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1.
扁桃自交不亲和基因的多态性分析 总被引：7，自引：0，他引：7
根据蔷薇科树种S基因的保守序列设计引物, 利用PCR技术对8个新疆扁桃品种S基因进行扩增, 获得了10个大小不同的S基因片段。测序结果表明, 这些DNA片段的核苷酸序列中都具有编码蔷薇科S-RNAase 5个高度保守区域: C1、C2、C3、RC4、C5的序列、编码高变区(RHV) 的序列以及变异度很大的内含子序列, 并且其高变区和内含子序列具有扁桃S基因特异性。同源性分析表明, 获得的10个氨基酸序列与蔷薇科中李亚科S2RNase的氨基酸序列同源性达67% ～96% , 扁桃与樱桃、杏应同属于李亚科。 相似文献
2.
通过对菊花（Chrysanthemum morifolium）品种‘雨花落英’与四倍体菊花脑（C. nankingense）杂交后胚的转录组和蛋白组数据分析，筛选到1个菊花胚不同发育时期差异表达的基因Cm2S。采用高保真PCR技术，克隆得到Cm2S的开放阅读框（ORF）。序列分析表明，Cm2S开放阅读框为852 bp，编码283个氨基酸。利用SMART在线网站预测Cm2S蛋白的功能结构域，结果显示，Cm2S蛋白属于AAI_LTSS家族，具有两个保守的AAI（Alpha-Amylase Inhibitors）结构域。对其进行同源性比对及系统进化树分析发现，Cm2S与青蒿（Artemisia annua）种子贮藏蛋白AaSSP6亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示，Cm2S蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。荧光实时定量PCR分析表明，Cm2S在菊花的胚中特异性表达，且在授粉后18 d正常胚中的表达量显著高于授粉后12 d的胚，是其315.11倍，同时也显著高于授粉后18 d败育的胚，是其1.98倍。 相似文献
3.
苹果LEAFY同源基因的cDNA克隆与表达分析 总被引：11，自引：0，他引：11
从苹果的果台枝顶芽中克隆了两个长约1.4 kb的cDNA片段，分别定名为AFL1和AFL2。它们的碱基序列在编码区有90%的同源性，但在3’末端非编码区仅有约印％的同源性。它们表达的肽链氨基酸序列与小叶杨、大豆、矮牵牛等有70％以上的同源性，与番茄、金鱼草、拟南芥有近70%的同源性，证明它们是LFY的同源基因。RT-PCR的结果表明，生长期AFL2在萼片、子房、根、茎、叶以及果台枝顶芽中都有表达，而AFL1只在果台枝顶芽中表达；在不同发育时期的果台枝顶芽中，AFL1在顶芽停止营养生长转向生殖生长以后才清晰表达，而AFL2在生长期6~10月都有表达。因此认为苹果中的这两个LFY同源基因虽有共同的起源，但是在功能上存在差异，在花和营养组织的发育中起不同的作用。DNA印迹分析表明，在苹果属及近缘的梨属植物中LFY同源基因是多拷贝的。 相似文献
4.
荔枝败育胚S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的全长扩增和序列分析 总被引：3，自引：1，他引：3
从荔枝‘桂味’的败育胚中提取总RNA，利用GeneRacerTM Kit将RNA经去磷酸化反应、去mRNA的帽子结构及RNA Oligo连接，反转录合成cDNA，以cDNA为模板，分别用SSH分离得到的胚败育相关差异表达s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的部分cDNA序列(599 bp)设计出3’和5’端基因特异引物，进行PCR末端扩增。荔枝败育胚的s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因序列全长为1515 bp，编码393个氨基酸，与其它物种的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的核苷酸序列同源性在79%~82%之间，氨基酸序列同源性在88%～91%之间。结果表明所获得的基因为与荔枝胚败育相关的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因。关键词： 相似文献
5.
