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沙田柚遗传转化的探讨 总被引：6，自引：0，他引：6
采用含ｎｏｓ基因和人工合成柞蚕抗菌肽Ｄ基因ＡＰ－Ｄ基因的根癌农杆菌对沙田柚外植体进行转基因研究,与根癌农杆菌共培养产生的芽,苗经Ｋｍ敏感性筛选,获得了若干转基因植株,并对这些植株进行了报告基因ｎｏｓ表达的电泳检测,同位素标记、ＡＰ－Ｄ基因为探针的点印迹杂交,外源ＡＰ－Ｄ基因的ＰＣＲ扩增和Ｓｏｕｔｈｅｎ杂交。结果显示,报告基因ｎｏｓ、抗菌肽Ｄ基因已转入沙田柚植株细胞中。 相似文献
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培育苹果转基因植株的研究 总被引：15，自引：2，他引：13
采用“皇家嘎拉”苹果白化面外植体,通过根癌农杆菌ＥＨＡ１０５介导,证明了培养基中存在生长素可促进基因转化,转化效率比对照提高２倍以上。将外植体下ＥＨＡ１０１株系在含有生长素的２基中共培养,获得了转基因植株。采用ＰＣＲ分析和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ核酸杂交,确定ＧＵＳ基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ基因在杆株体内的表达。 相似文献
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提高苹果基因转化效率的研究 总被引：6，自引：1，他引：5
采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下,外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍,而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上,产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化,白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上,并得以表达。 相似文献
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猕猴桃成熟果实中脂氧合酶基因的克隆 总被引：11，自引：0，他引：11
采用ＰＣＲ扩增方法,从成熟猕猴桃果实组织中克隆到一个８２４ｂｐ的脂氧合酶（ＬＯＸ）基因片段（ｐＫＬＣ１）,该片段含有２７５个氨基酸组成的开放阅读框架,它与拟南芥菜、黄瓜、豌豆、土豆、水稻、大豆、烟草和番茄的核苷酸同源性为５９．０％～７４．６％,氨基酸同源性为６３．１％～７６．３％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明,ｐＫＬＣ１片段为一低拷贝数基因家族所编码。 相似文献
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以牵牛萌动种胚为受体,用含有３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４３及含有３５Ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－生长素调控基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４进行转化。通过对转化及对照植株苗期叶的同工酶分析,发现转化植株叶的过氧化物酶同工酶及酯酶同工酶谱带来对照植株有明显差异。转化频率较高。间接验证了外源ＤＮＡ的导入,说明同工酶分析方法可做为转基因植株早期筛选的方法之 相似文献
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草莓主栽品种再生和转化的研究 总被引：41，自引：2，他引：41
建立草莓主栽品种高效、稳定的离体再生体系和遗传转化体系, 获得了转基因植株。‘弗吉尼亚’和‘森嘎拉’的叶片离体再生芽频率达到100 %。试管苗叶片与农杆菌菌株EHA105 共培养3 d。共培养后的叶片在附加卡那霉素40 mg/L 的再生培养基上选择培养4周后, 外植体再生出转化芽, 弗吉尼亚的转化芽再生频率可达6. 8 %。采用组织化学染色法对随机选取的10 个GUS 基因转化植株进行基因表达测定, 结果5 个植株强烈表达GUS 活性。转bar 基因植株在附加除草剂草丁膦10 mg/L 的培养基上能够正常分化, 在田间对草丁膦表现出强烈抗性。转基因植株开花、结果正常。 相似文献
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农杆菌介导西瓜转葡聚糖酶及几丁质酶双基因 总被引：7，自引：1，他引：6
采用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法将含有葡聚糖酶基因和几丁质酶基因表达载体遗传转化西瓜(Citrulluslanatus),遗传转化体系为以子叶为外植体经过组织培养获得再生植株。结果表明,Kan抗性芽的分化率随着共培养时间的延长先上升后下降,GUS阳性芽的百分率逐渐升高,共培养时间30h后,GUS阳性芽的百分率趋于平稳,同时,通过对候选转基因植株中GUS基因染色鉴定、卡那基因、葡聚糖酶基因及几丁质酶基因特异引物PCR检测,表明葡聚糖酶和几丁质酶基因已成功导入西瓜植株中,转基因植株的表现在进一步研究中。 相似文献
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余甘子下胚轴离体培养中的器官形成与植株再生(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
以余甘子(phyllanthusemblicaL.)下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,探讨不同激素组合对下胚轴器官发生和植株再生的影响,以期建立有效的再生体系,为以后的遗传转化研究奠定基础。结果表明,在附加0.1μmol/LNAA、5μmol/LBA和30g/L蔗糖MS培养基上培养,5周后不定芽再生频率达87.5%,平均每个外植体再生芽数为9.7个,为最佳组合。将分化的不定芽转移至含有10μmol/LIBA的MS培养基上,5周后生根,发育成健康的植株,生根率在29.2%。 相似文献
