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1.
《家畜生态学报》2021,42(7)
为了解撒坝猪源大肠杆菌噬菌体分离株的生物学特性。自撒坝猪源大肠杆菌中分离到一株裂解性噬菌体,利用PCR扩增噬菌体衣壳蛋白gp23基因,并通过同源性比对及遗传进化分析来鉴定噬菌体。经增殖纯化培养后测定噬菌体的效价和对菌株的裂解效应,而后测定其最佳感染复数、热稳定性、pH稳定性及绘制生长曲线以探究该噬菌体的生物学特性。结果表明,分离株衣壳蛋白gp23基因与噬菌体slur14亲缘关系最近,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科T4-like噬菌体;分离株具有较高的效价,达8.67×10~9 pfu/m;针对实验室保存的92株已确定血清型的大肠杆菌裂解率为61.95%,完全裂解率为27.17%;在60℃条件下作用30 min,或在pH5和pH9时,噬菌体的效价表现明显下降;生长曲线绘制后可知该噬菌体感染宿主菌的潜伏时间约为30 min,爆发时间约为120 min,裂解量为41 pfu/cell。该试验成功分离得到裂解能力较强、裂解谱较广且对理化因素耐受力较强的T4-like噬菌体。 相似文献
2.
为探究大肠杆菌噬菌体的生物学特性及其治疗效果,本研究采用双层平板法分离纯化大肠杆菌噬菌体,并测定噬菌体的效价、温度稳定性、p H稳定性、感染复数(MOI)、一步生长曲线等生物学特性,以及噬菌体治疗大肠杆菌病的效果。结果显示分离的噬菌体Bp1805最佳MOI为1时,其效价可达2.4×10^10 pfu/m L;噬菌体Bp1805对温度的耐受范围较广,在p H5~p H10范围内非常稳定,该噬菌体潜伏期为20 min,裂解期为50 min。大肠杆菌病治疗试验结果显示,注射噬菌体比口服噬菌体治疗效果好,大肠杆菌病的防治效果与噬菌体治疗方式和治疗时间有关;噬菌体治疗大肠杆菌病效果优于恩诺沙星和硫酸庆大霉素。噬菌体Bp1805能够裂解致病性大肠杆菌,为临床大肠杆菌病的噬菌体防治提供参考依据。 相似文献
3.
驴源大肠杆菌噬菌体的分离鉴定与生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
《黑龙江畜牧兽医》2020,(17)
为了研究驴源大肠杆菌性腹泻的治疗方法,试验采用双层平板法从驴粪便中分离并纯化出1株大肠杆菌噬菌体(DE5),对分离到的噬菌体进行效价、裂解谱、最佳感染复数的测定以及形态观察,绘制噬菌体的一步生长曲线,并进行宿主菌的体外裂解试验,此外还研究了噬菌体对温度、pH值、紫外线和氯仿的耐受性。结果表明:噬菌体DE5为短尾噬菌体,形成均匀透亮的蚀斑,效价能达2.4×10~9 pfu/mL,对驴源大肠杆菌的裂解率达32.6%;最佳感染复数为0.000 01;噬菌体潜伏期为15 min,爆发期为20 min,爆发量约为100 pfu/个;噬菌体对温度的耐受性良好,耐强碱但不耐酸;在短时间内对紫外线具有耐受性,对氯仿不敏感。 相似文献
4.
