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不同保存方法对天山樱桃总DNA提取效果的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]寻找天山樱桃叶片样品较适合的保存方法,比较研究不同保存方法对天山樱桃总DNA提取效果的影响.[方法]以天山樱桃幼嫩叶片为试验材料,分别采用液氮保存、冷冻保存、干燥保存和微波不同时间处理后硅胶干燥保存等保存方法,比较分析各保存方法对所提取样品总DNA质量的影响.[结果]通过-70℃冷冻保存、室温保存、硅胶干燥保存、微波干燥2min保存的样品所提取总DNA的纯度较高,液氮保存的样品所提取总DNA的完整性好;干燥保存法保存的样品所提取的总DNA扩增效果较好.[结论]考虑到野外采样受到多方面因素的限制,适合天山樱桃分子生物学研究的保存方法为硅胶干燥保存. 相似文献
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[目的]建立一种更优化的STO细胞冷冻保存方法.[方法]STO细胞传至第3代后,调节其浓度至2.09×105个/mL,开展冷冻保存试验.Ⅰ组将STO细胞置于4℃下平衡,1 h后转入-20℃下,12 h后将其转至液氮中保存;Ⅱ组将STO细胞装入已注入250 mL 95％乙醇的降温器后,立即转至-70℃下,12 h后再将其转至液氮中保存;Ⅲ组将STO细胞悬液于液氮面上方10 cm处平衡20 min,然后将其缓缓转至液氮中.同时,设Ⅳ组为对照组,即STO细胞不进行冷冻处理.在液氮中保存30 d后进行解冻,以STO细胞的回收率、存活率和生长情况为研究指标,通过MTT法进行STO细胞冻存效果评价.[结果]经冷冻处理后,3种方法STO细胞解冻后回收率和存活率均存在显著差异(P<0.05).Ⅱ组细胞解冻后细胞回收率低于Ⅰ组、高于Ⅲ组,但细胞存活率最高(84.91％).与Ⅰ组和Ⅲ组相比,Ⅱ组STO细胞冻存方法不仅能保证冷冻效果,而且可以回收更多的细胞.Ⅱ组STO细胞复苏后生长相对缓慢,但STO细胞经培养后可恢复至冷冻前的生长状态.Ⅰ组和Ⅱ组复苏后STO细胞的增殖速度较快,且增殖率基本相同,而Ⅲ组细胞的增殖速度较慢.[结论]Ⅱ组STO细胞于-70℃冰箱中平衡过夜,再转移至液氮中超低温冷冻是较为理想的保存方法. 相似文献
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《宁夏农林科技》2018,(10)
本试验采用离体叶片接种、人工接种和形态学鉴定方法对宁夏黄瓜霜霉病和白粉病的病原菌进行了种类鉴定,并采用悬滴法等研究了4种保存方法对2种病原菌孢子(囊)的萌发和致病性的影响。结果表明:宁夏黄瓜霜霉病的病原菌为古巴假霜霉菌[Pseudoperonospora cubensis (PerketCurt) Rostov],黄瓜白粉病的主要致病菌为瓜类单囊壳白粉菌[Sphaerotheca fuliginea (Schlecht) pollacci]。明确了黄瓜霜霉病菌适宜的保存方法为10%二甲基亚砜+5%脱脂乳保存法;琼脂粉保存法次之,保存条件为-20℃冷冻24 h,再放入-78℃低温保存,其孢子萌发率较高,致病力较强。黄瓜白粉病菌适宜的保存方法为10%蔗糖+12%甘油+7%二甲基亚砜+8%脱脂牛乳混合液保存法,保存条件为-20℃冷冻24 h,再放入-78℃低温保存或直接放于-20℃冰箱保存效果较好。 相似文献
4.
研究了密花石斛花粉不同保存方法下的花粉寿命,并对密花石斛花粉的超低温保存技术程序进行了研究。 结果表明:1)密花石斛花粉采用室温（(27±2)℃）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）保存,花粉寿命分别为5、23、17 d,超低温保存(-196℃)的花粉120 d后仍可检测到花粉萌发,且萌发率与新鲜花粉相同,超低温保存方法至少可以保存密花石斛花粉4个月;2)密花石斛花粉超低温保存的程序为新鲜花粉（含水量43.26%）直接投入液氮（LN）保存,需用时采用室温、自来水或水浴化冻即可。 相似文献
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6.