【目的】鉴定‘黄密’、‘贵妃’、‘早红’和‘软条白沙’4个枇杷品种的S基因型,为其生产栽培合理选择授粉树及杂交育种亲本选择提供科学依据。【方法】以苹果S基因高度保守区设计兼并引物对4个品种的基因组DNA进行PCR扩增,片段回收、克隆及测序,分别采用Blast软件和Bioedit软件进行同源性检索和结构分析。【结果】从参试的4个品种中共分离了4个S等位基因,分别为S2、S5、S6和S31,其中S31-RNase为新分离的枇杷S-RNase基因,Gen Bank登录号为:KC131133。所克隆获得的4个枇杷S-RNase基因均克隆到4个保守区(C2、C3、RC4和C5)和1个高变区(HV),具有与苹果S基因相同的氨基酸序列结构。【结论】确定了参试4个枇杷品种S基因型分别为:‘贵妃’S2-S6、‘黄密’S2-S5、‘早红’S5-S6、‘软条白沙’S6-S31。 相似文献
6.
月季切花乙烯受体ETR1 cDNA克隆及其序列分析* 总被引：6，自引：0，他引：6
根据乙烯受体基因ETR1 保守区设计引物, 分别以瓶插寿命差异显著的月季切花品种‘德克萨斯’和‘维亚蒂’为材料, 通过RT-PCR 从花瓣中扩增出了797 bp 的cDNA 片段, 它编码265 个氨基酸。测序和序列分析表明,‘德克萨斯’重组质粒中插入片段的核苷酸序列之间完全相同, 命名为pRT-ETR1。而‘维亚蒂’所获得的重组质粒中插入片段的核苷酸和氨基酸序列之间存在差异, 同源性分别为85. 2 %和92. 1 % , 分别命名为pRV-ETR1-V4 和pRV-ETR1-V5。pRV2 ETR12V5 的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT2 ETR1 的同源性均达99 %以上; pRV-ETR1-V4 中的核苷酸和氨基酸序列与‘德克萨斯’pRT-ETR1 的同源性分别为85. 0 %和92. 5 %。上述插入片段与桃、苹果、天竺葵、拟南芥等植物的ETR1相应区域高度同源, 其氨基酸同源性均大于90 %。 相似文献
7.
柑桔LEAFY同源基因片段分离及特性研究 总被引：16，自引：0，他引：16
根据不同植物LEAFY ( LFY) 同源基因3’端序列高度保守性, 设计合成简并引物, 采用PCR 技术首次从柑桔基因组DNA 中分离出一条长883 bp 的柑桔LFY 同源基因( csLFY) 片段。序列分析表明, 所扩增的883 bp DNA 片段中包含一个长476 bp 的内含子, 拼接位点与其他植物的LFY 同源基因一致。由外显子推导的氨基酸序列与其它植物LFY 同源基因的相应区域氨基酸序列同源性为77 %～97 % , 其中与烟草NFL 和矮牵牛ALF 的同源性最高, 达到97 %。RT—PCR 研究表明, csLFY 在柑桔成年结果枝上的花芽和营养芽以及童期幼苗的营养芽中均有表达, 但童期营养芽中的表达强度明显低于花芽。 相似文献
8.
龙眼APETALA1(AP1)同源基因的克隆与序列分析 总被引：4，自引：0，他引：4
根据植物APETALA1(AP1)同源基因的高度保守性,设计合成一对特异引物,从龙眼基因组DNA中扩增出一条长400bp左右的基因片段,插入到pMD-T载体中。测序后分析表明,扩增得到了龙眼AP1同源基因片段。该片段序列包含两个内含子(长96bp和165bp),编码区编码36个氨基酸。与其它植物AP1同源基因的相应区域氨基酸序列具有较高的同源性,其中与花椰菜AP1基因同源性高达91%,与欧亚种葡萄、苹果、柑橘、枇杷的AP1基因同源性都在80%以上。 相似文献
9.
利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR) 对小菜蛾( Plutella xylostella ) 的γ - 氨基丁酸a(GABAa) 受体基因cDNA片段进行了克隆和序列分析。通过简并性上游引物和下游引物扩增出小菜蛾GABAa受体基因248 bp的cDNA片段。该cDNA基因片段的氨基酸与已报道的烟芽夜蛾(Heliothis viresce)的GABAa受体基因氨基酸序列同源性为100%。以GABAa受体基因片段为基础, 构建了优化的半定量RT-PCR法, 以18S rRNA为内标, 研究小菜蛾不同组织以及不同发育阶段GABAa受体基因表达的差异。结果表明, GABAa受体基因在头部表达量最高, 胸部次之, 腹部最低; 在不同发育阶段的表达量差异不大。 相似文献
10.