为了探究大肠杆菌噬菌体的形态特征和生物学特性,本研究以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为宿主菌,通过双层琼脂平板法从某鸡场污水和淤泥中分离纯化得到1株宽裂解谱的大肠杆菌噬菌体,命名为Bp16,用2%磷钨酸负染后于透射电镜观察其形态结构,采用双层琼脂平板法测定其温度和pH稳定性、最佳感染复数（MOI）及一步生长曲线等生物学特性。透射电镜观察结果显示,分离得到的宽裂解谱噬菌体Bp16的头部为正二十面体结构,有尾且有尾丝,体长约为220 nm,根据《病毒分类——国际病毒分类委员会第9次报告》的分类特征,该噬菌体为有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科的成员;以实验室保存的55株禽致病性大肠杆菌为指示菌,其裂解效率仅为12.73%;温度稳定性结果显示,在37~60 ℃作用30 min或1 h噬菌体效价基本保持不变,且在80 ℃作用1 h后效价仍能达到1×104 PFU/mL以上,说明该噬菌体对温度的变化不敏感,具有耐热的特性;pH稳定性结果显示,在pH 5.0~10.0之间效价基本保持不变,对酸碱较耐受;最佳感染复数为1;根据最佳感染复数来绘制一步生长曲线,测得其潜伏期为20 min,暴发期为50 min,裂解量为73 PFU/cell。综上所述,噬菌体Bp16具有热稳定性、酸碱稳定性及裂解能力强等优点,为后续试验研制大肠杆菌噬菌体制剂奠定了基础。 相似文献
5.
为探索控制沙门氏菌感染的新途径,本试验进行了高效价宽裂解谱噬菌体的分离。首先利用点斑试验和成斑率（EOP）测定法对环境样品进行了沙门氏菌噬菌体的分离纯化及裂解效价和裂解谱的测定,然后对其中1株效价较高、裂解谱较广的噬菌体进行了电镜形态特征观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线测定及温度、pH和紫外线敏感性的测定。结果显示,该株噬菌体对不同沙门氏菌的裂解率不同,裂解效价在109~1012 PFU/mL;对检测的32株沙门氏菌菌株的裂解率为59.4%;透射电镜下观察到该噬菌体为头部直径约70 nm、尾部长约140 nm的长尾噬菌体;以鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028为宿主菌测得最佳感染复数为0.01;在宿主菌鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028中的一步生长曲线显示,潜伏期为20 min,暴发期为100 min,暴发量为113 PFU/cell;在40~60 ℃效价稳定在1010 PFU/mL,pH 5.0~13.0效价在106 PFU/mL以上,紫外线照射50 min效价仍有106 PFU/mL。综上可知,该株噬菌体分离株具有效价高、裂解谱宽且对温度、pH、紫外线稳定性良好等特性,符合噬菌体制剂的相关特征,具备作为噬菌体制剂后备菌株开发的潜力。 相似文献
6.
为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体，对抗多重耐药细菌，试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体，采用双层琼脂平板法纯化、增殖，超速离心法浓缩，利用透射电镜观察噬菌体形态，通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型，同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明：从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体，命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科；核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌，还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌；最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6～11时相对稳定，70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体，宿主谱相对较宽，具有潜在的应用价值。 相似文献
7.
《中国兽医杂志》2019,(4)
从水貂粪便中分离并纯化1株绿脓杆菌噬菌体,为测定其各项生物学特性。从水貂场采集粪便,利用双层平板法分离噬菌体,对分离到的噬菌体进行电镜形态观察、裂解谱、效价、最佳感染复数、温度和pH值敏感性以及一步生长曲线的测定。结果显示,从水貂样品中分离纯化得到一株绿脓杆菌噬菌体,命名为phage30。电镜形态特征表明,该噬菌体头部为二十面体的立体对称结构,直径约为60 nm,尾部长180 nm,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科;噬菌体裂解率为29.63%(8/27);在宿主菌中增殖的效价为4.3×10~(10 ) PFU/mL。生物学特性测定结果表明,噬菌体在pH值5～11、温度40℃以下裂解活性基本保持不变,最佳感染复数为0.01;一步生长曲线测定结果显示,噬菌体潜伏期约为60 min,暴发期约120 min,裂解量约为156。表明从水貂粪便分离到这1株绿脓杆菌噬菌体,属长尾噬菌体科,具有宿主谱宽、裂解性能高、pH值和热稳定性好的特征,具有潜在的开发价值。 相似文献
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9.