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以贵州黎平朝天椒地方种为试材,取其无菌苗子叶作外植体,采用植物固体培养基组织培养法,研究了培养基激素配比、无菌苗生理年龄、子叶部位等对朝天椒子叶的离体接种、诱导愈伤、不定芽分化、芽茎伸长、诱导生根、驯化移栽、成苗等离体培养及植株再生阶段的影响。结果表明:朝天椒子叶适宜芽诱导分化的培养基为MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L,芽分化率达100%;适宜芽伸长的培养基为MS+KT 2mg/L,芽伸长率可达50%;适宜生根的培养基为MS无激素培养基,生根率可达44%。单个外植体平均分化含15~18个不定芽的芽丛(14~16个芽茎),出苗6~7株。从子叶外植体接种至再生苗出瓶需50~55d,再生苗移栽成活率达98%。该研究构建了贵州朝天椒的高效离体培养植株再生体系,为朝天椒的组织快繁和遗传转化奠定了重要的基础。 相似文献
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龙眼rbcL基因结构分析 总被引：2，自引：0，他引：2
通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等分析,分离和克隆了龙眼叶绿体ＤＮＡ Ｌ１４５片段,其中含大部分ｒｂｃｌ基因。通过酶切分析制物理图谱,结合亚克隆和ＰＣＲ扩增,测序分析了龙眼ｒｂｃｌ基因全序列１８３６ｂｐ,其中基因编码为１４２８ｂｐ,编码４７５个氨基酸和一个终止密码子,ｒｂｃｌ基因的５’上游区长２８４ｂｐ,在基因上游区－１９１～－２２０ｂｐ范围内有推测的类似原核生物的启动子序列：－１０区的ＴＡＣＡＡＴ,－３ 相似文献
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甘蓝显性雄性不育系的选育及其利用 总被引：19，自引：5，他引：14
从甘蓝原始材料７９－３９９的自然群体中获得雄性不育突变株７９－３９９－３。研究结果表明，该突变株的雄性不育受一显性不育基因ＣＤＭｓ３９９－３控制。该基因在不同的遗传背景下表现为环境敏感和环境稳定两种类型，且温度是影响不育稳定性的主要因素。环境敏感的显性雄性不育植株通过自交可以得到显性纯合的雄性不育植株。显性纯合不育植株与普通自交系或相应的姊妹系杂交获得了不育株率达到１００％、不育度达到或接近１００％的不育群体。根据ＣＤＭｓ３９９－３基因的这一遗传特点，建立了利用显性雄性不育基因配制甘蓝杂交种的新方法：利用组织培养技术保存和繁殖显性纯合雄性不育材料，然后与遗传差异较小的普通自交系或姊妹系杂交得到不育系。选择园艺性状优良、不育性稳定的不育群体作不育系，与配合力优良的自交系杂交，配制出了优良的杂交组合。试验采种结果表明，携带ＣＤＭｓ３９９－３基因的甘蓝雄性不育系结实性状优良 相似文献
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桃ACC氧化酶基因的克隆和植物表达载体的构建 总被引：15，自引：1，他引：14
以‘玉露’桃叶片基因组ＤＮＡ为模板,用ＡＣＣ氧化酶基因特异寡聚核苷酸为引物进行ＰＣＲ扩增,得到１．３ｋｂ左右的扩增产物,将其克隆到ｐＵＣ１９加Ｔ载体上,组建亚克隆并进行序列测定,结果表明,该基因全长有１２８８个碱基,由４个外显子和３个内含子组成。外显子由９５７碱基组成,编码３１９个氨基酸。该基因与桃、番茄、矮牵牛、康乃馨、苹果ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ氨基酸序列同源性分别为９９．３％,８３．０％,７６．８％,７４．０％,７５．０％。ＲＮＡ点杂交表明,该基因在未成熟果实检测不到杂交信号,随着成熟度增加,硬度下降,基因表达增强。将ＡＣＣ氧化酶基因分别正向和反向克隆到植物表达载体ｐＢＩ１２１中,并通过酶切分析,ＰＣＲ和点杂交鉴定重组质粒正确。将重组表达质粒导入根癌农杆菌中,经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定证实质粒已被导入。 相似文献
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为优化马铃薯品种Desiree的遗传转化体系并获得转基因马铃薯,以Desiree叶片和茎段为外植体,分别比较了不同转化条件（预培养时间、菌液浓度、侵染时间及激素配比）对遗传转化效率的影响。结果表明：以茎段为外植体,预培养2 d后以OD600=0.5的菌液侵染10 min,在加有1.0 mg?L-1反式玉米素（ZT-t）的MS20选择培养基上的遗传转化率最高,其愈伤诱导率可达80 %,芽分化率可达70 %。通过该转化体系将抗晚疫病基因R1导入马铃薯,获得了具有卡那霉素抗性的转化植株。经PCR检测和抗病接种鉴定,外源基因已经导入马铃薯基因组中,获得的转基因马铃薯具有很强的抗晚疫病能力,且转基因马铃薯植株和块茎的重要农艺性状没有发生改变。 相似文献
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【目的】为了快速有效地利用基因工程的方法获得柑橘无核新种质,【方法】以我国特色多核柑橘优良品种锦橙实生苗上胚轴切段为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行能导致种子败育基因CG1-400-RNase的转化;为快速有效地筛选出转化子,在实生苗上胚轴切段转化再生过程中,根据不同发育阶段的组织或器官对抗生素的敏感程度不同采用不同的选择压。【结果】结果表明,在抗性芽再生过程中卡那霉素质量浓度设定为50 mg.L-1,获得的362个抗性芽转入卡那霉素质量浓度为100 mg.L-1的伸长培养基中进行伸长培养后,进行早期PCR检测,获得28个阳性芽;经过不定芽诱导生根或试管嫁接,获得22株完整植株。【结论】再生植株经PCR和Southern杂交检测,获得2株目的基因以单拷贝的形式插入锦橙基因组的转基因植株,为最终获得具有无核性状且可稳定遗传的柑橘新种质奠定了基础。 相似文献