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1.
为了确定卵泡液(直径大于10 mm)对卵母细胞成熟的影响,共收集1759枚卵母细胞进行试验。在成熟液中分别添加0%,10%,30%和50%的卵泡液(bFF, bovine follicular fluid ),成熟培养24h后,孤雌激活或者体外受精和胚胎培养;对比10% bFF和10% 胎牛血清（FBS）,以及观察微滴培养对卵母细胞成熟的影响。结果表明,在孤雌激活组中,bFF浓度对卵裂率的影响差异不显著,但胚胎囊胚发育率高于对照组（P<0.05）;在体外受精组中随着bFF浓度增加而卵裂率下降(P<0.01),而且囊胚率也下降(P<0.05)。在10%的bFF组中,孤雌激活囊胚率和体外受精囊胚率分别为47.1% 和38.0%,囊胚扩张率显著高于其它组。从试验得出,添加10% bFF有利于卵母细胞胞质成熟,且不会降低到受精率,而且可以替代FBS;微滴培养不利于卵母细胞成熟。 相似文献
2.
为了在实验室建立一套黄牛-奶牛IVF胚胎制备体系,为IVF胚胎的研究提供来源方便、制备简单的素材,本实验从黄牛-奶牛IVF胚胎制备过程中卵巢的处理方法、精子的处理方法及受精卵的培养方法等几个方面进行优化。结果表明：温度递增式洗涤卵巢(25℃、30℃、35℃、39℃),对卵母细胞起到一定的缓冲作用,获取A级COCS的比例和卵母细胞的成熟率较直接用25℃和39℃生理盐水洗涤卵巢高且差异显著,但是卵裂率和囊胚率并没有显著差异;用移液器轻轻吹打精子后,显著提高卵母细胞的受精率和卵裂率;培养方法对黄牛-奶牛IVF胚胎的早期发育有一定的影响。研究结果提示,经过温度递增式的生理盐水梯度洗涤卵巢,以体外成熟的黄牛卵母细胞为受体、以高产奶牛冷冻精子经过移液器轻微反复吹打处理后进行体外受精,受精卵置五孔板中进行IVF胚胎的体外培养,可以获得发育至孵化囊胚的黄牛-奶牛IVF胚胎。 相似文献
3.
2种化学激活方法制备的小鼠孤雌胚胎早期发育指标比较研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为了寻找一种更健康、更有效地制备孤雌胚胎的方法,进而从根本上提高哺乳动物孤雌胚胎、体外受精胚胎及核移植胚胎成活率并减少孤雌胚胎、核移植胚胎出生后发生潜在疾病与缺陷的几率。通过比较2种不同化学激活方法（试验组I：7%乙醇+2 mmol/L 6DMAP;试验组II：7%乙醇+2 mmol/L 6 DMAP+5 μg/mL CB）制备的小鼠孤雌胚胎由卵母细胞激活到发育至囊胚的时间、囊胚形态及囊胚细胞数目,初步研究了不同化学方法制备的小鼠孤雌胚胎在形态学及细胞水平上的差异性。结果表明：试验组I与试验组II相比,前者比后者卵裂率稍高,桑葚率、不同时间段的囊胚率稍低,但两组间数据差异不显著(64.9 vs73.7,P>0.1;31.7 vs28.8,P>0.1;8.7 vs5.5,P>0.1)。2种方法所得的孤雌囊胚在形态上相似,但是试验组II囊胚细胞数要比试验组I囊胚细胞数稍少(67vs50,P>0.1);两组囊胚的细胞数与受精囊胚相比没有显著差异(67vs50vs65,P>0.1)。选用的2种化学方法制备的小鼠孤雌胚胎,在由卵母细胞发育至囊胚的时间、囊胚形态及囊胚细胞数目方面没有显著差异。 相似文献
4.
EGF对牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响 总被引：5，自引：0，他引：5
在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10,30,50ng/ml表皮生长因子（EGF）,24h检查成熟率,并进行孤雌激活。结果表明：添加10ng/ml、30ng/ml EGF组牛卵母细胞成熟率较对照组（未添加EGF）无显著差异（79.8% vs 71.5% vs 70.4%,p>0.05）,但EGF添加至50ng/ml时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%（P<0.01）;在实验1的基础上,比较培养液中添加10ng/ml、30ng/ml 、50ng/ml EGF对牛孤雌激活胚胎体外发育的影响,结果发现在培养液中添加EGF并不能显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率（P>0.05）,但可显著提高其囊胚孵化率（P<0.01）。 相似文献
5.