为分离到能有效裂解黑山羊源大肠杆菌的烈性噬菌体,本课题采集不同来源的新鲜粪便样品并经目的菌富集后,结合双层琼脂平板法进行噬菌体分离纯化,随后制作透射电镜样品进行其外形特征观察;对获得的噬菌体进行裂解谱、最佳感染复数和生长曲线分析;该噬菌体对温度、pH和紫外线的敏感性测定;该噬菌体全基因组测定与分析。结果表明,从黑山羊粪便中分离出的一株烈性噬菌体PLYYY01,在大肠杆菌菌苔形成1~2 mm的透亮噬菌斑;通过透射电镜观察,该噬菌体头部直径在60nm左右,尾部长度为100nm左右;该噬菌体有较宽的裂解谱(37.5%,6/16),可裂解多种血清型大肠杆菌;最佳感染复数是0.1;具有较强的繁殖活性,潜伏期约为30 min,爆发量约为95PFU/cell;在40℃~50℃、pH 5~10之间噬菌体的效价较为稳定,对紫外线不耐受;基因组测序组装结果显示:PLYYY01基因组长度为57025 bp,(G+C)mol%含量为44.74%,共编码71个蛋白,未发现抗生素耐药基因及毒力因子基因。 相似文献
10.
试验从鸡场周围环境中采集土样,在伊红美蓝培养基平板上分离纯化大肠杆菌,然后以其为宿主,分离相应的噬菌体,并研究其生物学特性。结果表明,共分离到大肠杆菌4株,经16S rDNA鉴定为埃希氏大肠杆菌。其中,以大肠杆菌LY4为宿主分离纯化到1株烈性噬菌体,负染经电镜观察该噬菌体由多面体头部及尾部组成,噬菌斑直径为2.5～3.8 mm,效价2.0×1010 PFU/mL,最佳感染复数为0.0001;在温度－20～37 ℃、pH 5.0～10.0范围内该噬菌体表现出良好的稳定性,但在人工胃液（pH 1.2）条件下,即可导致死亡;测定其一步生长曲线,该噬菌体潜伏期为20 min,裂解能力强,以上特性表明该噬菌体在鸡舍环境治理中具有潜在的应用价值。 相似文献
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噬菌体降低铜绿假单胞菌所致腐蛋的效果 总被引：1，自引：1，他引：0
铜绿假单胞菌是孵化过程中造成腐蛋的主要病原菌,拟尝试用裂解性噬菌体防治。选用腐蛋中筛选的铜绿假单胞菌PA-MH12,以此为宿主从河水中筛选到1株裂解性噬菌体MH12-Q,对其进行了生物学特性研究,体外进行了对铜绿假单胞菌所致腐蛋的防控效果试验。结果显示：噬菌体MH12-Q属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,效价可达到1013pfu·mL-1,完全裂解效价（CLC）为1010pfu·mL-1,最适生长温度为37℃,pH稳定性好,最适pH为6~8,且其在pH4~10的效价都能维持在较高的水平。最佳感染复数（OMOI）为0.001,感染宿主的潜伏期为30 min,爆发期为70 min。噬菌体MH12-Q可使高浓度铜绿假单胞菌的感染率从70%降低到40%。铜绿假单胞菌噬菌体MH12-Q的生物学性质适合生产应用,对孵化场腐蛋具有较好的防控作用,能够提高感染铜绿假单胞菌的鸡胚成活率。 相似文献
12.
本研究以K1荚膜大肠杆菌DE058（avian pathogenic Escherichia coli）为宿主菌,从鸡粪中分离烈性噬菌体PNJ1809-36并对其进行生物学特性的研究和基因组测序及分析。将噬菌体PNJ1809-36进行分离纯化,通过形态学观察、最佳MOI测定、一步生长曲线测定、温度和酸碱耐受性测定、体外裂解能力测定以及全基因组测序及分析来研究该噬菌体的生物学特性和基因组特征。结果显示：噬菌体PNJ1809-36能够形成清晰透明的噬菌斑,其电镜照片显示为具有收缩尾部的肌尾科噬菌体;宿主谱分析结果显示,该噬菌体能够特异性裂解具有K1荚膜的大肠杆菌;最佳MOI为0.01;一步生长曲线结果显示,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min;噬菌体PNJ1809-36在40和50℃下存活良好,60℃ 30 min可使噬菌体完全失活;噬菌体在pH3~11之间均可存活,最适pH为6;体外裂解试验表明,该噬菌体可在6 h内完全抑制宿主菌的生长。经基因组测序与分析,噬菌体PNJ1809-36基因组全长为152 343 bp,GC含量为39.11%,含有277个开放阅读框（ORF）,11个tRNA基因。同源性分析显示其与早期发现的K1特异性的短尾噬菌体（如K1F、K1E）的同源性较低,而与噬菌体nepoznato、PVP-SE 1和phAPEC8等K1特异性噬菌体同源性较高,基因序列相似性达90%。噬菌体PNJ1809-36是一株特异性识别K1荚膜大肠杆菌的烈性噬菌体,属于肌尾科噬菌体新的系统发育分支。其针对K1荚膜的特性,提示该噬菌体在鉴定K1型大肠杆菌和治疗K1型大肠杆菌引起的疾病方面存在潜力。 相似文献
13.