《山东农业科学》2015,(8)
针对棉叶贮藏方法不恰当导致DNA提取得率及纯度较差的问题,本研究以新鲜棉叶为对照,比较了5种贮藏条件下的棉叶DNA提取效果,以期筛选出一种棉叶贮藏的较优模式,从而提高DNA的提取得率及纯度。结果表明,-20℃冷冻3 d的棉叶DNA得率最高且纯度较好,甚至比新鲜叶片的DNA得率高51.4%;3 d冷冻贮藏的DNA得率明显高于3 d冷鲜贮藏的;7 d液氮冷冻贮藏的DNA得率明显优于7 d硅胶干燥贮藏的和冷冻贮藏的;7 d液氮速冻贮藏的DNA纯度与7 d硅胶干燥贮藏的相近。综上所述,短期贮藏可采用-20℃冷冻保存的方法;较长时间的保存建议采用液氮速冻的贮藏方式。 相似文献
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[目的]建立一套完整、快速和经济的卷叶贝母超低温保存关键技术。[方法]对卷叶贝母愈伤组织超低温保存技术中的预培养时间、保护剂类型和解冻方式进行了研究。[结果]预培养时间、冷冻保护剂类型和解冻方式均是影响卷叶贝母愈伤组织冷冻保存过程中的关键因素。经预培养9 d、由10%二甲基亚砜和0.5 mol/L山梨醇组合的复合冷冻保护剂冷冻、在40℃水浴条件下解冻的卷叶贝母愈伤组织其保存效果最佳,保存后细胞的存活率可达87.39%。[结论]为更好地保护卷叶贝母种质资源提供了参考。 相似文献
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以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。 相似文献
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中国红豆杉种子超低温保存技术研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探索中国红豆杉种质资源的超低温保存技术,为红豆杉种质资源的开发利用提供支持。【方法】采用多重单因素试验法,将中国红豆杉种子前处理后,采用9种不同的冷冻保护剂处理,之后分别进行0 ℃冷浴静置、25 ℃室温0.6 MPa抽真空和冰浴250 W超声波处理,处理时间分别为0,5,10和15 min;然后按照4种不同的冷冻方式投入液氮中冷冻保存,保存结束后分别采用37 ℃水浴快速、20 ℃流动自来水、5 ℃慢速和25 ℃室温静置进行解冻,最后探讨了在较优的3种冷冻保护剂条件下保存时间对红豆杉种子活力的影响。以氯化三苯基四氮唑（TTC）还原法测定冷冻保存后种子的活力。【结果】冷冻保护剂、保护剂处理方式和处理时间、冷冻方式、解冻方式、保存时间均对超低温冷冻保存后的红豆杉种子活力具有明显影响。9种冷冻保护剂中较优的是体积分数8%二甲基亚砜（DMSO）、体积分数5%乙二醇和PVS-4,冻存后中国红豆杉种子TTC还原量分别为（2.679 7±0.255 6）、（2.290 4±0.040 7）和（2.055 5±0.009 9） mg/g;冰浴250 W超声波处理10 min的效果最好,TTC还原量为（2.143 1±0.098 6） mg/g;4种冷冻方式中－20 ℃预冻1 h后投入液氮保存红豆杉细胞活性相对较高,TTC还原量为（2.454 4±0.069 5） mg/g。37 ℃水浴快速解冻后细胞活力更高,TTC还原量为（2.469 7±0.022 1） mg/g。【结论】红豆杉种子的最佳超低温保存技术条件为：采收后的新鲜种子干燥后于5 ℃条件下放置9个月打破其休眠,然后机械去掉种子硬壳,用蒸馏水浸泡12 h,脱去种子内皮,在无菌条件下用体积分数75%酒精消毒30 s,无菌水冲洗2～3次,沥干,移入冷冻管中,加入体积分数8% DMSO冷冻保护剂,封口,于冰浴250 W超声波条件下浸泡处理10 min,于-20 ℃预冻1 h后置于液氮中冷冻保存72 h,然后在37 ℃水浴中快速解冻。在此条件下,中国红豆杉种子活力最高,TTC还原量可达（2.469 7±0.022 1） mg/g,而且同等条件下,选用PVS-4冷冻保护剂更有利于红豆杉种子的超低温长期（1个月以上）保存。 相似文献
10.
为了解决向日葵杂交育种中花期不遇或远距离杂交等问题,探寻适合向日葵花粉长期贮藏的条件,以3个向日葵品种的花粉为试材,均在室温(20℃)、低温(4℃)、冷冻(液氮处理后-80℃保存)、超低温(-196℃的液氮中保存)4种温度条件下保存360 d,采用离体培养的方法,定期测定了不同贮藏时间后的花粉活力,以探索适宜向日葵花粉贮藏的温度条件。结果表明:20℃室温贮藏,花粉活力下降很快,贮藏1 d后花粉活力降至50%以下,第7 d时已基本失活,不适宜花粉贮藏;4℃低温贮藏,第10 d时花粉活力维持在50%以上,超过10 d后花粉活力快速下降,适宜花粉10 d内的短期贮藏;-80℃冷冻和-196℃超低温贮藏,至360 d时花粉活力与贮藏前相比均变化不大,适宜向日葵花粉的长期贮藏。 相似文献