌  张晓静  乔宏兴 《中国畜牧兽医》2017,44(8):2398-2407

试验从健康猪肠道中筛选得到一株高产蛋白酶的芽孢杆菌MY-6菌株,通过形态学观察、生理生化试验和糖醇发酵试验、16S rDNA序列扩增与比对、Biolog鉴定等方法鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。并研究了蛋白酶活力与细菌生活周期的动态关系,pH、温度、金属离子和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响及蛋白酶对不同底物的水解性能。结果显示,MY-6菌株蛋白酶的合成与其芽孢形成同步,均开始于对数生长期的前期,该菌株所产蛋白酶的最适作用条件为：40℃、pH 7.0,Ca²⁺和Mn²⁺对蛋白酶活力有明显的促进作用,PMSF能够完全抑制该蛋白酶的活力,说明该蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,蛋白酶对鱼粉蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、酪蛋白的酶解物TCA可溶性肽含量分别为0.83、0.67、0.58和0.38 μmol/g。结果提示,解淀粉芽孢杆菌MY-6菌株可作为改善蛋白质消化的益生性芽孢杆菌的初步选择。  相似文献   

Study on Protease Properties of Bacillus subtilis JNB001     

YU Quan-fa  WU Jin-song  ZHU Li-bin  WANG Hai-xia  QU Dao-feng  HAN Jian-zhong 《中国畜牧兽医》2015,42(12):3261-3267

This experiment was aimed to study the protease properties produced by Bacillus subtilis JNB001 via the index of protease activity to investigate the effects of pH,temperature and other factors on the enzymatic reaction,and the ability of the crude enzyme solution to hydrolyze various animal protein was measured by the degree of hydrolysis.The results showed that the most suitable pH of reaction was 8.0 and the temperature was 45 ℃.The crude enzyme solution in the range of pH 5.5 to 9.0 was relatively stable,while it was not suitable for the preservation of the enzyme solution when pH was over 9.0.At 45 ℃ it had good thermal stability when exceed 50 ℃ for 10 min, the residual activity had been less than 60%.Metal ions such as Ca²⁺ and Mg²⁺,reducing agent like DTT,surfactant as Tween-80,etc.could greatly improve the enzyme activity.On the opposite,Fe²⁺ and Cu²⁺ as well as other ions,metal chelator EDTA,denaturant SDS and other materials could inhibit the protease activity.The K_m was 6.43 mg/mL,and V_max was 47.39 μg/min.It had a range of reaction pH from 7.0 to 9.0 and temperature from 40 to 50 ℃ in the situation for different protein substrates.The crude enzyme solution could hydrolyze pig hair,pig nail,hair removal of cowhide,gelatin and other hard protein substances.The results provided the strong date support for the Bacillus subtilis JNB001 which could be used in dead livestock harmless biological treatment system and other aspects of industrial applications.  相似文献   

大理弥渡热泉耐热脂肪酶产生菌的筛选及其酶活性研究     

桑鹏  刘林波  陈贵元  杨力权 《中国饲料》2020,(3):27-31

从云南大理市弥渡县石夹泉热泉的43℃底泥中筛选到1株高温脂肪酶的高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为不动杆菌属(Acinetobacter sp.)的一株菌,命名为Acinetobacter sp.Lip-43。对其生长条件及酶学性质进行了研究,结果表明:该菌株耐高温性较好,菌株在55℃仍能生长,菌株最适生长温度为37℃。所产脂肪酶最适酶活温度为45℃,最适反应pH为5.0。在37℃以下,能保持良好的稳定性,Zn^2+和Ca^2+对该酶有一定的抑制作用,Mn^2+、K^+、Mg^2+、Fe^2+、Cu^2+均对该酶活力起到促进作用,其中Mn2+的促进效果最为明显。  相似文献   

高产蛋白酶枯草芽孢杆菌JNB001产酶条件的优化     

竺礼斌  曲道峰  施春伟  韩剑众  余全法  吴劲松 《中国畜牧兽医》2015,42(2):414-419

为了进一步提高枯草芽孢杆菌JNB001产蛋白酶的能力,试验利用单因素及正交试验从起始pH、发酵温度、接种量、装液量、菌龄等方面对产酶条件进行优化。结果表明,最佳培养条件为:起始pH 7.0;发酵温度35℃;接种量7%;装液量35mL/250mL;菌龄18h;发酵时间36h。菌株JNB001经优化发酵条件后,测定其蛋白酶活力可高达371.66U/mL。该试验结果为无害化生物处理罐的优化设计等后续应用研究奠定了基础。  相似文献   

糖萜素对固始鸡免疫器官发育及T淋巴细胞亚群的影响     

黄鹏  赵珊珊  张学武  张婷婷  肖传斌 《中国畜牧兽医》2011,38(12):64-66

应用流式细胞仪技术检测固始鸡CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞含量来研究添加不同剂量的糖萜素对固始鸡免疫器官及T淋巴细胞亚群的影响。结果表明,500、700 mg/kg糖萜素组的免疫器官指数及CD4⁺／CD8⁺比值显著(P<0.05)高于其余各组。因此,一定剂量的糖萜素可以促进固始鸡免疫器官发育,提高T淋巴细胞亚群的水平。  相似文献