《中国兽医杂志》2019,(12)
为了分离副溶血弧菌及其噬菌体,并对分离到的噬菌体进行生物学特性分析,采用弧菌选择性培养基进行副溶血弧菌的分离,并进行特异性PCR鉴定。以副溶血弧菌分离株为宿主菌,采用双层平板法进行噬菌体的分离,通过负染法电镜观察噬菌体的形态和大小,并对噬菌体进行裂解谱、最适感染复数(MOI)、一步生长曲线、以及对温度、pH值、紫外线及氯仿的稳定性等生物学特性的研究。结果显示,分离到噬菌体v B_VpS_PG08为长尾噬菌体,对22株副溶血弧菌的裂解率为32%;当最佳MOI是0.01时,噬菌体的效价可以达到2.2×10~9PFU/m L。该噬菌体潜伏期为20 min,暴发期为30 min,暴发量为55;v B_VpS_PG08高温耐受性较弱,p H值稳定性较强,在p H值3～12环境中仍有活性。噬菌体v B_VpS_PG08对紫外线照射敏感,对氯仿不敏感。表明噬菌体v B_VpS_PG08作为一株烈性噬菌体,对副溶血弧菌具有较广泛的裂解作用。本试验将为临床副溶血弧菌的噬菌体控制奠定基础。 相似文献
14.
为拓宽噬菌体宿主谱,本研究通过将产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)特异性噬菌体v B_Eco M_JS09与肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7细菌进行多轮共培养,筛选到了6株能够同时裂解ETEC和EHEC O157∶H7的噬菌体,并多次传代和宿主谱鉴定,选择其中1株噬菌体Bp47-12鉴定其生物学特性。双层琼脂平板试验结果表明,噬菌体Bp47-12在平板上均呈现出了典型的裂解性噬菌体特征,空斑透亮,边缘整齐清晰,无晕环噬菌斑;宿主谱鉴定结果表明,ETEC和EHEC O157∶H7菌株均对噬菌体Bp47-12敏感,实现了噬菌体在ETEC和EHEC O157∶H7菌株之间的交叉裂解反应,拓宽了亲本噬菌体JS09的宿主谱;噬菌体Bp47-12能够耐受60℃左右高温,在p H值3~9时效价稳定;最佳感染复数为1;潜伏期为30 min,爆发期为70 min,平均爆发量分别为15;体外裂解试验结果表明,在5 h之内噬菌体Bp47-12能够有效裂解ETEC和EHEC O157∶H7菌株,OD600值下降约0.66;吸附曲线结果表明,在25 min之内,效价为105 PFU/mL的噬菌体Bp47-12能够完全吸附到宿主菌表面。本研究具有潜在的应用价值,也为拓宽裂解性噬菌体宿主谱和应用噬菌体提供了科学依据。 相似文献
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旨在为研制沙门菌特异性抗菌制剂提供试验数据和参考,以禽源沙门菌为宿主菌,从鸡场污水中分离纯化沙门菌噬菌体,并对其生物学特性和基因组学进行研究。结果显示：分离到1株沙门菌烈性噬菌体S5,透射电镜下该噬菌体头部直径约50 nm,尾部长约200 nm,头部呈正二十面体对称,属有尾噬菌体目、长尾噬菌体科;该噬菌体对20株沙门菌的裂解率为75%,效价为8×109PFU·mL-1;在30~60℃作用30 min和1 h的效价基本不变;pH 4.0~11.0对噬菌体活性影响不明显;最佳感染复数为0.000 1,一步生长曲线显示其感染宿主菌后5 min内（潜伏期）效价基本保持不变,暴发期约为95 min,平均裂解量为50 PFU·cell-1。噬菌体S5是双股DNA病毒,基因组全长为72 519 bp,GC含量39.45%,含有9种tRNA,预测到109个ORF,未发现任何编码细菌毒力因子等有害产物的基因。沙门菌烈性噬菌体S5,裂解效果较好、对环境适应性强、遗传背景清楚,以期成为防控沙门菌的抗生素替代产品。 相似文献