为探明外源性组织蛋白酶抑制剂(E-64)对猪卵母细胞体外发育能力的影响,通过向成熟液中添加1、5、10μmol/L的外源性组织蛋白酶抑制剂,对猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外成熟培养46 h,统计第一极体率,随后分别进行体外受精和孤雌激活,统计第2天的卵裂率和第7天的囊胚率。结果表明,成熟液中加入1μmol/L E-64的第一极体排出率显著高于未添加的对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组。将体外成熟的卵母细胞进行体外受精及孤雌激活,体外受精后胚胎的卵裂率与囊胚率结果均为成熟液中加入1μmol/L E-64的添加组显著高于对照组以及5、10μmol/L E-64的添加组;孤雌激活后,4组间胚胎的卵裂率差异不显著,囊胚率为10μmol/L E-64的添加组显著低于其他3组。因此1μmol/L E-64能促进猪卵母细胞的核成熟,并能进一步提高其体外受精后的卵裂率和体外培养的囊胚率。 相似文献
6.
为摸索牛体细胞核移植最优的联合激活方法,利用体外成熟22~24h的去核卵母细胞作为受体细胞质,牛耳部成纤维细胞作为供体细胞,注射到透明带间隙。在电融合参数为电场强度25N/C,脉冲宽度10μs,2次脉冲的融合条件下,对不同联合化学激活方式进行比较。结果显示在电融合参数不变的条件下,6-DMAP+CB的激活方式,融合率最高但差异不显著,后期发育的卵裂率(74.1%)和囊胚率(27.8%)也最高。笔者初步得到了较适合牛体细胞核移植的联合激活方法,为今后牛的体细胞核移植胚胎的发育和研究奠定了基础。 相似文献
7.
小鼠不同卵龄卵母胞细纺锤体位置及对去核效率的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
探讨小鼠不同卵龄卵母细胞纺锤体位置与去核效率之间的关系。用Spindle-View观察小鼠不同卵龄卵母细胞纺锤体位置,然后对其进行去核操作。观察发现卵龄10,12h的纺锤体处于I,II,III区的比率分别为95%,3%,2%;33%,33%,23%。两组进行盲吸去核,去核率分别为90%和22%。在Spindle-View下去核卵龄10h的卵母细胞去核率为95%,其中有56%(n=59)的卵母细胞去不到1/6的卵胞质就可去核,而卵龄12h的卵母细胞去核率为87%,其中有76%(n=85)的卵母细胞吸去1/3的卵胞质才可去核。小鼠卵母细胞不同卵龄对纺锤体位置和核移植程序中去核效率有显著影响。 相似文献
8.
以2~8细胞期鼠胚细胞为供体核,选用注射hCG后15h、17h的兔卵母细胞为受体胞质,施加1.6 kv/cm、160、两次脉冲的电场条件,间隔20min,融合液为含Ca、Mg的0.3mol/L甘露醇,适于鼠、兔种间EOBC的融合激活。小鼠2—细胞、4—细胞期胚细胞与兔去核卵母细胞融合率高于8—细胞期胚细胞,分别为83%、80%及62.5%,桑囊胚发育率差异不显著。体细胞共同培养系统和Taurine能显著提高鼠、兔核质杂交胚的体外发育能力。 相似文献
9.
外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10 μg/mL FSH +10 μg/mL LH（对照组）和0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明,对照组卵母细胞的生发泡破裂率(75.0%)和极体率(79.6%)均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组(P<0.05),而囊胚率各组之间均无显著差异(P>0.05)。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。 相似文献
10.
绵羊卵母细胞OPS玻璃化冷冻效果初报 总被引：4，自引：0，他引：4
比较了绵羊卵母细胞不同发育阶段对OPS玻璃化冷冻效果的影响,同时比较了程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻的效果。结果显示:成熟培养0h(GV期)、16h、24h、26h的卵母细胞玻璃化冷冻、解冻后形态正常数差异不显著()P<0.05),培养24h卵母细胞冷冻保存后,分裂卵数、囊胚发育数与培养0h、16h、26h试验组差异显著(38.3%VS13.3%、26.7%、28.3%;11.7%VS0%、5.0%、8.3%,P<0.05),而培养16h、26h两个试验组之间差异不显著(P<0.05);程序化冷冻方法(参考胚胎程序化冷冻)、OPS玻璃化冷冻与不冷冻三组试验在形态正常数、分裂卵数和囊胚发育数上差异都极显著(20.0%VS54.1%、100%;6.7%VS37.5%、78.3%;0%VS11.4%、23.3%,P<0.01)。 相似文献
11.