利用c DNA-AFLP 技术研究苹果柱型与非柱型c DNA的差异表达 总被引：1，自引：0，他引：1
以苹果(Malus×domestica Borkh. ) 柱型品种舞姿、非柱型品种富士及其杂交F1群体中柱型、非柱型单株为研究试材, 应用cDNA-AFLP ( cDNA-amp lified fragment length polymorphism) 技术, 研究柱型与非柱型苹果cDNA的差异表达, 探讨了苹果柱型基因Co表达的分子机制。通过64对引物组合的cDNA-AFLP分析获得了1 630条在柱型与非柱型苹果中差异表达的片段。经过BSA ( bulked segregant analysis) 分析和反向Northern杂交鉴定, 获得了11个差异表达的cDNA片段, 并进行了克隆、测序和序列同源性检索分析。有5个片段在GenBank数据库中发现同源序列, 其余的6个功能未知。核酸和氨基酸比对分析中同源性最高的是片段A7和A16。A7的核苷酸序列同源于红叶石楠Photinia fraseri 26S核糖体RNA (97% ) 、蛋白同源于玉米的细胞色素P450单加氧酶(91% ) , A16的核苷酸(85% ) 及蛋白(93% ) 同源于直果草属Triphysaria versicolor的α-expansin 2基因。对A7、A16两个候选基因片段再进行正向Northern杂交验证,在富士中表达最强, 在非柱型后代、柱型后代及舞姿中表达依次减弱。由此推断, 由细胞色素P450单加氧酶基因所调控的赤霉素GAS变化影响了苹果柱型性状的表达。 相似文献
11.
荔枝胚败育差异表达基因cDNA 片段的克隆及序列分析 总被引：4，自引：2，他引：4
利用抑制消减杂交(Suppressive subtraction hybridization , SSH) 克隆荔枝败育胚的差异表达基因cDNA 片段。分别以荔枝‘桂味’正常发育胚为driver (驱赶子) , 败育胚为tester (检测子) , 建立差异表达cDNA 文库, 代表桂味败育胚特异表达的cDNA。经Virtual Northern 检测, 在桂味正常发育胚/ 败育胚差异表达cDNA 文库中得到3 个阳性克隆, 序列分析表明这3 个克隆对应的两个序列在荔枝中为首次报道。 相似文献
12.
柑桔授粉处理和单性结实子房（幼果）内源IAA,ABA和ZT含量的变化 总被引：44，自引：2，他引：42
广橙在授粉后３天内即完成受精，与未授粉子房相比，授粉子房迅速膨大，授粉处理可使内源ＩＡＡ、ＡＢＡ和ＺＴ水平急剧上升，尤其是在处理后的前３天。至第４天趋平缓。以每子房ｎｇ含量计，至处理后第３天，ＩＡＡ、ＡＢＡ和ＺＴ含量分别是处理开始时的６．８、５．２和４．１倍，而未授粉的分别为２．５、２．６和１．２倍，这种变化与子房（幼果）的发育密切相关。试验还分析了广橙授粉处理与内源激素平衡关系，发现授粉处理ＡＢ 相似文献
13.
不同授粉处理对沙田柚果实发育中内源激素水平变化的影响 总被引：7，自引：0，他引：7
沙田柚自花授粉果实的重量和体积均低于异花授粉处理。与未授粉子房相比,授粉子房迅速膨大。授粉处理可使子房内源激素(ＩＡＡ)、赤霉素(ＧＡ１＋３)、细胞分裂素(ＣＴＫｓ)和脱落酸(ＡＢＡ)水平急剧上升,异花授粉处理更明显。未授粉的子房内源生长促进类激素含量保持低水平,生长抑制类激素(ＡＢＡ)水平上升,这种激素水平的失衡最终造成未授粉子房的迅速凋落。果实生长发育初期,自花授粉幼果内源激素促进类激素含量低于异花授粉处理,ＡＢＡ水平明显高出后者,果实迅速增长期间,内源ＩＡＡ和ＧＡ１＋３有两个明显的高峰期,显示ＩＡＡ和ＧＡ１＋３含量与果实迅速膨大有密切关系。果实发育后期直至成熟,内源ＡＢＡ水平逐渐升高。测定果实发育整个过程的ＡＢＡ/(ＩＡＡ＋ＧＡ１＋３＋ＣＴＫｓ),未发现规律性的变化。 相似文献
14.