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为探明大肠杆菌噬菌体的生物学特性和全基因组特征,本研究以在广西某猪场污水中分离得到的1株产志贺毒素且多重耐药的大肠杆菌GXEC010为宿主菌,同时在污水中分离到1株具有裂解作用的噬菌体,并通过透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线绘制、热敏感性与酸碱度稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序等方法分析该噬菌体的生物学特性与基因组特征。结果表明,分离纯化得到能高效裂解大肠杆菌GXEC010的噬菌体,命名为vB_EcoM_BP10,其噬菌斑呈清晰透明,边缘光滑整齐;该噬菌体的最佳感染复数为1;一步生长曲线结果显示,感染宿主菌潜伏期为5 min,爆发期为65 min,爆发量为51;可耐受温度范围为30~60 ℃,在pH为5~8的环境中能维持稳定性;噬菌体杀菌试验结果显示,感染复数（MOI）为1时噬菌体vB_EcoM_BP10具有良好的杀菌效果。全基因组测序结果表明,噬菌体vB_EcoM_BP10基因组总片段长度为52 288 bp,GC含量为44.16%,含有71个阅读框（ORF）。GO功能注释表明,噬菌体vB_EcoM_BP10可参与小分子代谢、细胞氮化合物代谢等生物学过程中,具备核苷酸转移酶活性、离子结合、DNA结合等分子功能。与Escherichia phage ST32、 Enterobacteria phage phiEcoM-GJ1的亲缘关系较近。综上所述,噬菌体vB_EcoM_BP10具有清晰的宿主受体特异性,良好的热稳定性和酸碱稳定性,本研究结果能为有效防控产志贺毒素多重耐药大肠杆菌奠定一定的理论基础。 相似文献
18.
19.
《中国兽医杂志》2017,(6)
从商品肉鸭场采集鸭粪及垫料,以实验室保存的沙门菌为宿主菌,采用双层平板法分离到1株烈性噬菌体。对分离到的噬菌体进行纯化、效价测定、裂解谱测定、形态观察,并且进行了最佳感染复数、温度跟p H值稳定性和一步生长曲线的生物学特性研究。结果表明,该噬菌体形成的蚀斑均匀透亮,效价能达到109PFU/m L以上,并能裂解多株沙门菌菌株,为宽裂解谱噬菌体,透射电镜显示,该噬菌体为长尾噬菌体;最佳感染复数为0.001;一步生长曲线测定表明,该噬菌体的潜伏期为15 min,暴发期为30 min,暴发量约为320;该噬菌体的温度、p H值耐受性良好;紫外线照射60 min后效价降低3个梯度,由此可见该噬菌体分离株可作为潜在开发的生物消毒剂菌株。 相似文献
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李凯年 《畜牧兽医科技信息》2003,19(1)
噬菌体是可以感染并杀死细菌的病毒。美国研究人员进行三项研究测定了用噬菌体防治肉鸡大肠杆菌呼吸道感染的效果。第一项研究,用10~3cfu大肠杆菌/mL与10~3或10~6pfu噬菌体混合或者用10~4cfu大肠杆菌/mL与10~4或10~8pfu噬菌体混合进行气囊 相似文献