不同氧气浓度对绵羊体外受精胚胎凋亡的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
为了研究培养环境中的氧气浓度对绵羊体外受精胚胎发育的影响。比较了低氧环境(5%O2)和高氧环境(20%O2)中绵羊体外受精胚胎的发育能力和凋亡发生情况,同时利用Real-time PCR技术检测这两种氧气浓度下绵羊体外受精胚胎中凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。结果表明：在这两种氧气浓度下发育的绵羊体外受精胚胎,细胞凋亡信号都起始于16-细胞期,且在胚胎各发育阶段发生凋亡的比率没有明显差异,但低氧环境组的囊胚发育率和囊胚细胞数都显著高于高氧环境组的（分别为45.9%、134;14.6%、106,P＜0.05）,且其囊胚细胞的凋亡指数也显著低于高氧环境组（分别为0.053、0.066,P＜0.05）;PCR的研究结果表明：不论是高氧环境还是低氧环境,在绵羊体外受精胚胎的各阶段都能检测到Bax和Bcl-2的表达。而且在囊胚阶段,低氧环境下的Bcl-2基因表达量明显高于高氧环境下的。低氧环境可以抑制绵羊胚胎细胞的凋亡,更有利于绵羊胚胎的发育。 相似文献
12.
为了探讨适宜浓度的(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)对猪卵母细胞体外成熟的影响,以提高猪卵母细胞的成熟效果进而促进胚胎的后期发育,以期为进一步改善猪卵母细胞体外成熟体系提供参考。本研究通过在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的VEGF,成熟培养液(TCM199+BSA)中分别添加0 ng/mL VEGF对照组、5 ng/mL VEGF试验组Ⅰ、50 ng/mL VEGF试验组Ⅱ、500 ng/mL VEGF试验组Ⅲ的卵母细胞成熟培养后,经孤雌或体外受精和体外培养。结果表明：（1）试验组Ⅰ极显著地提高了猪卵母细胞的成熟率,试验组Ⅱ显著提高了猪卵母细胞的成熟率;（2）成熟的卵母细胞经孤雌激活和体外培养后,试验组Ⅰ极显著提高了孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率。试验组Ⅱ显著提高了孤雌胚胎的卵裂率、极显著的提高了囊胚率;（3）成熟的猪卵母细胞经体外受精和体外培养后,试验组Ⅰ显著地提高了体外受精胚胎的卵裂率和囊胚率,试验组Ⅱ显著地提高了体外受精的卵裂率、极显著地提高了囊胚率。5 ng/mL或50 ng/mL的VEGF,有利于促进猪卵母细胞的体外成熟和早期胚胎的发育。 相似文献
13.
布尔山羊公羊身体质量与精液品质和生殖激素之间的关系 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]为了对布尔山羊公羊进行更科学的养殖和更合理的选择与利用,[方法]对24只不同身体质量的2~3岁布尔山羊公羊精液品质和血清生殖激素水平进行了测定。[结果]结果表明：BMI<60kg/m2公羊采精量较低,为0.79±0.03 mL。BMI>80kg/m2公羊虽然采精量较多（1.02±0.07 mL）,但精液密度和活力较差。BMI=60~80kg/m2公羊的采精量居中,为0.95±0.12,但精液密度为28.32±4.08亿/mL,明显高于BMI<60kg/m2组（31.93b±2.06亿/mL）和BMI>80kg/m2组（25.96a±3.23亿/mL）（P<0.05）,而且精子活率高,畸形精子较少。体质量较差的公羊血清睾酮、雌二醇和促卵泡素水平也较低,这三项指标与采精量呈正相关。[结论] 生产中保持公羊良好的体质量是至关重要的。 相似文献
14.
针对奶牛胚胎体外生产环节,对体外受精和培养等技术进行了研究,旨在建立奶牛性控胚胎体外生产技术体系。结果表明,卵母细胞外周卵丘细胞至少保持3层以上,在成熟基础液中添加10 ng/ml的EGF,利于核质成熟;在精子获能液中添加咖啡因降低精子的存活时间;牛胚胎前3 d用CR1aa+BSA培养,再用SOFaa+5%FBS培养,获得高的囊胚发育率,并且添加50 ng/ml IGF-I后胚胎的发育得到了很大的改善。利用性控精液进行体外受精,受精率有轻微下降,但对生产的胚胎发育质量无明显（P>0.05）影响,胚胎移植后受胎率为40%左右。 相似文献
15.