利用cDNA-AFLP技术研究大白菜白引2号杂交种及其亲本在幼苗期、莲座期、结球期的基因差异表达。结果表明：在3个发育期,发现有29条差异片段,其中5个差异片段出现在幼苗期,14个差异片段出现在莲座期,10个差异片段出现在结球期|19个差异片段在杂种中表达,3个差异片段在双亲中同时表达,2个差异片段仅在母本中表达,5个差异片段仅在父本中表达。将29个差异片段的序列在白菜基因组序列数据库网站（http://brassicadb.org/brad/）进行BLAST分析,均找到了对应的染色体位置。其中17个差异片段分别有明确的基因及编码蛋白与其相对应。其中有两个基因片段分别含有AP2/EREBP结构域和PPR结构域,这两个结构域在控制植物生长发育方面具有重要作用。 相似文献
15.
AIM: To obtain differentially expressed cDNA fragments in the cerebellum of rats and screen unknown expressed sequence tag (EST). METHODS:Suppression subtractive hybridization (SSH) was carried out, in which the cDNA fragments of cerebellum were taken as "tester" and correspondingly that of cerebrum and brain stem as "driver". The homogeneous sequences between the tester and driver were excluded and the rare sequences in cerebellum were enriched by SSH. The differentially expressed cDNA fragments were further cloned for the construction of subtracted cDNA libraries and sequencing. RESULTS: 32 clones were selected and 34 cDNA fragments were sequenced. 8 of 32 were proved to be true positive with reverse Northern assay, 13 of 34 fragments were identified to be new cDNA fragment and given the gene sequence numbers by GenBank (AW288461-AW288474).CONCLUSION:SSH is very useful method for screening differentially expressed genes.Our data may be helpful to understand the molecular mechanism of brain function. 相似文献
16.
利用cDNA．AFLP技术鉴定甘蓝显性核不育基因相关表达序列 总被引：6，自引：7，他引：6
利用cDNA—AFLP技术， 比较分析了一个甘蓝与两个青花菜自交系回交转育的显性核基因雄性不育材料与对应可育亲本植株花蕾发育过程中基因表达的差异。将花蕾混合提取RNA合成eDNA建立6个eDNA池，分析128个弓l物组合获得了26000个片段，共鉴定24个片段与雄性不育相关，其中13条表现为质的差异，11条表现为量的差异；将其中引物组合A16T15产生的300 bp左右的差异片段进行克隆测序，BLAST结果表明，该序列与花粉特异性相关的硫氧还蛋白氨基酸序列同源性达89％ 。 相似文献
17.
梨自交不亲和新基因S35-RNase的克隆与表达分析 总被引：3，自引：0，他引：3
通过RACE技术, 从早酥梨花柱中分离到一个长度为681 bp的自交不亲和基因, DNA序列分析表明, 其开放读码框由227个氨基酸组成, 具有S2RN ase基因特有的保守组氨酸和半胱氨酸残基、高变区和保守区等特征序列, 与己登录的S4-RNase基因DNA序列同源性最高, 达94% , 登录为一个新基因:S35-RNase, GenBank接收号为DQ224344。通过Northern杂交, 发现该基因只在花柱中特异性表达, 并且在大铃铛期的表达量比花前和花后3 d的表达量都高。 相似文献
18.
AIM: To reveal the molecular mechanisms of heat adaptation by study the change of gene expression in rat liver when the rats exposed to hyperthermia stress and heat adaptation. METHODS: Differentially expressed genes in rat liver in association with heat adaptation were identified using the suppression subtractive hybridization (SSH) technique to prepare subtracted cDNA libraries in heat adaptation. The PCR-amplified cDNA fragments generated by SSH were then ligated into the plasmid pGEM-T (Promega). PCR-select differential screening technique was used to filtrate differentially expressed genes. Each of these differentially expressed genes was sequenced and was compared to known sequences in the GenBank database. RESULTS: eight up-regulating expressed genes segments were isolated from the up-regulating differentially expressed library, three of which were known gene such as p53 and five genes were new expressed sequence tags. CONCLUSION: Up-regulating expressed genes such as p53 maybe participate in the signal transduction pathway of heat adaptation. 相似文献