糜为禾本科黍族作物.子房内有1倒生胚珠,双珠被,厚珠心.胚囊类型为蓼型,8核7细胞胚囊.成熟胚囊受精前1助细胞已解体.反足细胞4～5个,极核未融合.双受精过程中,卵受精后有三核仁现象,二极核与精核先后受精后,胚乳核先于合子分裂,游离核阶段约1.5～4天、第5天开始积累淀粉.合子休眠约20小时,第1次分裂为横裂,约12天胚分化完成,约22～28天籽粒成熟.反足细胞于花后6天胚分化开始,胚乳淀粉大量积累时消失.籽粒发育过程中的落粒现象应深入探讨. 相似文献
16.
为了找到一种可以准确测量活体刺参体长的方法,我们研究了不同浓度及不同药浴时间条件下,硫酸镁、丁香酚和乙二醇苯醚等三种麻醉剂对仿刺参(Apostichopus japonicus)幼参(1.3815±0.2138) g的麻醉效果。试验结果显示：（1）乙二醇苯醚的麻醉效果最差,丁香酚在浓度较小(≤0.3 mol/L)时有一定的麻醉效果。当浓度过大时,二者都会对刺参造成伤害。硫酸镁在浓度为0.3~0.4 mol/L时麻醉效果最好,麻醉时间较快（约30 min）且麻醉率和苏醒率均达100%。（2）在0.3~0.4 mol/L的硫酸镁溶液中药浴1 h左右的刺参,其体长与药浴前的体长变化差异极显著,而药浴1、1.5、2 h的刺参个体间体长变化不显著。以上结果表明：0.3~0.4 mol/L的硫酸镁溶液对刺参的麻醉效果最好,既不影响刺参的正常生长又可准确测量其自然生长状态长度。通过本研究确定硫酸镁是刺参的最佳麻醉剂,用于刺参体长测量的最佳浓度和麻醉时间分别为0.3~0.4 mol/L 和 1 h。 相似文献
17.
不同补饲水平对努比亚母羊体况及繁殖性能的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
选择12月龄努比亚羊75只集中配种,配种后将母羊分随机分为3组,分别补饲复合预混料+尿素、浓缩料和精料补充料,在配种时、妊娠100d、妊娠150d进行体重、体况、体尺测量,同时记录母羊产羔数。结果表明：补饲精料补充料的母羊体重、增重和胸围均大于补饲浓缩料组和补饲尿素组,三组之间存在明显差异（P<0.05或P<0.01）。产羔数与母羊体况BCS和体况指数BCI密切相关,产0只羔羊母羊BCS和BCI在整个试验期间几乎没有变化,产1～3只羔的母羊BCS和BCI整个妊娠期都处于上升趋势。三组母羊产羔数分别为1.00±0.76、1.44±0.51、1.83±0.49只,羔羊出生重分别为2.25±0.18、2.51±0.37、2.64±0.40kg,组间差异显著（P<0.05或P<0.01）。母羊妊娠期体BCS和BCI变化情况一致,三组间存在显著差异（P<0.05或P<0.01）。妊娠150d母羊的体况BCS和体况指数BCI与产羔数显著相关,产羔数 =-0.4177BCS2+3.727BCS–4.9185（R2=0.9984）,产羔数=-0.0018BCI2+0.2795BCI-7.2278（R2=0.9985）。 相似文献
18.
【研究目的】为了进一步挖掘猪的遗传潜力,为体外受精、动物克隆和转基因等胚胎生物技术研究提供大量优质卵源。【方法】以极体排出情况为判断标准,采用一步法和两步法成熟培养猪腔前卵泡卵母细胞,来考察猪腔前卵泡卵母细胞最佳成熟方式。【结果】采用任何一种方法卵母细胞经体外成熟后都没有达到MⅡ。然而,腔前卵泡体外培养5d后,分离出的卵丘卵母细胞复合体再培养12d,卵母细胞平均直径达到102.68μm(102.68±12.21),接近正常成熟卵母细胞的体积,为卵母细胞的成熟创造了条件。【结论】用两步法培养猪的腔前卵泡,其卵母细胞能够达到接近正常成熟卵母细胞的体积,说明采用两步法培养猪腔前卵泡卵母细胞是可行的。 相似文献